3.6 Лабораторная работа № 6 лабораторное получение эргостерина

Цель работы: в лабораторных условиях получить эргостерин из сублимированных хлебопекарных дрожжей.

Содержание работы: провести гидролиз, выделить кристаллы эргостерина, перекристаллизовать, измерить температуру плавления..

Материальное обеспечение: термостатированная качалка с водяной баней, колба ёмкостью 1 л, термометр; сублимированные хлебопекарные дрожжи – 40 г, гидроксид калия – 6 г, спирт этиловый 96 %-ный – 105 мл; спирт этиловый 70 %-ный; бензол.

Общие сведения: эргостерин – эргоста-5,7,22-триен-3-ол – провитамин D. Одним из эффективных продуцентов эргостерина является Saccharomyces cerevisiae.

Методика

В плоскодонную колбу объёмом 1000 мл загружают 40 г дрожжей, 6 г твёрдого гидроксида калия и 65 мл 96 %-ного этилового спирта. Смесь перемешивают на термостатированной качалке с водяной баней при температуре 78-84 °С в течение 6 часов. После этого смесь отфильтровывают.

Фильтрат упаривают до густого, тягучего состояния, при этом содержание сухих веществ повышается до 36-39 %. В первые 7-8 часов упаривания масса вспенивается, поэтому упариваемую жидкость следует помешивать. После гидролиза белка пена в жидкости исчезнет. После прекращения пенообразование упаривание продолжают в течение 5 часов.

После упаривания практически твёрдый концентрат растворяют в 40 мл этилового спирта и выдерживают в термостатированной качалке при 78 °С до получения однородного коричневого раствора. После этого колбу охлаждают и ставят в холодильник при 0 °С до выпадения кристаллов эргостерина. Выпавшие кристаллы отфильтровывают на фильтре Шота.

Проводят перекристаллизацию, для этого кристаллы последовательно промывают 70 %-ным этиловым спиртом, спиртово-бензольной смесью (80:20), повторно перекристаллизовывают.

Полученные кристаллы эргостерина высушивают и определяют температуру плавления, которая должна составлять 157-159 °С. Выход эргостерина составляет 0,20-0,21 %.