Изготовление парафиновых срезов на ротационном микротоме и монтировки их на стекло с использованием водяной бани.

1.

Вымыть и осушить руки

2.

Надеть перчатки

3. Подготовить рабочее место:

3.1.

Водяную баню наполнить водой и включить для нагрева

3.2.

Предметные стекла промаркировать и положить на планшет

4. Изготовление срезов

4.1.

Парафиновый блок закрепить в объектодержателе

4.2.

Закрепить нож под углом 7-9°

4.3.

Перевести объектодержатель в среднее положение (на уровне лезвия ножа)

4.4.

Подвести нож до соприкосновения с объектом

4.5.

Установить микрометрическую шкалу на 20 мкм

4.6.

Выровнять поверхность блока до тех пор, пока не начнут получаться первые полные срезы

4.7.

Перевести микрометрическую шкалу на 6-7 мкм

4.8.

Поворотом рукоятки микротома получить серию из 4-6 срезов

5. Монтировка срезов на стекло:

5.1.

Перенести срезы препаровальной иглой или кисточкой с лезвия ножа на подогретую воду

5.2.

Предметное стекло опустить в воду под углом 90º рядом со срезом, аккуратно выловить срез

5.3.

Удалить излишки воды фильтровальной бумагой

5.4.

Сложить стекла со срезами на планшет

5.5

Поместить стекла в термостат до полного высыхания

6. Завершение работы

6.1.

Снять нож, протереть и сложить в футляр

6.2.

Снять блок

6.3.

Очистить микротом от остатков парафина

6.4.

Перчатки снять и поместить в дезраствор

1.

Вымыть и осушить руки

2.

Надеть перчатки

3. Подготовить рабочее место:

3.1.

Включить столик для расправления и сушки срезов

3.2.

Предметные стекла промаркировать и положить на столик

3.3.

Подготовить теплую дистиллированную воду и пипетку

4. Изготовление срезов:

4.1.

Фиксировать блок в объектодержателе так, чтобы длинная ось блока располагалась вдоль длинной оси микротома, а поверхность была горизонтальной.

4.2.

Установить нож/лезвие под углом 13-15°

4.3.

Расположить нож/лезвие над блоком

4.4.

При помощи макровинта поднять блок до соприкосновения с ножом.

4.5.

Установить микрометрическую шкалу на получение толстых срезов (20-25 мкм)

4.6.

Движением ножа/лезвия срезать верхний слой парафина и выровнять поверхность блока до тех пор, пока не начнут получаться первые полные срезы.

4.7.

Перевести микрометрическую шкалу на получение тонких срезов (6-8 мкм)

4.8.

Изготовить необходимое количество парафиновых срезов.

5. Монтировка срезов на стекло:

5.1.

Нанести пипеткой 3-4 капли теплой дистиллированной воды на край стекла

5.2.

Препаровальной иглой или кисточкой перенести срезы (блестящей стороной вниз) с лезвия ножа воду.

5.3.

Удалить излишки воды фильтровальной бумагой

5.4.

Оставить предметные стекла на столике до полного высыхания

6. Завершение работы

6.1.

Снять нож, протереть и сложить в футляр

6.2.

Снять блок

6.3.

Очистить микротом от остатков парафина

6.4.

Перчатки снять и поместить в дезраствор

1.

Вымыть и осушить руки

2.

Надеть перчатки

3. Подготовить рабочее место:

3.1.

Водяную баню наполнить водой и включить для нагрева

3.2.

Предметные стекла промаркировать и положить на планшет

4. Изготовление срезов:

4.1.

Фиксировать блок в объектодержателе так, чтобы длинная ось блока располагалась вдоль длинной оси микротома, а поверхность была горизонтальной.

4.2.

Установить нож/лезвие под углом 13-15°

4.3.

Расположить нож/лезвие над блоком

4.4.

При помощи макровинта поднять блок до соприкосновения с ножом.

4.5.

Установить микрометрическую шкалу на получение толстых срезов (20-25 мкм)

4.6.

Движением ножа/лезвия срезать верхний слой парафина и выровнять поверхность блока до тех пор, пока не начнут получаться первые полные срезы.

4.7.

Перевести микрометрическую шкалу на получение тонких срезов (6-8 мкм)

4.8.

Изготовить необходимое количество парафиновых срезов.

5. Монтировка срезов на стекло:

5.1.

Перенести срезы препаровальной иглой или кисточкой с лезвия ножа на подогретую воду

5.2.

Предметное стекло опустить в воду под углом 90º рядом со срезом, аккуратно выловить срез

5.3.

Удалить излишки воды фильтровальной бумагой

5.4.

Сложить стекла со срезами на планшет

5.5.

Поместить стекла в термостат до полного высыхания

6. Завершение работы

6.1.

Снять нож, протереть и сложить в футляр

6.2.

Снять блок

6.3.

Очистить микротом от остатков парафина

6.4.

Перчатки снять и поместить в дезраствор

1.

