Метод Каковского-Аддиса.

Принцип основан на определении форменных элементов выделенных с мочей за сутки.

Ход определения:

1. Мочу собирают за 12 часов в чистую посуду и хранят в темном месте в закрытом виде.

2. Измеряют количество мочи.

3. Тщательно перемешивают.

4. Для получения осадка берут в градуированную центрифужную пробирку 1/5 часть часовой пор­ции полученного объема.

5. Центрифугируют 5 минут при 2000 оборотах в минуту.

6. Отсасывают надосадочную жидкость пипеткой, оставляя 0,5 мл осадка.

7. Осадок мочи тщательно перемешивают и заполняют счетную каме­ру с сеткой Горяева.

8. Считают отдельно эритроциты, лейкоциты и цилиндры по всей сетке.

9. Количество форменных элементов выделенных с мочей за сутки вычисляют по формуле.

Норма.

Показатели пробы Каковского—Аддиса у здорового человека: эрит­роцитов до 1000 000

(1 х 10⁶/сут.), лейкоцитов до 2000 000 (2х 10⁶/сут.), цилиндров до 20 000 (2х10⁴/сут.). Недостатком метода является дли­тельное хранение мочи (сутки), что может привести к лизису клеточ­ных элементов.

Метод Амбюрже

Принцип основан на определении форменных элементов, выделенных с мочой за одну минуту.

Ход исследования:

1. Мочу собирают 3 часа

2. Измеряют количество.

3. Перемешивают, берут 10 мл.

4. Центри­фугируют в течение 5 мин при 1500 об/мин.

5. Надосадочную жидкость отсасывают, оставляя 1 мл.

6. После пере­мешивания заполняют камеру Горячева.

7. Считают фор­менные элементы над всей сеткой.

8. Количество форменных элементов выделенных с мочей за одну минуту вычисляют по формуле.

В норме за 1 мин с мочой выделяется до 2 000 лейко­цитов и 1000 эритроцитов.

Устройство и правила работы с камерой Горяева.

Камера Горяева представляет толстое, прямоугольное, прозрачное стекло, прорезанное четырьмя поперечными бороздами. Борозды делят стекло на пластинки – 2 боковые и одну среднюю. Средняя пластинка пересечена поперечной канавкой на две равные части. Средняя пластинка на 0,1 мм ниже боковых. На каждой половинке средней пластинки нанесена сетка Горяева. Перед работой притирается покровное шлифованное стекло. Оно должно прикрывать обе боковые и среднюю пластинки. Появление радужных колец Ньютона, свидетельствует о том, что стекло притерто правильно. Между средней пластинкой и покровным стеклом имеется щель. Это и есть камера, в которую заливают биопробу.

Глубина камеры 0,1 мм. Сетка Горяева квадратная. Сторона сетки 3мм, площадь 9мм². Сетка разделена на 225 больших квадратов (15 по горизонтали, 15 по вертикали). Часть больших квадратов (через два на третий) разделено на 16 малых. Сторона малого квадрата 1/20 мм. Площадь малого квадрата 1/20 х 1/20 = 1/400 мм². Высота камеры 1/10 мм. Объем крови над малым квадратом 1/400 х 1/10 = 1/4000 мкл (или мл).

Подсчет в камере производят под малым увеличением (объектив 8, окуляр 10 или 15, конденсор опущен, диафрагма прикрыта). Камеру устанавливают на предметный столик микроскопа. Под малым увеличением находят изображение камеры. Устанавливают в поле зрения верхний левый угол сетки камеры.

Подготовка камеры Горяева к работе. Камеру и шлифовальное стекло моют под проточной водой, насухо вытирают. На участок камеры с нанесенными сетками укладывают шлифованное покровное стекло, осторожно нажимая большими пальцами на края покровного стекла, его притирают к боковым пластинкам камеры до появления радужных колец Ньютона. С помощью стеклянной палочки каплю исследуемой жидкости помещают перед щелью, образующейся между покровным стеклом и счетной камерой. В силу закона капиллярности жидкость заполняет пространство подпокровным стеклом над сеткой. При заполнении камеры надо стараться, чтобы исследуемая жидкость не растекалась в борозды камеры и, чтобы в камеру не попали пузырьки воздуха. Все это может изменить правильное распределение элементов крови в камере. Равномерность заполнения и распределения форменных элементов и цилиндров по сетке камеры проверяют под микроскопом. После заполнения камеру оставляют стоять на 1-2 мин., чтобы элементы осели на дно и движение их прекратилось.