Itogavya / Ответы к итоговой МБ №4 ООИ (КубГМУ Live)

Строгий аэроб, капнофил (сущ. capnophile - организм, которому для своей жизнедеятельности требуется углекислый газ в концентрации 10-15%).

Очень требователен к питательным средам и условиям культивирования. На простых питательных средах не растет, поэтому для его культивирования к основным средам добавляют нативные белки (сыворот ка, кровь, яичный желток и др.).

В качестве источников углерода и азота используют аминокислоты (глутамин, таурин, аспарагин, L-аргинин, глицин, тирозин), поэтому их необходимо включать в среду культивирования. Наиболее подходящей бессывороточной средой следует считать среду Мюллера - Хинтона, включающую полный набор аминокислот и мясной экстракт как источник факторов роста.

Оптимум pH среды 7,2-7,4. Температурный оптимум роста 37 °С, рост наблюдается в пределах 30-38 °С. Повышенная концентрация СО2 и влажность стимулируют рост менингококков. На сывороточном агаре образует круглые бесцветные нежные колонии маслянистой консистенции диаметром от 0,5 до 1,5 мм.

В отличие от условно-патогенных нейссерий не образует пигмента. На кровяном агаре образует нежные округлые колонии слегка сероватого цвета с блестящей поверхностью.

Не дает гемолиза, что отличает его колонии от колоний стафилококков, стрептококков и гемофилов. При первичном посеве очень требователен к условиям культивирования, поэтому отсутствие роста на бессывороточном агаре при 37 °С, на сывороточном агаре при 20 °С и среде с 5 % желчи дифференцируют менингококки от условно - патогенных нейссерий.

83. Методы микробиологической диагностики менингококковых инфекций.

Для микробиологической диагностики применяют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы.

Бактериоскопическое исследование ликвора и крови позволяет определить наличие возбудителя. При наличии гнойного ликвора готовят мазки без предварительной обработки; если ликвор прозрачный или мутный, его центрифугируют при 3500 об/мин в течение 5 мин, а затем из осадка готовят мазки, которые окрашивают по Граму, метиленовым синим и другими методами для определения лейкоцитарной формулы, выявления менингококков и определения их количества. При микроскопии мазков ликвора в положительных случаях наблюдают полинуклеарные лейкоциты, эритроциты, нити фибрина и менингококки в виде типичных грамотрицательных диплококков бобовидной формы, окруженных капсулой в виде плохоокрашенного ореола. Результаты микроскопического исследования используются только в качестве предвари тельного,

41

ориентировочного ответа, поскольку морфологически нельзя отдифференцировать менингококк от других грамотрицательных бактерий, способных вызывать менингит (гонококки, другие нейссерии, гемофилы, бранхамеллы). Для микроскопического исследования крови готовят препарат «толстой капли», который высушивают и окрашивают метиленовой синькой без фиксации. При микроскопии в положительных случаях обнаруживают на голубом фоне менингококки, имеющие типичную морфологию, окруженные капсулой в виде бесцветного ореола. Трупный материал исследуют только бактериоскопически из-за низкой жизнеспособности менингококка. Носоглоточная слизь не ми крое копируется из-за наличия в ней условно-патогенных нейссерий, морфологически сходных с менингококком. Бактериологическое исследование проводят с целью выделения и идентификации чистой культуры менингококка.

Бактериологическому исследованию подвергают носоглоточную слизь, кровь и ликвор. Посев материала для получения чистой культуры производят на плотные или полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь или асцитическую жидкость. Культуры инкубируют в течение 18-24 ч при 37 °С в сосуде со свечой или в специальном термостате с повышенным содержанием (8—10 %) СО2. Идентификацию выделенной культуры проводят на основании следующих свойств:

•оксидазаположительные колонии рассматривают как возможно принадлежащие к роду Neisseria,

•наличие в культуре Neisseria meningitidis подтверждают образованием уксусной кислоты при ферментации глюкозы и мальтозы (но не лактозы, сахарозы и фруктозы);

•принадлежность к серогруппам определяют в реакции агглютинации.

