36. Микробиологические методы контроля пп: проблемы, факторы, влияющие на точность микробиологических методов; подготовка проб для микробиологического анализа.

Факторы влияющие на результаты:

- влияние сопутствующих микробов-антагонистов

- образование трудноразделимых комплексов

- присутствие посторонних хим-их в-в

- нахождение микроорганизмов в «стрессовом» состоянии

- выбор исследуемого метода

- распределение микроорганизмов в образце

- природа микробиоты продукта

- наличие антибиотиков, анилиновых красителей и др.

- история пищевого продукта до проведения анализа

- относительное кол-во микроорганизмов в образце

- величина рН, активность воды и окислительно-восстановительный потенциал питательной среды

- адекватность используемых плотных питательных сред относительно наличия питательных в-в

- тип использованного растворителя

- t и продолжительность инкубации

37. Базовые микробиологические методы: стандартный подсчет колоний.

Стандартный подсчет колоний:

- глубинный посев

- поверхностный (предпочтителен для психрофилов, строгих аэробов)

Усовершенствование – спиральный плоттер (механическое устройство, которое распределяет образец по поверхности вращающейся чашки Петри). Жидкий образец подается специальным шприцом в центр чашки, а распределяющее устройство перемещает образец к краям по архимедовой спирали, получая соотношение микроорганизмов 10000:1 (край:центр). Подсчет КОЕ осуществляется с помощью специальной сетки

Спиральный плоттер:

ПРЕИМУЩЕСТВА: - Используется меньше агара, чашек, растворителя, пипеток

- Большая производительность – в течение 1 ч – в 2-3 раза больше образцов м.б. проанализировано

НЕДОСТАТКИ: - Частицы образцов могут засорять распред-тель, поэтому исп-ют только для ж-их прод-ов типа молока

- Если использовать лазерный счетчик – очень дорого для лабораторий, которые не анализируют большое кол-во чашек

- мембранные фильтры (размер пор 0,45 мк) помещаются на плотную среду и инкубируются

Усовершенствования - использование флуоресцентных красителей и микроскопа для подсчета микроколоний. После фильтрации и определенной обработки фильтра его помещают на питательную среду и инкубируют в течение 3 ч ( для грам «-») или 6 ч (для грам «+»). Затем микроскопируют и подсчитывают КОЕ. Для колиформных, стафилококков и псевдомонад такие количества как 1000/г могут быть выявлены в течение 8 ч.

- микроскопический подсчет колоний:

1. для подсчета микроколоний, котор. развиваются в агаре, наслоенном на микроск-ое предметное стекло

2. 0,1 мл смеси продукта и агара распределяется на предметное стекло

3. Инкубируют, высушивают и окрашивают

4. Подсчитывают КОЕ с помощью микроскопа

- метод агаровых капелек

1. на один образец испол-ют 3 пробирки с 9-мл питат-ой среды, капил-ую пипетку, пустые чашки Петри и микроскоп

2. 1 мл гомогената продукта растворяют в первой пробирке с расплавленным агаром (45 °С) и перемешивают

3. На дно пустой чашки Петри переносят 5×0,1 мл смеси из 1-ой чашки и 0,1 мл во 2-ую пробирку и манипуляции повторяют.

4. Результат – три чашки Петри с капельками агара с продуктом в 3-х разведениях

5. Инкубируют 24 ч и затем подсчитывают выросшие колонии при увеличении 10×

- метод сухих пленок (коммерческое название Petrifilm). Используется как для подсчета аэробных колоний, так и специфических групп.

Разновидности:

1. готовые микробиологические подложки Rida Count

2. Сухие среды Compact Dry