3.3.5. Препараты ферментов

Ферменты входят в состав всех клеток и тканей живых организмов и регулируют течение процессов, лежащих в основе жизнедеятельности организма.

Промышленные ферменты классифицируют по основному, преобладающему компоненту:

• амилотические;

• липолитические;

• целлюлозолитические;

• протеолитические и др.

Для промышленного производства лекарственных препаратов представляют интерес сырьевые источники, которые доступны и содержат ферменты в количествах, обеспечивающих получение высокой активности и выхода препарата. В основном получают ферменты из сырья животного и растительного происхождения, а также с помощью микроорганизмов.

Органы и ткани животного происхождения до настоящего времени являются важным источником сырья для производства ферментов. При этом используются отходы мясоперерабатывающей промышленности (поджелудочная железа, слизистые оболочки кишечника свиней, сычуги крупного рогатого скота, молочных телят, семенники половозрелых животных).

3.3.6. Препараты ферментов слизистой оболочки желудка

Пепсин (Pepsinum) — препарат, содержащий протеолитический фермент. Сырьем для получения пепсина служит слизистая оболочка желудка свиней, где он образуется в виде профермента — пепсиногена. Пепсиноген активируется кислотой хлороводородной и аутокаталитически, т. е. с помощью образовавшихся молекул пепсина. При этом от пепсиногена (м.м. 40 000) сначала отщепляется остаточный полипептид, а затем ингибитор пепсина. Образуется активный пепсин (м.м. 34 000). Пепсин относится к карбопротеиназам, содержащих остатки дикарбоновых аминокислот в активном центре, с оптимумом значения рН 1,5—2,5.

При выделении протеолитического фермента основной задачей является получение его в активной форме. Поэтому экстракцию сочетают с автолизом.

Измельченные ткани заливают водой, подкисленной кислотой хлористоводородной до значения рН 1,9—2,3. Соотношение сырья и экстрагента 10:1. Настаивание проводят при температуре около 40 °С, перемешивая на протяжении 8 ч и повторно — 24 ч. Лизаты сливают, отделяют от верхнего слоя жира, объединяют, процеживают. Ферментную массу выделяют высаливанием, для чего к лизату (значение рН 1,9—2,3) при непрерывном перемешивании добавляют 20—25% раствор натрия хлорида. Пепсин, выделившийся из раствора, всплывает на поверхность. Его отделяют, сушат в вакуум-сушильном шкафу при температуре 35—40 °С, измельчают в фарфоровой шаровой мельнице и просеивают. Стандартизуют препарат по протеолитической активности (переваривание белка куриного яйца): 10 г протертого белка в присутствии 0,1 г препарата в стандартных условиях должны полностью растворяться через 3— 4 ч, образуя опалесцирующий раствор. После определения биологической активности препарат смешивают с сахарной пудрой. Он представляет собой слегка желтоватый порошок, сладкий на вкус, со слабым своеобразным запахом.

3.3.7. Препараты ферментов поджелудочной железы

Панкреатин (Pancreatinum). Препарат содержит ферменты поджелудочной железы, главным образом трипсин и амилазу, и в незначительном количестве липазу. Сырьем для получения панкреатина служит поджелудочная железа свиней или рогатого скота.

В поджелудочной железе протеолитические ферменты образуются в виде проферментов: трипсиногена, химотрипсиногена. Активирование этих ферментов происходит гидролизом того фрагмента их полипептидной цепи, который маскирует активный центр протеиназ. При получении панкреатина активирование проферментов поджелудочной железы осуществляют в экстракте в щелочной среде, в присутствии ионов кальция и с затравкой (панкреатин).

Ткани поджелудочной железы убойных животных измельчают на волчках и заливают водой, подкисленной кислотой уксусной ледяной 5 мл на 1 л воды. Настаивание проводят в реакторе с мешалкой 4 ч при температуре 10 °С. Экстракт отделяют центрифугированием или процеживанием с последующим прессованием остатка. Для активирования проферментов в экстракте создают среду со значением рН 8,1; добавляют кальция хлорид, чтобы приготовить 0,05 М раствор, и затравку — панкреатин. Настаивают 24 ч при температуре 5 °С. Затем экстракт подкисляют до значения рН 6,0 и в изоэлектрической точке осаждают сопутствующие вещества. Осадок отделяют, обезжиривают ацетоном и высушивают в вакуум-сушильном шкафу при температуре не выше 40 °С. Измельчают в шаровой мельнице.

Стандартизуют панкреатин по протеолитической активности -способности переваривать белок казеин в слабощелочной среде. Панкреатин должен содержать в 1 г 25—33 ЕД.