1.2.3. Метод исследования жизнеспособности паразита in vivo (биопроба)

Применяется в специализированных научно-исследовательских лабораториях.

Для определения жизнеспособности и штаммовых особенностей возбудителя проводят исследование по имплантации паразитарной ткани в брюшную полость лабораторных животных, восприимчивых к альвеококкозу. Проведение такого исследования стало возможным после первого внутрибрюшного успешного заражения хлопковых крыс изолированными микроскопическими ацефалоцистами из паразитарного "узла" в печени оперированного больного альвеококкозом. Получению тех же изолированных ацефалоцист альвеококкоза способствует использование недавно выявленного феномена сниженной адгезии хитиновой оболочки ларвоцист альвеококка к окружающей соединительнотканной капсуле в печени у человека. Это свойство обеспечило возможность выделения из малых фрагментов пораженной альвеококком печени больного (постоперационный материал) большого количества ацефалоцист альвеококка, пригодных для диагностического и экспериментального исследований (рис.8).

1 - хитиновая оболочка; 2 - полость ларвоцисты альвеококка

Рис.8. Структурные варианты популяции ларвоцист типичного альвеококка из печени больной Я. Нативные препараты, полученные при фракционировании свежего постоперационного материала. Длина измерительной шкалы 100 мкм

Отбор проб

В качестве паразитарного материала используют выделенный в день операции альвеококковый "узел" с прилежащими участками печени.

Необходимое оборудование и материал

Инокулят из пораженного органа

Хлопковые крысы

Подготовка к исследованию

С помощью полученного инокулята осуществляют имплантацию ацефалоцист инъекционно в брюшную полость хлопковых крыс обоего пола в возрасте 1,0-1,5 месяцев. Доза инвазированного материала составляет 200-500 ацефалоцист на одно животное.

                

Особенности течения вторичного альвеококкоза у хлопковых крыс (скорость пролиферации, созревания ларвоцист, прироста биомассы паразита) определяют при вскрытии животных в разные сроки после заражения (рис.9).

Рис.9. Экспериментальный вторичный альвеококкоз хлопковых крыс, 86 дней после внутрибрюшинного заражения животных ацефалоцистами альвеококка из резецированного фрагмента печени больного К. Передняя брюшная стенка удалена

Результаты исследования биопробы позволяют:

оценить жизнеспособность паразита у больного;

выявить штаммовые особенности исследуемого изолята возбудителя (морфология, скорость роста и созревания как на ларвальной, так и на имагинальной стадиях развития), что представляется важным как в эпидемиологическом аспекте (выявление новых природных очагов альвеококкоза), так и в тактике консервативного лечения больных (необходимость применения прозиквантеля в сочетании с карбаматбензилендазолами при лечении больных, в паразитарных кистах которых обнаружены протосколексы альвеококка).

1.3. Лабораторная диагностика трихинеллеза

Лабораторная диагностика трихинеллеза проводится:

у лиц с подозрением на трихинеллез - методом иммуноферментного анализа (ИФА-исследование) в соответствии с действующими методическими указаниями или, в исключительных случаях, методом биопсии мышечной ткани;

если трихинеллы найдены в мясе, с употреблением которого в пищу связывается данное заболевание, то диагноз последнего может считаться бесспорным и применение биопсии мышечной ткани больного излишне. Исследование мяса (остатков мясных продуктов) по эпидемиологическим показаниям проводится в испытательных лабораторных центрах Роспотребнадзора и Госветнадзора в соответствии с действующими нормативными документами;

при судебно-медицинской экспертизе, когда исследуются гистологические препараты секционного материала с подозрением на трихинеллез.

При исследовании мышечной ткани на наличие возбудителей трихинеллеза используются два метода:

трихинеллоскопии;

переваривания в искусственном желудочном соке.

Биопсия мышечной ткани (поперечнополосатых мышц)

Хирургическим путем или на секции получают биопсию мышечной ткани двуглавой или икроножной мышц (ближе к сухожилию). Материал помещают в стерильную стеклянную посуду с физиологическим раствором.

Лабораторное исследование проводят сразу после биопсии. Если лабораторное исследование откладывается на какой-то срок, пробы мышц помещают в консервант или замораживают. Консервантом может служить концентрированный (30-50%-й) раствор хлорида натрия.