Серологический метод используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе и других видах исследуемого мате риала или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА, РИА, иммуноэлектрофорез, реакцию коагглютинации. У больных менингококковой инфекцией АТ обнаруживаются с конца первой недели болезни, достигая максимума на 2—3-й неделе, а затем их титр снижается. У больных и лиц, перенесщих менингококковую инфекцию, в сыворотке обнаруживаются специфические АТ: бактерицидные, агглютинины, гемагглютинины. В разгар менингококковой инфекции повышается уровень IgM, особенно при генерализованных формах; в период реконвалесценции, в основном, обнаруживаются IgG.

84. Формы менингококковых инфекций.

Менингококковая инфекция клинически протекает в локализованной форме: менингококконосительство, острый назофарингит или в генерализованной форме: менингококцемия, менингит, менингоэнцефалит, эндокардит, артрит, полиартрит, иридоциклит, пневмония.

1)Назофарингит – наиболее легкая форма болезни.

42

88 . Бактериоскопическая диагностика менингококковых инфекций.

Бактериоскопическое исследование ликвора и крови позволяет определить наличие возбудителя. При наличии гнойного ликвора готовят мазки без предварительной обработки; если ликвор прозрачный или мутный, его центрифугируют при 3500 об/мин в течение 5 мин, а затем из осадка готовят мазки, которые окрашивают по Граму, метиленовым синим и другими методами для определения лейкоцитарной формулы, выявления менингококков и определения их количества. При микроскопии мазков ликвора в положительных случаях наблюдают полинуклеарные лейкоциты, эритроциты, нити фибрина и менингококки в виде типичных грамотрицательных диплококков бобовидной формы, окруженных капсулой в виде плохоокрашенного ореола. Результаты микроскопического исследования используются только в качестве предвари тельного, ориентировочного ответа, поскольку морфологически нельзя отдифференцировать менингококк от других грамотрицательных бактерий, способных вызывать менингит (гонококки, другие нейссерии, гемофилы, бранхамеллы). Для микроскопического исследования крови готовят препарат «толстой капли», который высушивают и окрашивают метиленовой синькой без фиксации. При микроскопии в положительных случаях обнаруживают на голубом фоне менингококки, имеющие типичную морфологию, окруженные капсулой в виде бесцветного ореола. Трупный материал исследуют только бактериоскопически из-за низкой жизнеспособности менингококка. Носоглоточная слизь не ми крое копируется из-за наличия в ней условно-патогенных нейссерий, морфологически сходных с менингококком. Бактериологическое исследование проводят с целью выделения и идентификации чистой культуры менингококка.

89. Серологическая классификация менингококков.

По капсульным АГ выделяют девять серогрупп (А, В, С, D, X, Y, Z, W135 и 29Е), а также сравнительно недавно выделенные еще четыре серогруппы (Н, I, К, L).

Капсульные АГ некоторых серогрупп иммуногенны для человека. Штаммы серо группы А вызывают эпидемические вспышки, В, С и Y — спорадические случаи заболевания.

Высокая вирулентность представителей серогруппы А связана, по-видимому, с их высокой инвазивной активностью.

На основании различий типоспецифических АГ выделяют серотипы, которые обозначают арабскими цифрами (серотипы выявлены в серогруппах В, С, Y, W135). Особый интерес среди серотиповых АГ представляет АГ серотип 2 группы В. Он наиболее изучен и является общим для штаммов, принадлежаших к группам В, С, У, W135.

Выявлено, что штаммы, выделенные от больных с генерализованной формой менингококковой инфекции, часто относятся к серотипу 2. В связи с этим наличие АГ

44

серотипа 2 рассматривается как фактор патогенности менингококка. Серотипирование имеет большое значение в эпидемиологии, так как периодически наблюдающиеся подъемы заболеваемости связаны со сменой циркулирующих серогрупп. Во время эпидемий преобладают менингококки групп А и С, которые являются наиболее патогенными.

90. Иммунологическая диагностика менингококковых инфекций.

Приготовленные из свежих культур менингококков различных серогрупп препараты обрабатывают сывороткой, а затем флюоресцирующей сывороткой против глобулинов человека. После этого препараты изучают в люминесцентном микроскопе.

91. Специфическая профилактика менингококковых инфекций.

Проводится комплекс мер, направленных на ликвидацию источника инфекции: больных необходимо выявлять, изолировать и лечить; носителей — выявлять и санировать.

