3. Освоение техники микроскопии с иммерсионным объективом:

• включить освещение, установить освещенность поля зрения, используя объектив х8 и вогнутую поверхность зеркала; поднять конденсор до уровня столика;

• на мазок нанести небольшую каплю иммерсионного масла, поместить препарат на предметный столик;

• вращая револьвер с укрепленными на нем объективами, уста­новить объектив х90, осторожно опустить тубус микроскопа с помощью макрометрического винта вниз под контролем зрения сбоку до погружения фронтальной линзы иммерсионного объектива в каплю масла (почти до сопри­косновения с предметным стеклом). Установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта, выполняя эту манипуля­цию очень осторожно, чтобы не повредить фронтальную линзу объектива или предметное стекло. Окончательную фокусировку препарата осуществляют микрометрическим винтом, который реко­мендуется вращать не более, чем в пределах одного оборота;

• после окончания работы необходимо тщательно, с помощью специальной тряпочки вытереть масло с иммерсионного объектива, перевести револьвер на малый сухой объектив х8, выключить осве­щение, поставить микроскоп в шкаф.

Разрешающая способность иммерсионного микроскопа – 0,2 мкм.

4. Освоение техники иммерсионной микроскопии (микроскопия демонстрационного препарата Saccharomyces cerevisiae, окраска раствором метиленового синего). В поле зрения микроскопа наблюдаются овальные, круглые, вытянутые синего цвета клетки гриба, расположенные беспорядочно и неправильными скоплениями (рис.6). Препарат зарисовать.

5. Освоение техники приготовления мазка из агаровой культуры бактерий и окраски его простым способом.

Этапы приготовления мазка:

1. Препараты для микроскопического исследования готовят на чистых предметных стеклах, обезжиривая их поверхность мылом с последующим его удалением сухой негигроскопичной ватой. Наносят на обезжиренную поверхность стекла каплю воды (на хорошо обезжиренном стекле капля растекается).

2. Бактериальную петлю, изготовленную из платиновой, нихромовой или никелиновой проволоки стерилизуют прокаливанием докрасна в пламени горелки, держа ее в пламени сначала вертикально, а затем горизонтально, после чего обжигают примыкающую к петле часть держателя. Стерильную петлю используют для взятия микробной массы, держа ее в правой руке, как карандаш. Пробирку или колбу с питательной средой берут в левую руку так, чтобы поверхность с ростом культуры была обращена вверх, вынимают пробку из сосуда мизинцем правой руки, прижимая ее к ладони. Края сосуда обжигают в пламени горелки, вводят в него прокаленную петлю, прикасаясь ею к внутренней поверхности сосуда или к питательной среде, свободной от роста микроорганизмов, с целью охлаждения петли. Захватывают небольшое количество микробной массы, равномерно эмульгируя ее в капле воды в виде кружка или овала диаметром около 1 см. Если микроорганизмы выращены на жидкой питательной среде, культуру наносят на стекло петлей или стерильной пипеткой. После работы пипетку дезинфицируют 3—5% раствором фенола, остатки культуры на петле сжигают в пламени горелки и ставят петлю вертикально в штатив или специальный стакан. Тонкий и равномерный по толщине препарат можно получить, используя методику приготовления мазка крови. Для этого к капле жидкости или крови, нанесенной к концу стекла, подводят край шлифованного стекла под углом в 45°, капля растекается по краю этого стекла, после чего делают мазок быстрым движением шлифованного стекла. Мазок высушивают на воздухе.

3. Высушенный мазок в целях умерщвления микробных клеток и прикрепления их к стеклу фиксируют. Обычно применяют физический метод - фиксацию мазка над пламенем горелки или спиртовки троекратно (по 1 сек) мазком вверх. Правильно зафиксированный препарат, приложенный к тыльной стороне кисти, вызывает чувство выраженного тепла, но не жжения. Ни в коем случае стекло не следует перегревать и не подвергать фиксации влажный мазок. Это приводит к деформации и резкому уменьшению размеров и без того мелкого объекта исследования. Химический метод фиксации более щадящий. Используют этанол (10—15 мин), ацетон (5 мин), смесь Никифорова (смесь равных объемов этанола и эфира—10— 15 мин), метанол (3 мин), пары осмиевой кислоты, формалин (несколько секунд).

4. Окраска препарата простым способом: на мазок при помощи пипетки наносят 2-3 капли растворов водного фуксина (1-2 мин.), метиленового синего (3-5 мин.) или иного красителя. По окончании окрашивания мазок промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют с помощью иммерсионной системы.

Изучение морфологических и тинкториальных свойств микроорганизмов в препаратах, приготовленных из материала от больного, лежит в основе бактериоскопического метода исследования. Этот метод широко используется в диагностике чумы, туберкулеза, гонореи, сифилиса и ряда других заболеваний.