3.2.3 Определение общего количества микроорганизмов в закваске молочнокислых бактерий

Метод предельных разбавлений

Этот метод широко используется в микробиологической практике. Исследуемая проба перед засевом разводится таким образом, чтобы возможен был количественный учет степени разведения и последующий подсчет клеток микроорганизмов (от 30 до 300 колоний на чашке Петри). Метод предельных разведений применяется не только для выделения чистых культур, но также для определения соотношения различных видов микроорганизмов в смешанной популяции и определения степени зараженности производственных субстратов посторонними микроорганизмами при проведении микробиологического и санитарного контроля производства.

Для метода предельных разведений нужно подготовить:

– пробирки со стерильным физиологическим раствором (0,9 % мас. раствор хлорида натрия), разлитого по 9 см³;

– стерильные пипетки на 1 см³ (градуированные или пипетки Мора);

– стерильные чашки Петри;

– агаризованные питательные среды.

После тщательного перемешивания из пробирок с разведениями 10⁴-10⁸ отбирают стерильной пипеткой по 1 см³ суспензии клеток и вносят в чашки Петри. Затем туда же выливают 10…15 мл расплавленной и охлажденной до 50…55 ºС питательной среды, осторожно перемешивают круговыми движениями, после чего оставляют чашки для застывания среды. Чашки с посевами ставят в термостат при 37 ºС. Через 48…72 ч подсчитывают все выросшие колонии.

Подсчитав количество колоний в одной чашке, и допуская, что каждая колония выросла из одной клетки, подсчитывают, сколько микроорганизмов содержалось в 1 см³ (1 г) исследуемого материала. Для этого число колоний умножают на разведение. Учитывают те чашки, в которых выросло не более 300, но не менее 30 колоний (единица измерения – КОЕ/г).

3.2.4 Внесение инокулята в питательные среды

В стерильных условиях в питательные среды (в 500 мл среды в колбе ёмкостью 1 л и в 250 мл среду в колбы ёмкостью 500-750 мл) вносят 1 % сушеных хлебопекарных дрожжей или 5 % предварительно подготовленной суточной культуры (для приготовления засевных дрожжей используют стерильное солодовое сусло).

В стерильных условиях в питательные среды (в 500 мл среды в колбе ёмкостью 1 л и в 250 мл среду в колбы ёмкостью 500-750 мл) вносят сухие лиофилизированные закваски молочнокислых бактерий (Эвиталия», «Трилакт», «Наринэ» или др. многоштаммовые закваски).

3.3 Лабораторная работа № 3 контроль производственной культуры

Цель работы: провести микробиологический анализ производственных дрожжей и молочнокислых бактерий.

Содержание работы: путём микроскопирования установить чистоту культуры, общее количество дрожжей, количество почкующихся, мёртвых и упитанных клеток. Методом предельных разведений провести контроль производственной культуры молочнокислых бактерий.

Материальное обеспечение: термостат, холодильник, автоклав, сушильный шкаф, рН-метр, камера Горяева;, микроскоп, бинокулярная лупа, спиртовка, пипетки, пробирки, предметные стёкла, бактериологические петли, вата, марля; 0,5 %-ный раствор йода; метиленовый синий 1:5000, чашки Петри, пробирки с физиологическим раствором, колбы с агаризованной питательной средой, баня водяная, центрифуга лабораторная.

Контроль производственной культуры

Контроль производственной культуры дрожжей проводят согласно п. 3.2.1, производственной культуры молочнокислых бактерий – согласно п. 3.2.3.

Проводят центрифугирование производственной культуры дрожжей и производственной культуры молочнокислых бактерий при частоте оборотов 3 тыс. об./мин в течение 15 минут.