Тема «методы исследования в гистологии, микроскопическая техника»
Какие уровни организации живой материи и уровни их изучения Вы знаете?
Различают следующие уровни организации живой материи:
1) клеточный; 2) тканевой; 3) структурно - функциональные единицы органа; 4) органный; 5) системный; 6) организменный; 7) популяционный и другие уровни.
Биологические объекты можно изучать на тканевом, клеточном, субклеточном и молекулярном уровнях.
Дайте определение объектам исследования
Объектами исследования служат живые и фиксированные клетки и ткани, их изображения, полученные в световых и электронных микроскопах или на телевизионном экране дисплея. Существует ряд методов, позволяющих проводить анализ указанных объектов.
Какие основные методы изучения биологических микрообъектов Вам известны?
Основными методами изучения биологических микрообъектов являются световая и электронная микроскопия, которые широко используются в экспериментальной и клинической практике.
4. Световая микроскопия
Для изучения гистологических микрообъектов применяют обычные световые микроскопы и их разновидности, в которых используются источники света с различными длинами волн. В обычных световых микроскопах источником освещения служит естественный или искусственный свет. Минимальная длина волны видимой части спектра равна примерно 0,4 мкм. Следовательно, для обычного светового микроскопа наименьшее разрешаемое расстояние равно приблизительно 0,2 мкм (do = '/2 – 0,4 мкм = 0,2 мкм), а общее увеличение (произведение увеличения объектива на увеличение окуляра) может быть 1500-2500. Таким образом, в световом микроскопе можно видеть не только отдельные клетки размером от 4 до 150 мкм, но и их внутриклеточные структуры — органеллы, включения. Для усиления контрастности микрообъектов применяют их окрашивание различными красителями.
Какова схема устройства светового микроскопа? Схема строения светового микроскопа и ход лучей в нем представлены на следующих рисунках:
Рисунок 1.1. – Световой биологический микроскоп « Биолам-С »
А- световой биологический микроскоп " Биолам-С": 1 – основание; 2 – тубусодержатель; 3 – наклонный тубус;4 – окуляр; 5 – револьвер; 6 – обьективы; 7 – столик; 8 – конденсор с ирисовой диафрагмой; 9 – винт конденсора;10 – зеркало;11 – микрометрический винт; 12 – макрометрический винт.
Рисунок 1.2. – Световой микроскоп и ход лучей в микроскопе (по М. Ross и Е. Reith)
Осветительная система:
1 – источник света; 2 – зеркало; 3 – диафрагма; 4 – конденсор.
Оптическая система: 5 – объектив; 6 – окуляр.
Механическая система: 7 – тубус: 8 – штатив; 9 – колонка; 10 – предметный столик
6. Каковы правила работы с микроскопом?
Перенести микроскоп на рабочий стол, держа его одной рукой за держатель тубуса и поддерживая другой рукой за основу.
Установить зеркало микроскопа в направлении к источнику света.
В рабочем положении, напротив отверстия в предметном столике, находится объектив малого увеличения (8х). В противном случае повернуть головку револьверной насадки в указанное положение, что сопровождается щелчком.
Установить объектив на расстояние 5-7 мм от поверхности предметного столика, оборачивая макровинт микроскопа.
Смотря в объектив и поворачивая зеркало, достичь равномерного осветления поле зрения микроскопа.
При помощи винта конденсора установить оптимальную освещенность поля зрения микроскопа.
Положить на предметный столик гистологический препарат покровным стеклом кверху. Срез изучаемой ткани, либо органа, при этом должен находиться под объективом.
Оборачивая макровинт на себя и поднимая объектив, установить четкое изображение объекта, который изучается, при малом увеличении.
Во время изучения препарата для получения четкого изображения его отдельных элементов использовать только микровинт.
При необходимости изучения препарата на большом увеличении предварительно необходимо проверить, что объект четко виден в микроскоп на малом увеличении. Не меняя положение макро- и микровинтов, повернуть револьверное устройство и установить в рабочее положение объектив (40х). Для получения наиболее четкого изображения объекта необходимо использовать только микровинт.
При необходимости изучения препарата на более большом увеличении используют объектив 90х и масляную иммерсию.
После окончания изучения препарата проверить, что в рабочем положении находится объектив малого увеличения. В противном случае, поворачивая револьверное устройство, установить его в необходимое положение.
Снять препарат с предметного столика, протереть объективы и окуляры микроскопа специальной мягкой салфеткой. Закрыть микроскоп защитным футляром либо чехлом. Препараты поместить в специальный футляр для хранения.