- •Предмет и задачи биохимии
- •Аминокислоты, классификация и состав
- •Биологическая роль белков
- •Физико-химические свойства белков
- •Ферменты. Классификация и химия ферментов.
- •Свойства ферментов
- •Механизм действия ферментов
- •Кинетика ферментативной реакции
- •Значение ферментов в медицине
- •Нуклеиновые кислоты
- •Классификация нуклеиновых кислот
- •Углеводы
- •Качественные реакции на углеводы
- •Восстанавливающие и невосстанавливающие углеводы
- •Простые липиды
- •Сложные липиды
- •Обмен энергии
- •III этап представляет собой полное окисление ацетил-Ко а в цикле Кребса с образованием углекислого газа и освобождением водорода.
- •Обмен простых белков
- •Промежуточный обмен аминокислот в организме. Общие пути обмена.
- •Конечные продукты распада аминокислот
- •Обмен сложных белков. Обмен нуклеопротеидов.
- •Обмен хромопротеидов
- •Белки сыворотки, плазмы, спинномозговой жидкости
- •Электрофорез
- •Клинико-диагностическое значение исследования протеинограмм
- •Показатели азотистого обмена
- •Креатинин
- •Порядок проведения пробы Реберга-Тареева
- •Мочевина
- •Мочевая кислота
- •Желчные пигменты. Обмен желчных пигментов в норме
- •Гемоглобин
- •Производные гемоглобина
- •Биосинтез белка
- •Специфические белки
- •Орозомукоид (кислый альфа-гликопротеин)
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Твердофазный иммуноферментный анализ
- •Исследование общего белка
- •Определение белка в суточной моче
- •Электрофорез белков
- •Виды диспротеинемий
- •Генетические дефекты синтеза белков
- •Парапротеинемия
- •Основные требования к процессу проведения электрофореза
- •Подготовка электрофореграмм к учету результатов способами денситометрии и фотометрии
- •Мочевина — главная составляющая фракции остаточного азота
- •Проба Реберга
- •Алгоритм определения
- •Качественное обнаружение «прямого» и «непрямого» билирубина в сыворотке крови
- •Билирубин «прямой» (конъюгированный) в сыворотке крови
- •Основные пути распада углеводов
- •Глюконеогенез
- •Контрольные вопросы
- •Регуляция углеводного обмена
- •Патология обмена углеводов
- •Обмен липидов. Переваривание и всасывание
- •Распад и синтез триглицеридов
- •Окисление вжк
Алгоритм определения
В три пробирки (для общего билирубина, «прямого» и для контроля) вводят реактивы согласно таблице:
№ |
Реактивы |
Общий билирубин |
Прямой билирубин |
Контроль |
1 |
Сыворотка, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
2 |
Кофеиновый реактив, мл |
1,75 |
- |
1,75 |
3 |
Физ. раствор |
- |
1,75 |
0,25 |
4 |
Диазосмесь, мл |
0,25 |
0,25 |
- |
Для определения «прямого» билирубина колориметрирование следует проводить спустя 5-10 минут после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает «непрямой» билирубин.
Для определения общего билирубина пробу для развития окраски оставляют стоять на 20 минут, после чего колориметрируют.
При дальнейшем стоянии окраска не изменяется.
Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр), в кювете толщиной 0,5 см против воды. Из показателей, полученных при колориметрировании общего и «прямого» билирубина, вычитают показатель контроля.
Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и «прямого» билирубина. Для определения уровня «непрямого» билирубина вычитают из показателя общего его содержания показатель «прямого» билирубина.
Качественное обнаружение «прямого» и «непрямого» билирубина в сыворотке крови
Обнаружение «прямого» билирубина. На часовое стекло, под которое подложен лист бумаги, наносят каплю сыворотки крови, содержащей «прямой» билирубин, добавляют 3 капли свежеприготовленного диазореактива и перемешивают стеклянной палочкой. Образуется характерное для билирубина красное окрашивание.
Обнаружение «непрямого» билирубина. В пробирку отмеривают 1 мл сыворотки крови, 2 мл этилового спирта и фильтруют. К фильтрату добавляют 5 капель свежеприготовленного диазореактива — появляется красно-розовое окрашивание.
Билирубин общий в сыворотке крови. Нормальные значения:
Новорожденные 1 сут. - 6,8-68,0 мкмоль/л
Новорожденные 3 сут. - 17,7-171 мкмоль/л
Новорожденные 1 мес. - 5,2-17,1 мкмоль/л
Взрослые - 3,5-22,0 мкмоль/л
Билирубин в организме образуется в ретикулоэндотелиальной системе при распаде гемоглобина. Дополнительным источником билирубина являются молекулы цитохромов и миоглобин. При соединении с альбумином образуется неконъюгированный билирубин, который переносится кровью. Непрямой (неконъюгированный) не растворим в воде, а растворим в липидах и токсичен. В клетках печени происходит конъюгация билирубина с глюкуроновой кислотой, образуется прямой (конъюгированный) билирубин, который растворим в воде, он выделяется в желчные протоки и удаляется с желчью и экскретируется кишечником.
При повышении концентрации билирубина в сыворотке свыше 2 мг/дл появляется желтуха, повышение прямого билирубина сопровождается повышением его в моче. У новорожденных билирубин-конъюгирующая система несовершенна, чем объясняется физиологическая желтуха в первую неделю жизни. Гипербилирубинемия является результатом повышенной продукции билирубина или пониженной способности к конъюгации, усвоению и секреции билирубина гепатоцитами. Физиологическое повышение: новорожденные, беременность.