Самостоятельная работа студентов Микроскопия демонстрационных препаратов

1. Включения волютина у дифтерийной палочки – Corynebacterium diphtheriae (окраска по Нейссеру– рис.14, см. приложение). Микробные клетки желто-зеленого цвета, на полюсах видны включения волютина темно-синего, почти черного цвета; расположение микроорганизмов в виде растопыренных пальцев кисти, римских цифр V и X.

2. Клеточная стенка у дрожжей (Saccharomyces сerevisiae). Окраске мазка дрожжей концентрированным раствором генциан-фиолетового красителя предшествовал плазмолиз клеток в гипертоническом растворе NaCl и протрава танином. Клеточная стенка выглядит темным двуконтурным розовато-сиреневым ободком вокруг светлой цитоплазмы (рис. 15, см. приложение).

З. Бактериальный нуклеоид у сенной палочки (Bacillus subtilis - демонстрационный препарат – рис. 16, см. приложение, окраска по Романовскому – Гимзе). Нуклеоид круглой или продолговатой формы, рубиново-красного цвета; цитоплазма - лилово-синего цвета.

4. Капсулы у Klebsiella pneumonae (окраска по Гинсу-Бурри, рис. 17, см. приложение). Окрашенные в красный цвет диплококки окружены прозрачной зоной неокрасившейся капсулы.

5. Кислотоустойчивые бактерии (возбудитель туберкулеза – Mycobacterium tuberculosis) в окраске по Цилю-Нильсену (рис. 18, см. приложение). На голубоватом фоне препарата видны ядра клеток и микобактерии, окрашенные в рубиново-красный цвет.

6. Споры Bacillus cereus. Окраска модифицированным методом Ауески. Выполняется окраска по методу Циля-Нильсена, однако обесцвечивание проводится 0,5% HCl. Вегетативные клетки бактерий окрашены в голубой цвет, споры - в ярко-малиновый (рис. 19, см. приложение).

Тема 3. Морфология и классификация бактерий, спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм и актиномицетов. Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1. Морфология и классификация спирохет, риккетсий, хлами­дий, микоплазм и актиномицетов. Методы их окраски.

2. Сущность методов темнопольной и фазово-контрастной микрос­копии. Их использование в микробиологии.

3. Сущность методов люминесцентной и электронной микроскопии. Их применение в микробиологии.

4. Бактериоскопический метод исследования в микробиологии и его использование в диагностике инфекционных заболеваний.

Информация к занятию

Рис. 3. Спирохеты. а – трепонемы, б –боррелии, в – лептоспиры

Спирохеты в морфологическом отношении представляют собой тонкие извитые грамотрицательные ни­ти, обладающие активной подвижностью, размеры которых колеблются в широких пределах в зависимости от вида (длина 10-50 мкм, диаметр 0,1-0,6 мкм, патогенные виды имеют длину 3-20 мкм). Цитоплазма спирохет покрыта цитоплазматической мембраной, снаружи которой имеется нежная оболочка из тонкого слоя пептидогликана. Между клеточной стенкой и цитоплазматической мембраной располагаются закрученные вокруг тела спирохеты фибриллы, придающие ей извитую форму и обеспечивающие движение. Различные виды спирохет отличаются друг от друга по форме, размерам, характеру подвижности и другим признакам.

Патогенные спирохеты (рис. 20) относятся к родам Treponema (9-12 равномерных завитков), Borrelia (7-9 неравномерных завитков), Leptospira (тонкие первичные завитки, вторичные завитки при движении в виде букв С или S). Для окраски спирохет применяют метод Романовского— Гимзы (боррелии и лептоспиры – фиолетового цвета, трепонемы – бледно-розового).

Спирохеты можно выявить также в препаратах, окрашенных по Бурри (негативный метод) или в «висячей» и «раздавленной» каплях. Препараты из живых спирохет исследуют с помощью темнопольной или фазово-контрастной микроскопии, позволяющие наблюдать особенности морфологии и движения спирохет.