Проводится бактериологическое обследование в окружении больного с целью выявления здоровых носителей менингококка. Выявленные носители санируются антибиотиками.

С целью разрыва механизма и путей передачи разуплотняют и разобщают детские коллективы, общежития, казармы. Роспуск контактировавших лиц производится на срок от 10 до 30 дней. В очаге проводятся текущая дезинфекция, проветривание помещений, ультрафиолетовое облучение и т. п. В очаге инфекции проводится специфическая активная и пассивная профилактика.

Для создания пассивного иммунитета детям дошкольного возраста вводят однократно иммуноглобулин в дозе 1,5 -3,0 мл не позднее 7-го дня после регистрации первого случая заболевания.

Профилактический эффект иммуноглобулина сохраняется в течение нескольких месяцев после введения. Для активной иммунизации используют вакцины из очищенных капсульных поли сахаридов менингококков серогрупп А и С, В России проводят вакцинацию групп риска менингококковой вакциной А или бивакциной А+С. Кроме того, возможно проведение химиопрофилактики с применением антибиотиков в замкнутых коллективах, если имеет место хотя бы один случай менингококковой инфекции.

92. Отличия пневмококков от других стрептококков.

При длительном культивировании на бульоне начинает образовывать длинные цепочки и растет подобно стрептококку на дне пробирки.

45

На простом мясо-пептонном агаре образует маленькие колонии с более темным центром и светлой периферией; на сывороточном или асцитическом агаре дает колонии сероватого цвета; на кровяном агаре не дает гемолиза, но образует колонии зеленого цвета вследствие превращения НЬ эритроцитов в метгемоглобин. При прибавлении к бульонной культуре желчи (1 : 10) или желчнокислых солей пневмококки растворяются

(культура просветляется); этим признаком пользуются для отличия пневмококка от

стрептококка.

Другим диференциальным признаком для отличия пневмококка от стрептококка служит способность пневмококка разлагать полисахарид инулин, обычно стрептококком не разлагаемый.

Специфическим является также отношение пневмококка к оптохину (дериват гидрохинина), убивающему пневмококк в отличие от стрептококка как in vivo, так in vitro.

93. Факторы патогенности менингококков.

Основной фактор патогенности — капсула, защищающая менингококки от различных воздействий, в первую очередь от фагоцитоза. АТ, образующиеся к полисахаридам капсулы, проявляют бактерицидные свойства.

Токсические проявления менингококковой инфекции обусловлены высокотоксичным эндотоксином, который по летальности для лабораторных животных сравним с эндотоксинами энтеробактерий.

Для генерализованных форм менингококковой инфекции ха рактерны кожные высыпания, ЛПС (липополисахарид) менингококков проявляют выраженное пирогенное действие, а также вызывают образование АТ.

Тяжесть болезни определяется количеством эндотоксина в крови больного. Эндотоксину принадлежит ведущая роль в патогенезе поражений сосудов и кровоизлия ний во внутренние органы. Наиболее постоянный и диагностически значимый признак менингококцемии — экзантема в виде характерной геморрагической сыпи (петехии, пурпура, экхимозы). К другим факторам патогенности относятся пили, белки наружной мембраны, наличие гиалуронидазы и нейроминидазы.

Пили являются фактором адгезии к слизистой оболочке носоглотки и, предположительно, тканям мозговой оболочки. Менингококки выделяют IgA-протеазы, расщепляющие молекулы IgA в шарнирной области, что защищает бактерии от действия Ig. Лабораторные животные мало восприимчивы к менингококку.

46

Субдуральное введение живой культуры может вызвать заболевание у кроликов, обезьян и коз. Внутрибрюшинное заражение белых мышей и морских свинок вызывает их гибель с явлениями интокси кации. Заражение в алантоисную полость 11—18- дневных куриных эмбрионов вызывает гибель эмбриона через 48 ч.

ГОНОКОККИ

94. Какие заболевания вызывают гонококки?

Гонококковая инфекция — это острое или хроническое инфекционное заболевание человека, вызываемое Neisseria gonorrhoeae, которое передается половым путем и характеризуется гнойным воспалением слизистой оболочки мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз (бленнорея), других органов, интоксикацией.

