Задача №6
1. В аналитическую лабораторию ОТК фарм. предприятия поступили на анализ полыни горькой трава, закупленная для производства настойки и лекарственное вещество, структурная формула которого приведена ниже.
Для подтверждения подлинности сырья был проведен микроскопический анализ.
При исследовании микропрепарата видны: клетки эпидермиса с многочисленными т-образными волосками, овальными железками и каплями эфирного масла и поперечной перегородкой. Устьица с аномоцидным типом устьичного комплекса.
Проанализируйте полученные результаты и сделайте заключение о соответствии анатомо-диагностических признаков сырья нормативным требованиям.
Какой НД руководствуются при проведении анализа? Как был приготовлен микропрепарат для проведения микроскопического анализа.
Приведите латинские названия производящего растения, сырья, семейства. Охарактеризуйте сырьевую базу.
Ответ:
Микропрепарат готовится согласно требованиям ГФ ХI выпуск 1.
Для микроскопического анализа у трав берут лист, иногда кусочек стебеля с цветком.
Несколько кусочков сырья помещают в колбу или пробирку, прибавляют 5% раствор едкого натра, разведенный водой (1:1), и кипятят в течение 1-2 мин. Затем содержимое выливают в чашку Петри (или фарфоровую), жидкость сливают и сырье тщательно промывают водой. Из воды кусочки сырья вынимают скальпелем или лопаточкой и помещают на предметное стекло в каплю раствора хлоралгидрата или глицерина.
При проведении анализа руководствуются Государственной фармакопеей СССР одиннадцатым изданием выпуском вторым (Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье) - при рассмотрении листа с поверхности д.б.видны клетки эпидермиса с извилистыми стенками, устьица с обеих сторон листа окружены 3-5 клетками эпидермиса (аномоцитный тип). Характерны многочисленные Т-образные волоски, состоящие из короткой двух-четырехклеточной ножки, несущей длинную тонкостенную клетку с заостренными концами, прикрепленную к ножке посередине и лежащую горизонтально. Места прикрепления волосков имеют вид круглых валиков. На обеих сторонах листа расположены крупные, овальные эфирномасляничные железки с поперечной перегородкой. По краям и в разрезе видно, что они состоят из 8 (реже 6) выделительных клеток, расположенных в 2 ряда и 4 яруса на короткой одноклеточной ножке.
Можно сделать вывод, что данное сырье – это трава полыни горькой.
Полынь горькая (Artemisia absinthium), Сем. Сложноцветные ( Compositae)
Трава полыни горькой (Herba artemisiae absinthii)
Листья полыни горькой (Folia artemisiae absinthii )
Сырьевая база достаточно большая т.к. данное растение распространено на всей европейской части России, на Кавказе, в западной Сибири, Казахстане и средней Азии. Растет вдоль дорог, на опушках лесов, в садах и т.д. образуя заросли.
2. В аптеке изготовлены порошки по прописи:
Rp.: Thiamini chloridi
Riboflavini ana 0, 002
Acidi folici 0, 0001
Nicotinamidi 0, 015
Sacchari 0, 2
Misce fiat pulvis
Da tales dosеs № 300
Signa. Принимать по 1 порошку 3 раза в день
Назовите технологическую особенность и условия изготовления данной лекарственной формы в аптеке со ссылками на НД.
• Дайте рекомендации по оптимальным условиям ферментации продуцента рибофлавина биотехнологическим методом.
ОТВЕТ.
Данная лекарственная форма изготавливается в условиях аптеки. Для приготовления берем ступку соответствующую объему лек.формы.
Измельчение начинаем с сахара, как индифферентного вещества. Сахар измельчаем, затирая поры ступки. Часть сахара отсыпаем на капсулу и между слоями сахара измельчаем рибофлавин (красящее вещество). Далее добавляем вещества по принципу «от меньшего к большему»: сначала фолиевую кислоту, затем тиамин, и в последнюю очередь никотинамид.
Срок годности данного лекарственного средства составляет 10 суток, т.к. иного срока годности как для внутриаптечной заготовки не предусмотрено приказом МЗ РФ №214 «О контроле качества лекарственных средств изготовляемых в аптеках»
Витамин В2 (рибофлавин) - продуценты: микроскопический гриб р.Eremotyecium, рекомбинантный штамм Bacillus subtilis с повышенной способностью к синтезу рибофлавина. Процесс ведут строго в стерильных условиях. Ферментация аэробная, при температуре 28-300С в течение 60-80 часов. После ферментации и достижении необходимой концентрации витамина в культуральной жидкости, проводят термолиз (нагревание до 800С с целью разрушения клеточных структур и одновременное упаривание до 30-40% содержания сухих веществ), полученную сиропообразную массу высушивают (распылительная сушка) и размалывают до однородного состава, гранулируют и упаковывают.
