2.7.Индексы красной крови

2.7.1 Подсчет индексов красной крови

Цветовой показатель ( Ц. П )

Ц. П. – индекс отражает относительное содержание гемоглобина в эритроцитах. Вычисляют цветовой показатель по формуле:

Hb г/л х 3

три первые цифры числа эритроцитов

например: концентрация гемоглобина 150 г/л, число эритроцитов 4,5 х 10 12 в 1 л крови= 150х 3/ 450= 1,0

Нормальные величины. У здоро­вых цветовой показатель находится в пределах 0,86—1,05.

Клиническое значение. По вели­чине цветового показателя принято делить ане­мии на гипохромные, нормохромные и гиперхромные. Гипохромные анемии (с цветовым по­казателем менее 0,86) широко распространены и наблюдаются, прежде всего при дефиците же­леза, вызванном различными причинами. Осо­бенно выраженной гипохромией (0,6—0,5 и ниже) характеризуются железодефицитные ане­мии, обусловленные хроническими кровопотерями.

Менее выраженная гипохромия эритроцитов (0,7—0,8) наблюдается при железодефицитной анемии беременных, при инфекциях, опухолях. Редко встречаются гипохромные анемии, не свя­занные с дефицитом железа и обусловленные нарушением синтеза гемоглобина в результате свинцового отравления или наследственного по­вреждения синтеза порфиринов и цепей глобина (Р-талассемии, а-талассемии и др.).

Повышение цветового показателя — гиперхромия — является характерным лабораторным признаком различных В-дефицитных и фолиево-дефицитных анемий. Особенно выражена гиперхромия эритроцитов (1,2—1,3) при рецидиве анемии Аддисона — Бирмера. Нормохромные анемии наблюдаются при некоторых гемолитиче­ских формах малокровия, острых кровопотерях, лейкозах, сопутствуют циррозу печени.

Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците (СГЭ)

Наряду с Ц. П. высчитывают более достоверную абсолютную величину - весовое содержание гемоглобина в пикограммах (пг) в одном эритроците - СГЭ получают путем деления количества гемоглобина в граммах на 1 л на число эритроцитов в миллионах: содержание гемоглобина в эритроците:

СГЭ= гемоглобин г/л

эритроциты млн.

В норме СГЭ составляет 27- 35 пг.

Например: количество гемоглобина 145 г/л, количество эритроцитов 4,9 х 10 12 / л (число миллионов эритроцитов- 4,9):

СГЭ= 145

4,9

Клиническое значение: Снижение отражает гипохромию и наблюдается при железодефицитных анемиях, повышение имеет место при макроцитарных и особенно мегалоцитарных анемиях

2.8 Приготовление мазков крови

2.8.1 Методика приготовления мазков крови

Способ № 1: Стерильным предметным стеклом прикасаются к капле крови на месте укола. Не следует прикасаться стеклом к коже пальца.

Способ № 2: Кровь берут с индивидуального стерильного капилляра Панченкова на стекло Мазок делают шлифовальным стеклом, поставив его под углом в 45° к предметному стеклу впереди капли. Подведя стекло к этой капле, ждут, пока кровь расплывется вдоль его ребра, затем быстрым легким движением проводят шлифовальное стекло впе­ред, не отрывая от предметного раньше, чем иссякнет вся капля. Нельзя сильно прижимать на стекло , т.к. при этом травмируются форменные элементы крови.

Правильно сделанный мазок имеет желтоватый цвет (тонкий), не достигает краев стекла 1-1,5 см и заканчивается в виде следа (« усов», « метелочки»). Мазки высушивают на воздухе и маркируют простым карандашом (пишут фамилию).

Окрашивание сухих мазков производят после предваритель­ной фиксации.

Требования к мазку

1.Вся капля крови должна быть использована для мазка

2.Мазок должен занимать примерно 3\4 предметного стекла

3.Хорошо должен быть выражен край мазка

4.Мазок должен быть полупрозрачен и иметь желтоватый тон

Фиксирующие жидкости:

1.Метиловый спирт (3—5 мин) (унифицированный)

2.Смесь Никифорова из равных частей абсолютного этилового спирта и эфира (30 мин).

3. Краситель-фиксатор Мая - Грюнвальда (3 мин)- (унифицированный)

Клиническое значение фиксирующих жидкостей: Фиксация предохраняет эритроциты от гемолиза и закрепляет мазок на стекле.

Основные гематологические краски:

метиленовый синий и его производное — азур I (метиленовый азуровый) и азур II (смесь равных частей азура I и метиленового синего), к кислым — водорастворимый желтый эозин

Окраски мазков

Реактивы для окраски мазков по Нохту. 1. Основной раствор азура II: 1 г краски растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Оставляют в посуде из темного стекла на 12—14 дней при комнатной температуре, после чего используют. 2. Основной раствор эозина калия: 1 г краски растворяют в 1000 мл дистил­лированной воды. Оставляют в посуде из тем­ного стекла при комнатной температуре на 12— 14 дней, затем используют. 3. Фосфатный буфер (смесь Вейзе) рН 7,4—7,5: смешивают 0,49 г ка­лия фосфата однозамещенного безводного (КН₂Р0₄) и 0,909 г натрия фосфата двузамещенного безводного (Na₂HPO,t) и дистиллиро­ванной воды 1000 мл. 4. Рабочий раствор азур-эозина: перед употреблением смешивают 25 мл основного раствора азура II, 20 мл основного раствора эозина калия и 55 мл буферного раст­вора (пропорции красителей могут варьировать, их устанавливают опытным путем при приготов­лении свежих партий основных растворов).

Реактивы для окраски мазков по Паппенгейму. 1. Раствор эозин-метиленового синего по Маю — Грюнвальду. При от­сутствии готового раствора красителя его можно приготовить, растворив 1 г сухого красителя в 1000 мл метилового спирта. Раствор готов к употреблению через 4 дня. 2. Рабочий раствор азур-эозина по Нохту.

Специальное оборудование. Кювета для фиксации и окраски мазков со шта­тивом-контейнером (при отсутствии используют эмалированные лотки с установленными для стекол «рельсами» из пары стеклянных палочек, соединенных резиновыми трубками).

Фиксация мазков. Фиксатор мазков наливают либо в кювету, либо в широкогорлую посуду с притертой пробкой. Высушенные на воздухе мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с фиксатором (или кладут по одному в посуду) на 5—10 мин. Вынимают кон­тейнер со стеклами из кюветы (или вынимают пинцетом стекла и устанавливают в штативе), оставляют на воздухе до полного высыхания.

Окраска по Нохту.

Высохшие фикси­рованные мазки, не вынимая из контейнера, по­мещают в кювету с рабочим раствором краски на строго определенное время, подобранное для каждой партии красителя (от 20 до 45 мин). При отсутствии кюветы с контейнером стекла поме­щают горизонтально на «рельсы» (мазком квер­ху) и наливают высокий слой (3—4 мл на мазок) рабочего раствора краски. Вынимают контейнер со стеклами из кюветы с красителем и поме­щают его в кювету с водопроводной водой (при отсутствии кюветы краску со стекол смывают, не снимая их с «рельсов», водопроводной водой). Высушивают мазки на воздухе.

Окраска по Романовскому — Г и м з е

Производится так же, как и по Нохту: в качестве красителя используют готовый раст­вор Романовского—Гимзы, который перед упот­реблением разводят из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды(1:10). Время окраски устанавливают опытным путем для каждой но­вой партии красителя (25—40 мин) = 30 мин