Гонококковая инфекция проявляется в виде гнойного воспаления слизистой оболочки мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз (бленнорея), других органов.

Инкубационный период 2-4 дня. Заболевание характеризуется резью при мочеиспускании, выделением гноя из уретры. Заболевание имеет тенденцию к переходу в хроническую бессимптомную форму. Нелеченая гонорея является одной из основных причин бесплодия как у мужчин, так и у женщин. Нелеченая бленнорея ведет к слепоте.

Гонококковая инфекция проявляется воспалением тазовых органов и бесплодием у женщин. Диссеминирование возбудителя может приводить к пельвиоперитониту, менингитам, артритам, эндо кардитам и септицемиям. Женщины более склонны к диссеминированным поражениям. Заболевание у них часто протекает бессимптомно, поэтому свое временное лечение не проводится, что делает женщин основным резервуаром инфекции. У мужчин бессимптомное течение гонореи наблюдают редко.

95. Морфологические, тинкториальные, культуральные свойства гонококков.

Морфология. Неподвижные аспорогенные грамотрицательные диплококки (средний размер клетки 1,25-1,0 х 0,7-0,8 мкм), образующие капсулу. Полиморфны — встречаются более мелкие или более крупные клетки, а также палочковидные формы. Тикториальные свойства. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зеленым и др.), цитоплазма имеет осмиефильные включения. Под действием пенициллина образу ют L-формы; под влиянием химиопрепаратов быстро меняют свойства и становятся грамположительными.

Культуральные свойства. Аэробы, хемоорганотрофы; для роста требуют свежеприготовленных влажных питательных сред с добавлением нативных белков крови, сыворотки или асцитической жидкости; широко используют безасцитные среды;

47

оптимум pH 7 ,2 -7 ,4 , температуры — 37 °С. Не вызывают гемолиза на средах, содержаших кровь; на средах с добавлением молока, желатина и картофеля не растут.

Через 24 ч на плотных питательных средах гонококки, содержащие в клеточной стенке протеин II, образуют слегка мутные бес цветные колонии; бактерии, не содержащие протеин II, образуют круглые прозрачные колонии в виде капель росы (1-3 мм в диаметре) с ровными краями. На жидких питательных средах растут диффузно и образуют поверхностную пленку, через несколько дней оседающую на дно.

96. Бактериоскопическая диагностика гонореи.

Бактериоскопическое исследование является основным методом диагностики острой гонореи и бленнореи.

Готовят два мазка, один из которых окрашивают по Граму, а второй — метиленовым синим, и микроскопируют. В мазке, окрашенном по Граму, в положительном случае можно обнаружить фамотрицательные диплококки бобовидной формы, а в мазке, окрашенном метиленовым синим, — картину незавершенного фагоцитоза. Окраска по Граму позволяет дифференцировать гонококки с другими бактериями.

Для получения более четких очертаний гонококков мазки фиксируют диметилсульфоксидом. В связи с тем, что в исследуемом материале могут находиться и другие грамотрицательные бактерии, морфологически сходные с гонококками, применяют прямой и непрямой варианты РИФ. При прямом варианте мазки обрабатывают флюоресцирующими антителами против гонококков, при непрямом — используют гонококки, сыворотку больного и антиглобулиновую сыворотку.

97. Бактериологическая диагностика гонореи.

Бактериологическое исследование проводят в тех случаях, когда гонококки в мазках не обнаруживают или находят атипичные, измененные формы.

Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища и шейки матки, из прямой кишки и глотки (Neisseria gonorrhoeae часто обнаруживают при бессимптомном течении болезни в отделяемом из прямой кишки у женщин и мужчингомосексуалистов), с конъюнктивы глаза (при бленнорее), а также сыворотка крови. У мужчин-гомосексуалистов материал необходимо забирать также из ротовой полости, глотки и прямой кишки.

Результаты микробиологического исследования зависят от соблюдения правил забора материала из передней уретры и простаты. За 2—3 суток перед забором материала необходимо прекратить применение дезинфицирующих и антибактериальных

48

препаратов, воздерживаться от мочеиспускания в течение 4-6 ч и провести туалет окружающих кожных покровов. Забор материала должен проводить лечащий врач.