Вымыть и осушить руки

2.

Надеть перчатки

3.Подготовить рабочее место:

3.1.

Подготовить лоток, салфетки, песочные часы, парфиновые срезысрезы

3.2.

Поместить на лоток штатив

3.3.

Составить батарею для депарафинирования, расположив растворы в следующей последовательности: ксилол (1) – ксилол (2) – спирт 100 – спирт 96 (1) – спирт 96 (2) – спирт 70 дист.вода

3.4.

Составить батарею для окрашивания, расположив растворы в следующей последовательности: дист.вода- гематоксилин- дист.вода- водопроводная вода- эозин- дист.вода

4. депарафинирование

4.1.

Поместить срезы в раствор ксилола 1-2 на 3-5 мин в каждый

4.2.

Провести срезы по батарее спиртов нисходящей концентрации

4.3.

Сполоснуть срезы в дистиллированной воде

5. окрашивание срезов гематоксилином-эозином

5.1.

депарафинированные срезы перенести в дистиллированную воду

5.2.

окрасить гематоксилином 2-5 мин

5.3.

промыть дистиллированной водой - 1 мин

5.4.

промыть водопроводной водой - 3-5 мин

5.5.

окрасить 1% раствором эозина – 0,5-1 мин

5.6.

быстро промыть дистиллированной водой

6. Завершение работы

6.1.

Разобрать батарею, бюксы с растворами составить на место, утилизировать использованные салфетки

6.2.

Перчатки снять и поместить в дезраствор

1.

Вымыть и осушить руки

2.

Надеть перчатки

3. Подготовка рабочего места:

3.1.

Подготовить лоток, салфетки, песочные часы, окрашенные препараты, планшет

3.2.

Поместить на лоток штатив

3.3.

Составить батарею, расположив растворы в следующей последовательности: вода - спирт 70%- спирт 96% (1)- спирт 96% (2)- спирт 100% - ксилол (1)- ксилол (2)

4. Обезвоживание и просветление препаратов

4.1.

Поместить стекла с окрашенными срезами в раствор 70% спирта по 1-2 мин в каждом растворе

4.2.

Перенести стекла в раствор 96% спирта по 1-2 мин в каждом растворе

4.3.

Перенести стекла в раствор 100% спирта

4.4.

Поместить стекла в раствор ксилола I - П на 1-3 мин в каждом растворе

4.5.

Удалить салфеткой остатки ксилола по краям стекла и с обратной стороны

4.6.

Положить стекло на планшет

5. Заключение препаратов

5.1.

Нанести каплю среды для заключения на край среза

5.2.

Поставить у края капли покровное стекло под углом 45°, при этом заключающая среда должна растечься по краю покровного стекла

5.3.

Придерживая препаровальной иглой свободный край покровного стекла, медленно опустить его на срез

5.4.

Оставить стекла в горизонтальном положении до полного высыхания заключающей среды

6. Завершение работы

6.1.

Разобрать батарею, бюксы с растворами составить на место, утилизировать использованные салфетки

6.2.

Перчатки снять и поместить в дезраствор

1.

Вымыть и осушить руки

2.

Надеть перчатки

3. Подготовка микроскопа к работе:

3.1.

Установить микроскоп на рабочем столе на расстоянии 3 – 5 см от края, размотать шнур, вставить вилку в розетку.

3.2.

Установить объектив слабого увеличения (8х) на расстояние около 1 см (фокусное расстояние объектива малого увеличения)

3.3.

Привести конденсор в рабочее положение, слегка открыть диафрагму.

3.4.

Привести бинокулярную насадку в рабочее положение

3.5.

Включить осветитель

4. Работа на малом и большом увеличении:

4.1.

Положить препарат на предметный столик покровным стеклом кверху

4.2.

Движением макрометрического винта найти фокус слабого увеличения

4.3.

Рассмотреть препарат, выбрать участок, который следует изучить при бỏльшем увеличении и поместить его в центр поля зрения

4.4.

Вывести объектив из хода лучей

4.5.

Нанести на препарат каплю иммерсионного масла

4.6.

Поворотом револьверного устройства установить объектив 90х

4.7.

Глядя сбоку, опустить объектив в каплю масла почти до объекта

4.8.

Глядя в микроскоп, осторожно поднимают тубус, пока не появится изображение.

4.9.

Фокусировку изображения проводить микровинтом

5. Завершение работы

5.1.

Выключить свет, перевести револьвер на слабое увеличение, убрать препарат с предметного столика, закрыть диафрагму, опустить конденсор, опустить тубус, свести окуляры насадке.

5.2.

Удалить остатки иммерсионного масла с объектива и препарата ватой, смоченной 70% спиртом (если препарат покрыт покровным стеклом) или сухой ватой (если препарат не заключен)

5.3.

Вынуть шнур из розетки, аккуратно обмотать его вокруг основания микроскопа. Надеть чехол на микроскоп.

5.4.

Перчатки снять и поместить в дезраствор