Актиномицеты - грамположительные бактерии, характеризующиеся наличием хорошо развитого ветвящегося мицелия, состоящего из одноклеточных нитей (гиф), шириной 0,3—0,8 мкм, длиной — до 600 мкм (рис. 21, см. приложение). Размножаются актиномицеты спорами или путем фрагментации мицелия. Актиномицеты имеют ряд признаков, общих с грибами. Выделяют низшие и высшие формы актиномицетов. Высшие формы образуют мицелий, врастающий в питательную среду (субстратный мицелий), развиваться над ней в виде рыхлого слоя -воздушного мицелия. На концах гиф воздушного мицелия (спороносцах), формируются споры, с помощью которых актиномицеты размножаются. К низшим актиномицетам относят кислотоустойчивые микобактерии (возбудители туберкулеза - Mycobacterium tuberculosis и проказы - М. leprae), а также микококки. К этой группе микроорганизмов близки коринебактерии - короткие, полиморфные палочки в форме булавы или гантелей (патогенный вид - Corynebacterium diphtheriae, возбудитель дифтерии). Большинство актиномицетов –сапрофиты, обитающие в почве. Патогенные виды (A.israelli, A.bovis) вызывают актиномикоз у человека и животных.

Риккетсии (класс Rickettsias) - группа бактерий, основной особенностью которых является облигатный (безусловный) паразитизм. На обычных питательных средах эти микроорганизмы размножаться не способны, поэтому для их культивирования в лабораторных условиях используют куриные эмбрионы или культуры тканей млекопитающих. Риккетсии полиморфны (рис.22, см. приложение), имеют кокковидную, палочковидную и нитевидную формы, мелкие размеры (диаметр кокковидных форм - 0,2—0,5 мкм, палочковидных форм 1—1,5 или 3—4 мкм, нитевидных - 10—40 мкм). Риккетсии размножаются простым делением, неподвижны, не образуют спор, капсул, окрашивают их обычно по Романовскому — Гимзе и Здродовскому. Около 30 видов риккетсий могут вызывать различные заболевания человека и животных – риккетсиозы (например, сыпной тиф, пятнистые лихорадки).

Хламидии также относятся к облигатным внутриклеточным паразитам. Имеют палочковидную или сфе­рическую форму, очень малые размеры (0,2—1,3 мкм). Неподвижны, спор и капсул не образуют. Размножаются делением, процессу деления предшествует образование вокруг частицы хламидий структуры, напоминающей бактериальную капсулу. Хламидии окрашиваются по Граму отрицательно, чаще применяется метод Романовско­го-Гимза. В процессе жизненного цикла образуют 3 формы – элементарное тельце (высококонтагиозная внеклеточная форма в виде мелкой овоидной клетки с толстой оболочкой, метаболически мало активная), ретикулярное тельце (репродуктивная внутриклеточная форма в виде крупных сферических клеток), промежуточное тельце (переходная форма развития, превращающееся в элементарное тельце, вызывающее гибель пораженной клетки). Вызывают у человека трахому, паховый лимфогранулематоз, орнитоз, урогенитальную инфекцию.

Микоплазмы (класс Mollicutes) - мелкие (125-250 нм) полиморфные микроорга­низмы в виде сферических тел, бус или нитевидных ветвистых форм, характеризующиеся отсутствием оболочки, вследствие чего они не имеют постоянной формы, не чувствительны к пенициллину и другим антибиотикам, действующим на синтез оболочки. Микоплазмы размножаются делением, очень требовательны к питательным средам. Для изучения морфологии микоплазм пользуются фазово-контрастной микроскопией. Некоторые бактерии (кокки, микобактерии) под влиянием пенициллина и других веществ могут образовы­вать формы, лишенные оболочки - L-формы, которые по морфологическим и физиологическим свойствам близки к микоплазмам.