98. Серологическая диагностика гонореи.

Серологический метод используют при хронической гонорее, при отсутствии у больного выделений. Проводят РСК по Борде—Жангу по стандартной схеме, которая бывает положительной с 3 -4 -й недели болезни; в острых случаях реакция положительна у 35 % больных, при хронических — у 65 % (слабополо жительная у 100 %). В качестве АГ для РСК применяют гоновакцину или АГ из убитых гонококков.

99. Иммунитет при гонореи.

Иммунитет — нестерильный, практически отсутствует после перенесенного заболевания, поэтому часто регистрируются повторные заболевания.

100. Для каких целей используют гоновакцину?

Показания: Диагностика (установление излеченности гонореи), вспомогательный метод лечения гонорейной инфекции с 3- летнего возраста. Применение показано после безуспешной антибиотикотерапии при вяло протекающих рецидивах, при свежих торпидных и хронических формах заболевания, мужчинам с осложненной и женщинам с восходящей гонореей (после стихания острых воспалительных явлений), в гинекологической практике при лечении воспалительных процессов.

101. Факторы патогенности гонококков.

Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, поверхностные белки наружной мембраны, протеазы.

Все свежевыделенные культуры имеют капсулу, которая обладает антифагоцитарным действием (препятствует прямому контакту микробицидных субстанций с клеточной стенкой, маскирует ее антигенные детерминанты).

АТ-опсонины к АГ капсулы стимулируют фагоцитоз гонококков. Полисахарвд в капсулах не обнаружены, присущие им ф у н к ц ш выполняют высокомолекулярные поверхностные по лифосфаты.

Пили обеспечивают адгезию к эпителию.

Клеточная стенка содержит эндотоксин.

49

Наружная мембрана содержит белки трех классов. Поверхностный белок I класса обуславливает устойчивость к бактерицидным факторам слизистых оболочек, а также инвазивные свойства бактерий и их способность вызывать системные инфекции.

Поверхностный белок II класса образует отдельную белковую фракцию, называемую протеинами мутности или Ора-протеинами (от англ. opacity — мутность). Их считают первичными факторами вирулентности гонококков, и они обуславливают прикрепление к эпителию, а также ингибируют фагоцитарные реакции. Синтезируют IgA1-протеазу, действующую внеклеточно и разрушающую пролин-треониновые связи в тяжелых цепях Ig, а также расщепляющую молекулу IgA в шарнирной области. Эти эффекты инактивируют АТ, препятствующие адгезии, что облегчает прикрепление к рецепторам эпителиальных клеток, а также защищает баетерии от фагоцитоза, опосредованного АТ.

102. Эпидемиология гонокококковых инфекций.

Термин «гонорея» ввел Талон во II в. н. э., хотя заболевание известно очень давно; во всяком случае, в вавилонских, ассирийских и греческих мифах упоминается болезнь, являющаяся, судя по описанию клинической картины, гонореей.

В настоящее время гонорею относят к наиболее распространенным инфекционным заболеваниям, передаваемым половым путем. Источник инфекции — больной человек, особенно хронической бессимптомно протекающей формой гонореи. Экологической нишей являются слизистые оболочки мочеполовых путей человека. Механизм передачи— контактный, путь - половой, крайне редко — бытовой (на пример, больная гонореей мать может заразить маленькую дочь при пользовании обшей мочалкой, сиденьем унитаза и т. п.). Восприимчивость к гонококкам очень высокая.

ДИФТЕРИЯ

Возбудитель дифтерии - Corynebacterium diphtheriae.

Дифтерия — это острая, антропонозная, воздушно-капельная, токсинемическая инфекция, которая характеризуется развитием воспалительных изменений слизистых оболочек ротоглотки и верхних дыхательных путей, а также слизистых оболочек половых органов, глаза, сопровождающихся образованием плотно спаянных с подлежащими тканями фибринозных пленок, на фоне симптомов специфической интоксикации макроорганизма.

Название заболевания происходит от греч. diphthera — пленка, перепонка, кожа, что обусловлено клиническими проявлениями данного заболевания. Возбудителем дифтерии являются токсигенные штаммы Corynebacterium diphtheriae.

50