13. Дайте определение простым и сложным фиксирующим жидкостям

Раствор может быть простым – состоящим из одного действующего компонента (этиловый, метиловый спирт, формалин, слабые кислоты – уксусная, пикриновая, ацетон, соли тяжелых металлов ).

Сложный фиксатор представляет собой смесь нескольких фиксирующих веществ (раствор Карнуа, фиксатор Цинкера).

Фиксатор вызывает денатурацию белков и сохраняет структуру клеток в состоянии, близком к прижизненному. Фиксацию можно проводить также путем замораживания — охлаждением жидким азотом или струей углекислого газа. Фиксация приводит к уплотнению и уменьшению объема кусочков, а также к улучшению последующей окраски клеток и тканей.

Рисунок 1.5. Примеры гистологических препаратов.

14. Назовите этапы приготовления гистологических препаратов

1. Уплотнение кусочков, необходимое для приготовления срезов, производится путем пропитывания предварительно обезвоженного материала парафином, целлоидином, органическими смолами или методом замораживания кусочков, например в жидкой углекислоте.

2. Приготовление срезов на микротоме или ультрамикротоме с помощью специальных ножей. После этого срезы для световой микроскопии приклеиваются на предметные стекла, а для электронной — монтируются на специальные сеточки.

Приготовление срезов (парафиновых и целлоидиновых) производят с помощью специальных приборов-микротомов (санные и ротационные) из замороженных кусочков- с помощью криотомов. Парафиновые, целлоидиновые и замороженные срезы имеют толщину 4-20 мкм, полутонкие – 1-2 мкм, ультратонкие – 400-800 нм.

Рисунок 1.6. – Микротом (прибор для приготовления срезов) (по R. V. Kristic):

1 – нож; 2 – парафиновый блок с заключенным в него образцом; 3 – срез; 4 – подающее устройство

Рисунок 1.7. – Ротационный микротом.

Блоки, содержащие кусочки органа, закрепляют в подвижном обьектодержателе. При его опускании на нож остаются серийные срезы, их снимают с ножа и монтируют на предметное стекло для последующей обработки и микроскопирования.

3. Окрашивание срезов (в световой микроскопии) или напыление их солями металлов (в электронной микроскопии) применяют для увеличения контрастности изображения отдельных структур при рассматривании их в микроскопе. Методы окраски гистологических структур очень разнообразны и выбираются в зависимости от задач исследования.

Окрашивание срезов позволяет выявлять разнообразные микроструктуры клеток и тканей, повышать их контрастность. Микроструктуры, отличающиеся по своим физико-химическим свойствам, по-разному воспринимают красители.

Импрегнация – метод выявления структур клеток и тканей, основанный на различной их способности удерживать или восстанавливать соли тяжелых металов (серебро, свинец, осмий, золото).

4. Заключение срезов позволяет длительное время сохранять препарат, его окраску, прозрачность и структуру. Обычно срезы заключают в канадский бальзам, предварительно произведя обезвоживание в спиртах возрастающей крепости.

15. Какие Вы знаете виды красителей?

Гистологические красители подразделяют на кислые, основные и нейтральные.

Основные красители – соли оснований (гематоксилин, метиловый синий, толлуоидиновый синий, азуры, тионин и др.), связываясь с кислотными соединениями гистологических структур, вызывают их контрастирование окрашиванием в синий цвет. Структуры, воспринимающие основные красители, называют базофильными.

Кислые красители (пикриновая кислота, эозин, эритрозин, конгорот, оранж и т.д.), связываясь с основными соединениями гистологических структур, вызывают их контрастирование в цвета красителя (красного, желтого, оранжевого и зеленого). Структуры, воспринимающие кислые красители, называют оксифильными.

Нейтральные красители содержат как основные, так и кислые красящие компоненты. Структуры, воспринимающие нейтральные красители, называют нейтрофильными.

Структуры, хорошо окрашивающиеся кислыми красителями, называются оксифильными (ацидофильными, эозинофильными), а окрашивающиеся основными — базофилъными.

Структуры, воспринимающие как кислые, так и основные красители, являются нейтрофильными (гетерофильными).

Окрашенные препараты обычно обезвоживают в спиртах возрастающей крепости и просветляют в ксилоле, бензоле, толуоле или некоторых маслах. Для длительного сохранения обезвоженный гистологический срез заключают между предметным и покровным стеклами в канадский бальзам или другие вещества. Готовый гистологический препарат может быть использован для изучения под микроскопом в течение многих лет. Для электронной микроскопии срезы, полученные на ультрамикротоме, помещают на специальные сетки, контрастируют солями марганца, кобальта и др., после чего просматривают в микроскопе и фотографируют. Полученные микрофотографии служат объектом изучения наряду с гистологическими препаратами.