3.При оценке качества данного лекарственного вещества в образцах одной серии внешний вид не отвечал требованиям по разделу «Описание» - порошок был отсыревшим и грязно-зеленого цвета.
Дайте обоснование причинам изменения его качества по данному показателю в соответствии со способами получения и свойствами. Предложите испытания, характеризующие его качество.
Приведите русское, латинское и рациональное название препарата. Охарактеризуйте физико-химические свойства (внешний вид, растворимость, спектральные и оптические характеристики) и их использование для оценки качества.
В соответствии с химическими свойствами предложите реакции идентификации и методы количественного определения. Напишите уравнения реакций.
Ответ:
Обнаруженные изменения при оценке качества порошка фолиевой кислоты произошли в результате неправильного хранения. Кислоту фолиевую хранят в хорошо укупоренной таре, в сухом, темном месте, так как она гигроскопична и разлагается под действием света.
Фолиевая кислота – Acidum folicum
Желтый или оранжевый кристаллический порошок без запаха и вкуса. На свету неустойчив. Гигроскопичен.
Оптические и спектральные характеристики: В структуре препарата имеется ассиметричный атом углерода, поэтому его раствор имеет свойства поворачивать плоскость поляризованного луча света на определенный угол.
Устанавливают по наличию в области 230-380 им трех характерных максимумов в УФ- спектре поглощения раствора кислоты фолиевой в 0,1 М растворе гидроксида натрия (256, 283, 365 им) и трех минимумов (235, 265, 332 нм). Отношение оптических плотностей 0,001%-ного раствора при 256 и 365 им должно быть от 2,8 до 3,0.
Функциональные группы: фенольный гидроксил,ароматическая аминогруппа,амидная,карбоксильная,третичный атом азота.
Определение подлинности.
1. реакция окисления перманганатом калия, избыток реактива удаляют действием раствора пероксида водорода, смесь фильтруют и наблюдают характерную голубую флуоресценцию фильтрата в УФ-свете при 254 им.
Образовавшаяся птериновая кислота обусловливает флуоресценцию
2. образование нерастворимых в воде окрашенных внутрикомплексных солей с катионами меди (II), свинца, серебра, кобальта, железа (III), за счет наличия подвижного атома водорода в гидроксильной группе и третичных атомов азота Общая формула этих солей
При прибавлении раствора ацетата свинца выпадает лимонно-желтый осадок, сульфата меди (II) — зеленый, нитрата серебра — желто-оранжевый, нитрата кобальта — темно-желтый, хлорида железа (III) — красно-желтый.
3. ТСХ, детектируют в УФ свете при 365нм.
Количественное определение.
1. Кислотно-основное титрование (алкалиметрия) - основано на образовании натриевых солей за счет незамещенных карбоксильных групп. Обратный метод, растворяют навеску в избытке 0,1 М раствора гидроксида натрия, а затем медленно титруют несвязавшееся количество щелочи 0,1 М раствором хлороводородной кислоты. Используют либо смешанный индикатор (фенолфталеин с метиленовым синим), либо тимол фталеин.
2. Спектрофотометрическое определение может быть выполнено при длине волны 365 нм (растворитель 0,1 М раствор гидроксида натрия) или 320 нм (растворитель 5 М раствор серной кислоты).
3. Фотоколориметрического определения (по ФС) основан на предварительном окислении перманганатом калия до птериновой и п-аминобензоилглутаминовой кислот (химизм см. реакция 1 на подлинность). Последнюю затем диазотируют раствором нитрита натрия и сочетают с (1-нафтил)-этилендиамином:
Одновременно происходит разложение избытка перманганата калия:
для удаления избытка азотистой кислоты прибавляют сульфаминовую кислоту или мочевину.
Интенсивность окраски образовавшегося азокрасителя измеряют с помощью фотоэлектроколориметра со светофильтром, имеющим максимум пропускания 550 им. Содержание кислоты фолиевой вычисляют по сравнению оптических плотностей испытуемого раствора и раствора ГСО.
Метод стандартного раствора (метод сравнения)
В этом методе сравнивают поглощение исследуемого раствора и стандартного Ах с известной концентрацией. Расчет концентрации Сх проводят по формуле, исходя из закона Бугера — Ламберта — Бера:
Измерения проводят с несколькими стандартными растворами, близкими по концентрации к исследуемому, и усредняют Сх. Этот способ требует строгого подчинения поглощения закону Бугера — Ламберта — Бера.
4.Метод Кьельдаля и ВЭЖХ.