4. «Промывание материала для удаления фиксатора (формалина)»

Оснащение: раковина с проточной водой, банкас широким горлом, отводная трубка, марлевая салфетка

Алгоритм действий:

• Материал поместить в стеклянную банку

• Вставить резиновую отводную трубку

• Обвязать горлышко банки марлей

• Поместить банку в раковину, отрегулировать напор воды и оставить на 24-48 часов

5. «Обезвоживание, уплотнение и заливка материала в парафин»

Оснащение: термостаты, бюксы/банки с притертой пробкой, фарфоровые стаканы, формочки для заливки, эксикатор, пинцет, водяная баня.

Реактивы: растворы спиртов различной концентрации (70% -100%), ксилол, парафин, смесь парафина и 5% воска.

Алгоритм действий:

1 Этап – обезвоживание:

• Промытый материал поместить в 50% спирт на 1-3 часа

  

• Перенести в 70% спирт

• Перенести в 96% спирт 1 порция по 3-6 ч в каждом реактиве

• Перенести в 96% спирт 2 порция

• Поместить в 100% спирт

2 Этап – уплотнение:

• Материал поместить для пропитыванияв ксилол (1-я порция) по 1-3 часа в каждой

• Перенести во 2-ю порцию ксилола порции

• Поместить материал в смесь ксилола с парафином в соотношении 1:1 в термостате при 37°С на 3-6 ч

• Пропитать материал в парафине (1-я порция) в термостате при 56°С

• Перенести материал во 2-ю порцию парафина по 1,5-2 ч в каждой порции

3 Этап – заливка в парафин (вариант 1):

• Приготовить бумажные формочки*

• Емкость с парафином (2-я порция) перенести на водяную баню

• Теплым пинцетом перенести материал в центр бумажной формочки

• Заполнить формочку парафином для заливки**

• Формочки до краев погрузить в холодную воду, пока на поверхности не появится пленка

• Формочку полностью погрузить в воду до полного отвердения парафина.

* Схема приготовления бумажной формочки с использованием деревянного брусочка (А) и без него (Б)

А Б

3 Этап – заливка в парафин (вариант ):

З аливка материала с использованием модульной системы для заливки в парафин

Оснащение: модульная система для заливки в парафин, заливочныеформы, пинцет,

Реактивы: парафиновая среда для заливки

А лгоритм действий:

Выбрать заливочную форму в зависимости от размера кусочка

Налить расплавленный парафин* в заливочную форму

Перенести материал из кассеты в заливочнуюфоорму

Накрыть заливочную форму крышкой от кассеты

Завершить заливку материала через отверстия кассеты

Поместить блок на поверхность охлаждающего модуля

Отделить кассету с блоком от заливочной формы

Образец готов к микротомии

* Если в лаборатории нет возможности использовать для заливки готовую гомогенизированную парафиновую среду (например, HISTOMIX), которая уже содержит в своем составе парафин, натуральный воск и синтетические полимерные добавки, то к этой порции парафина следует добавить 5% воска.