IV семестр

Микробиологическая диагностика стафилококков

Знать:

1. Биологические особенности стафилококков

2. Особенности стафилококковых инфекций, патогенеза, эпидемиология

3. Исследуемый материал, забор, доставка

4. Питательные среды

5. Методы микробиологической диагностики

Уметь выполнять:

1. Квалифицированный забор исследуемого материала

2. Доставить в лабораторию в оптимальных условиях

3. Провести первичный посев и выделить чистую культуру

4. Провести идентификацию чистой культуры

5. Оформить протокол микробиологического исследования

6. Составить заключение по результатам исследования

Классификация патогенных и условно-патогенный кокков

1. Аэробы (капнофилы — при повышенном содержании СО). Гр- кокки рода Neisseria (менингококки и гонококки).

2. Факультативные анаэробы. Гр+ кокки родов Staphylococcus и Streptococcus.

3. Строгие анаэробы. Гр+ кокки родов Peptococcus и Peptostreptococcus. Гр- кокки рода Veillonella.

Материалы для исследования, забор и доставка в лабораторию материала при гнойно-воспалительных заболеваниях, вызываемых патогенными кокками

Исследуемый материал от больных собирают в стерильную посуду стерильными инструментами в асептических условиях.

1. Слизистое отделяемое носоглотки, зева, уха, глаза, влагалища и пр. Забор осуществляют ватным тампоном. При ангине — прямым тампоном с миндалин; при менингите — изогнутым тампоном из носоглотки; при исследовании на общую обсемененность — тампоном с миндалин, дужек, язычка, задней стенки глотки; из носа — одним тампоном из двух ноздрей.

2. Гнойное отделяемое раны — шприцем, дренажом, тампоном, иссечением глубокого участка раны. При заборе тампоном предварительно обрабатывают рану физ.раствором и 70% спиртом для удаления поверхностно вегетирующей микрофлоры и антисептиков.

3. Мокрота — утром, после туалета ротовой полости в стерильную банку.

4. Моча — средняя порция утренней мочи после туалета половых органов в стерильные банки с крышками.

5. Ликвор — стерильным шприцем.

6. Кровь (при подозрении на сепсис) — забор на высоте температуры из локтевой вены в количестве 5-10 мл. Взятую кровь у постели больного над спиртовкой засевают во флакон с сахарным бульоном в соотношении 1:10 (10мл крови засевают на 100 мл сахарного бульона) для уменьшения антимикробного действия крови. При доставке в лабораторию флакон со средой и кровью помещают в термостат при 37 градусах Цельсия и хранят там в течение 10 суток, периодически делая посевы на ЖСА и КА.

Материалы должны быть доставлены в лабораторию в течение 1-2 часов. При невозможности доставки в указанные сроки весь материал хранят в холодильнике (кроме крови, ликвора и материалов на менингококк, которые хранят при 37 градусах Цельсия). Для более длительного хранения (но не более 48 часов) используют специальные транспортные среды: среда Стюарта, среда Амиеса.

Биологические особенности стафилококков

Гнойные инфекции чаще вызывает патогенный стафилококк — S. Аureus и реже условно-патогенные — S. Epidermidis и S.saprophytiou. Морфология: Гр+ кокки (1мкм), располагаются гроздьями. Неподвижны, спор и капсул не образуют. Метаболизм окислительный (каталаза + цитохромоксидаза +). Питание: хеморганотрофы. Дыхание: факультативные анаэробы. Патогенетические признаки: гемолиз эритроцитов, коагулирование плазмы (коагулаза), растворение лецитина (лецитиназа), деполимеризация ДНК (ДНК-аза) — патогенные кокки. Устойчив к факторам внешней среды.

Культивирование: растут на простых питательных средах при 37 градусах Цельсия. Элективными являются среды с высоким (до 10%) содержанием соли. ЖСА — для выявления лецитиназы, КА — для выявления гемолиза, МСА — для выявления пигмента.

Культуральные свойства

При росте на плотных питательных средах стафилококки образуют нерастворимый пигмент, окрашивающий колонии в белый, лимонный и золотистый цвет. На МПА колонии крупные, непрозрачные, блестящие, окрашенные в золотистый, лимонный или белый цвет за счет пигментов, который образуют стафилококки (особенно на МСА). На ЖСА вокруг колоний образуются радужные пятна (лецитиназа +). На КА — вокруг колоний зона гемолиза (гемолизин +).

Биохимические свойства

Расщепляют сахара до кислоты. Диагностическим признаком золотистого стафилококка является способность расщепить маннит в аэробных условиях. Протеолитические ферменты активны — растворяют казеин, разжижают желатину и др.

Антигенные свойства

Не имею значения в диагностике. Среди золотистых стафилококков встречаются около 40 фаговаров. Определение фаговара золотистого стафилококка имеет важное значение в эпидемиологии больничных инфекций для выявления источника и путей передачи инфекции.

Подготовка к проведению микробиологического исследования

Приготовление питательных сред для первичного посева. Желточно-солевая среда (ЖСА) готовится из готового солевого агара (расплавленного и охлажденного до 50 градусов Цельсия) к которому добавляется 20% желточной взвеси (желток яйца взбалтывают с 200 мл стерильного физ.раствора). Молочно-солевая среда (МСА) готовится из готового солевого агара расплавленного и охлажденного до 50 градусов Цельсия к которому добавляют 10% стерильного обезжиренного молока. Кровяной агар (КА) готовится из готового питательного агара расплавленного и охлажденного до 50 градусов Цельсия, к которому добавляют 5% дефибринированной крови и 1% глюкозы.

Для выделения чистой культуры используют скошенный МПА.

Материал, поступивший в лабораторию, регистрируется в журнале учета, на пробирке стеклографом ставится соответствующий номер. Этот же номер ставится на чашках Петри, колбах, пробирках, куда высевается этот материал.

Методы микробиологического исследования