2.3.1. Микроскопические методы исследований на лейшманиозы

Необходимые материалы и оборудование

Материал из инфильтрата кожи

Инсулиновый или туберкулиновый шприц

Физиологический раствор

Глазной узкий скальпель

Этиловый спирт 96°-й

Раствор краски Романовского-Гимза

Дистиллированная вода

Фильтровальная бумага

Мерная лабораторная посуда

Пинцеты

Часы песочные или сигнальные

Специальные контейнеры для окрашивания препаратов крови или стеклянные рельсы и кюветы

Приспособления для высушивания препаратов

Перчатки резиновые

Обезжиренные предметные стекла

Иммерсионное масло

Микроскоп

Окрашивание препаратов можно проводить двумя способами:

препараты с мазками вертикально погрузить в рабочий раствор краски, налитый в специальные ванночки или контейнеры, без соприкосновения друг с другом. Данный способ окраски наиболее приемлем, когда есть необходимость окраски большого количества препаратов. В стандартном контейнере можно окрасить 20 препаратов при вместимости 90 мл краски. Повторное использование краски недопустимо;

препараты расположить горизонтально (мазками вверх) на стеклянных рельсах, лежащих на кюветах. Осторожно нанести краску. Этот способ окраски приемлем при окрашивании небольшого количества препаратов. Расход краски составляет примерно 3 мл на 1 препарат.

Время окрашивания зависит от температуры окружающей среды. При температуре 20-25 °С окрашивать в течение 35-40 мин. При более низкой температуре время окрашивания увеличивается. При очень высокой температуре (30 °С) время окрашивания может быть сокращено до 20 мин.

Результат окрашивания

Правильно окрашенный макроскопический препарат имеет синий цвет с сиреневым оттенком, а при его микроскопии:

ядра лейкоцитов - фиолетово-красного цвета с различимой структурой;

зернистость базофилов - фиолетового цвета;

зернистость эозинофилов - красного цвета;

у моноцитов на фоне серо-голубой цитоплазмы может быть розовая зернистость;

зрелые эритроциты - розового цвета с сероватым оттенком;

ретикулоциты - сиренево-голубые;

тромбоциты - сиренево-розового цвета с различимой сетчатостью.

2.3.2. Посев возбудителей лейшманиозов на питательную среду с последующим культивированием

Необходимые реактивы и оборудование для культивирования

Посуда химическая стеклянная: воронки, колбы мерные плоскодонные конические (25, 50, 100, 200, 1000 мл), цилиндры мерные (25, 100, 1000 мл), пастеровские пипетки (5 и 10 мл), пипетки Мора (30, 50 и 100 мл), пробирки 15-25 мл с крышками, предметные стекла

Химические реактивы (х.ч.): хлористый натрий, бактериологический агар, бактериологический пептон, вода дистиллированная

Говяжий экстракт

Среды питательные: среда 199 с солями Хенкса с глутамином, среда RPMI-1640 с глутамином

Кровь кролика или человека

Антибиотики: стрептомицин и пенициллин

Штативы для пробирок

Автоматический пипеточный дозатор

Микроскоп (монокуляр или бинокуляр) с осветителем, объективом 40, окуляром 10

Холодильники бытовые или холодильные шкафы с морозильной камерой, обеспечивающей температуру от 0 до 8 °С

Термостат суховоздушный лабораторный, поддерживающий температуру в диапазоне 25-37 °С

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г

Водяная баня лабораторная с диапазоном температур от 15 до 60 °С

Стерилизатор паровой медицинский

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды по ГОСТ 6709-72

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов