Itogavya / Ответы к итоговой МБ №4 ООИ (КубГМУ Live)

63. Как определяют гиалуронидазную активность?

Гиалуронидазную активность определяют, прибавляя к 0,5 мл бульонной культуры стафилококка 0,5 мл препарата гиалуроновой кислоты с пупочного канатика. Смесь инкубируют 30 мин при 37 ° С и 10 мин при 4 ° С. В пробирку добавляют 4 капли 15% уксусной кислоты, встряхивают и через 5 мин делают учет результатов. Отсутствие сгустка свидетельствует о наличии гиалуронидазы, наличие сгустка - о ее отсутствии.

Для изготовления гиалуроновой кислоты свежую пуповину новорожденных измельчают, заливают двойным количеством дистиллированной воды. Смесь выдерживают 24 ч в холодильнике, затем нагревают и кипятят до свертывания кусочков пуповины. Полученный гиалуронат фильтруют через ватно-марлевый фильтр и проверяют на образование сгустка.

64. Мембраноповреждающие токсины , разновидности , механизмы действия.

Мембраноповреждающие токсины могут повреждать эритроциты (гемолизины), лейкоциты, макрофаги, тромбоциты и др. Выделяют несколько типов, отличающихся по антигенной структуре, спектру лизируемых клеток, скорости действия. мембраноповреждающие токсины — а, р, 8 и у. Ранее их описывали как гемолизины, некротоксины, лейкоцидины, летальные токсины, т. е. по характеру их действия: гемолиз эритроцитов, некроз при внутрикожном введении кролику, разрушение лейкоцитов, смерть кролика при внутривенном введении. Однако оказалось, что такой эффект вызывает один и тот же фактор — мембрано-повреждающий токсин. Он обладает цитолитическим действием в отношении различных типов клеток, которое проявляется следующим образом. Молекулы этого токсина сначала связываются с неизвестными пока рецепторами мембраны клетки-мишени или неспецифически абсорбируются липидами, содержащимися в мембране, а затем формируют из 7 молекул грибовидный гептамер, состоящий из 3 доменов. Домены, формирующие «шляпку» и «край», расположены на внешней поверхности мембран, а домен «ножки» служит трансмембранным каналом-порой. Через нее и происходит вход и выход небольших молекул и ионов, что ведет к набуханию и гибели клеток, имеющих ядро, и осмотическому лизису эритроцитов.

Обнаружено несколько типов мембраноповреждающих (порообразующих) токсинов: а-, р-, 5- и у-гемолизины (а-, р-, 8- и у-токсины). Они различаются по ряду свойств. Гемолизин а чаще обнаруживается у стафилококков, выделенных от человека, он лизирует эритроциты человека, кроликов и баранов. Летальный эффект у кроликов вызывает при внутривенном введении через 3—5 мин. Гемолизин р обнаруживают чаще у стафилококков животного происхождения, он лизирует человеческие и бараньи эритроциты (лучше при более низкой температуре). Гемолизин 5 лизирует эритроциты человека и многих видов животных. Летальное действие на кролика при внутривенном

31

введении вызывает через 16—24—48 ч. Очень часто у стафилококков обнаруживаются а- и 8-токсины одновременно;

65. Свойства стафилококковых энтеротоксинов.

Они характеризуются антигенной специфичностью, термостабильностью, устойчивостью к действию формалина и пищеварительных ферментов. Устойчивы при диапозоне pH от 4.5 до 10.0. Энтеротоксины низкомолекулярные белки с м.м. от 26 до 34 кД со свойствами суперантиенов 66.(нашла с интернета )

Плазмокоагулазу выявляют путем внесения выделенной культуры в пробирку с цитратной плазмы кролика. Ее можно приготовить в любой лаборатории. У кролика из сердца берут 8 мл крови, вносят в пробирку с 2 мл 5% лимонно-кислого натрия и ставят в холодильник. После полной осадки форменных элементов плазму отсасывают в стерильную пробирку. Она может храниться в холодильнике 8-10 дней. Перед использованием ее разводят 1:5 (1 мл плазмы и 4 мл изотонического раствора хлорида натрия) и разливают в аглютинацийни стерильные пробирки по 0,5 мл. Полную петлю культуры стафилококков эмульгируют в плазме и помещают в термостат на 3 часа, затем оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов. Предварительный учет свертывания плазмы проводят через 3 ч, окончательный - на второй день. Очень удобно пользоваться стандартной сухой цитратной плазмы кролика. Перед употреблением в ампулу добавляют 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и после полного растворения ее разводят 1:5. Плазма человека малопригодна для постановки реакции плазмокоагуляции, поскольку в ней могут быть консерванты, лекарственные вещества, антитела, которые могут подавлять образование плазмокоагулаза.

Если выделена культура вызывает гемолиз, коагулирует плазму и дает положительную лецитовителазну реакцию, уже на третий день можно выдать результат на наличие

S. aureus. Если культура обладает только плазмокоагулаза или только вителазну активность, для окончательного установления вида стафилококка необходимо определить дополнительные критерии патогенности: ферментацию маннита в анаэробных условиях, ДНК-азную активность, продукцию лизоцима, фосфатазы, а также определить чувствительность к новобиоцин.

67. Методы определения чувствительности к антибиотикам.

Чаще всего для определения чувствительности бактерий к антибиотикам используются два метода: метод дискови метод серийных разведений.

1. Метод дисков. Бумажные диски, пропитанные определенными антибиотиками, помещают на газон исследуемой бактериальной культуры в чашке Петри. Посевы инкубируют в течение 16-24 часов, после чего учитывают результаты опыта по образованию зон задерки роста бактерий.

32

По диаметру зон задержки роста ориентировачно судят о степени чувствительности бакторий к антибиотикам. Зона задержки до 15 мм указывает на слабую, до 25 мм – на среднюю и свыше 25мм – на высокую чувствительность. Более точные результаты получают при использовании метода серийных разведений.

2. Метод серийных разведений. Этот метод позволяет определить минимальную задерживающую концентрацию антибиотика для данного микроорганизма (МЗК) как на жидких, так и на плотных питательных средах.

МПБ разливают по 2мл в серрию пробирок. Готовят основной раствор антибиотика, ддля чего берут навеску антибиотика и растворяют в дистиллированной воде из расчета 1мг на мл растворителя.

Левомицетин предварительно растворяют в 96* этиловом спирте из расчета 0,25мл спирта на 1мг антибиотика; после полного растворения добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы раствор содежрал в 1мл 1 мгантибиотика.

Тетрациклин и окситетрациклин растворяют в сантинормальном растворе соляной кислоты из расчета 1мл на 1 мг антибиотика Этиломицин сначало растворяют в чистом этиловом спирте из расчета 1 мл на 10мг

эритромицина. После приготовления добавляют такое количество дистилированной воды, чтобы получить раствор, содержащий в 1мл1мг пнтибиотика Эритромицин сначало растворяют в чистом этилом спирте из расчета 1 мл 1 мг антибиотика

Исходный материал антибиотика в количестве 2млвносят в первую пробирку с МПБ,перемещают и получают определенную его концентрацию.

Из первой пробирки 2мл разведенного антибиотика переносят во вторуу пробирку и после перешивания переносят 2мл в третью проьирку и т.д. до предпоследней, откуда 2мл выливают. Последняя пробирка является контролем, в ней нет антибиотика и она свидетельствует о пригодности среды для роста культуры.

После разведения антибиотика во все пробирки вносят по 0,1мл испытуемной бульонной культуры.Для этого используют 3-4 –часовые или 18-часовые культуры, разведенные МПБ в 50 раз. Пробирки помещают в термостат на 12-18 часов, но предварительно результаты можно учитывать через 6-8 часов.

По истечении необходимого срока инкубации определяют максимальное разведение антибиотика, которое еще подавляет рост культуры. Концентрация антибиотика в последней пробирке с видимой задержкой роста и представляет собой минимальную задерживающую концентрацию антибиотика (МЗК).

Штамм считается чувствительным к антибиотикам, если МЗК препарата для данного штамма соответствует концентрации этого препарата, создаваемой в организме.

33

68. Классификация стрептококков по росту на кровяном агаре.

Существует ряд классификаций стрептококков. Наиболее проста классификация, основанная на особенностях роста этих микроорганизмов на агаре с кровью барана (по отношению к эритроцитам).

Бета — гемолитические стрептококки - при росте на кровяном агаре образуют вокруг колонии четкую зону гемолиза, альфа — гемолитические — вокруг колонии зеленоватое окрашивание и частичный

гемолиз (позеленени обусловленно превращение окси- в метгемоглобин), Альфа1 — гемолитические стрептококки по сравнению с ветта-гемолитическими стрептококками образуют менее выраженную и мутноватую зону гемолиза;

Альфа и альфа1-стрептококки называют S.viridans (зеленящими).

гамма- негемолитические —не вызывают гемолиза на плотной питательной среде.

69. Культуральные свойства стрептококков.

Стрептококки плохо растут на простых питательных средах. Обычно используют среды с кровью или сывороткой крови. Чаще применяют сахарный бульон и кровяной агар, содержащий 5% дефибринированной крови.Среда не должна содержать восстанавливающихся сахаров, так как они угнетают гемолиз. На бульоне рост придонно

— пристеночный в виде крошковатого осадка, бульон чаще прозрачен. Оптимум температуры +37о С, рН — 7,2-7,6. На плотных средах стрептококки серогруппы А образуют колонии трех типов:

-мукоидные — крупные, блестящие, напоминают капельку воды, но не имеют вязкую консистенцию, характерны для свежевыделенных вирулентных штаммов, имеющих капсулу;

-шероховатые — более крупные, чем мукоидные, плоские, с неровной поверхностью и фестончатыми краями — характерны для вирулентных штаммов, имеющих М- антигены;

-гладкие — мене крупные колонии с ровными краями, образуют невирулентные штаммы.

70. Выделение чистой культуры пиогенных стрептококков.

Посев материала на питательные среды и выделение чистой культуры: для первичной изоляции стрептококков из клинического материала пользуются преимущественно кровяным агаром, что позволяет дифференцировать изоляты по гемолитической активности, реже – сывороточным, сахарным агарами и другими универсальными средами. При исследовании проб, сильно контаминированных микроорганизмами, применяют селективные среды, а при подозрении на инфекцию стрептококка группы В

34

материал перед посевом на кровяной агар инокулируют в специальную обогатительную среду (она может служить транспортной). Бактериоскопия мазков культур: подтверждает принадлежность изолятов к роду Streptococcus и в ряде случаев служит основой для их первичной видовой идентификации.

71. Какие заболевания вызывает стрептококки.

Болезни, вызываемые стрептококками, распределены по 11 классам, основные группы этих заболеваний таковы:

1-различные нагноительные процессыабсцессы, флегмоны, отиты, перитониты, плевриты, остеомиелиты и др, 2-рожистые воспаленираневая инфекция(воспаление лимфотических сосудов кожи и подкожной клетчатки)

3-гнойные осложнения ран(особенно в военное время)- абсцкссы, флегмоны, сепсис и др. 4-ангины- острые и хронические 5-сепсисы:острый сепсис(острый эндокардит); хронический сепсис(хронический

эндокардит); послеродовые(пуэрпиральный сепсис) 6- равматизм

7- пневмонии, менингиты, ползучая язва роговицы(пневмококк) 8-скарлатина

9-кариес зубов - возбудителем его чаще всего является S.mutans.

Важную роль в патологии человека играют и стрептококки серогруппы D и B.Стрептококки серогрупы D (энтерококки) презнаны возбудителями раневых инфекций, различных хирургических заболеваний, гнойных осдложнений у беременных, родильных и гинекологических больниц, инфецируют почки, мочевой пузырь, вызывают сепсис, эндокардит, пневмонии, пищевые токсикоинфекции. Стрептококки серогруппы В часто вызывают заболевания новорожденных – инфекции дыхателых путей, менингит, септицемию.

72. Серологическая классификация стрептококков.

Большое практическое значение получила серологическая классификация. Стрептококки имеют сложное антигенное строение: у них имеется общий для всего рода антиген и различные другие антигены. Среди них особое значение для классификации имеют группоспецифические полисахаридные антигены, локализованные в клеточной стенке. По этим антигена по предложению Р. Лансфельд стрептококк разделены на серологические группы, обозначаемые буквами A, B, C, D, F, G и тд. Сейчас известно 20 серологических групп стрептококков (от A до V). Патогенные для человека стрептококки относятся к группе А, В, D, реже – к С, F и G. Групповые полисахаридные антигены определяются с помощью соответствующих антисывороток в реакции преципитации.

35

73. Факторы патогеннности стрептококков.

1.Белок М-главный фактор патогенности. М-белки стрептококка представляют собой фибриллярные молекулы, котлрые образуют фимбрии на поверхности стеночной клетки стрептококков группы-А. Ь-белок определяетадгезивные свойства, угнетают фагоцитоз. Определет антигенную типоспецифичность и обладает свойствами суперантигена.

2.Капсула – состоит из гиалуроновой кислоты, аналогичной той, которая входит в состав кожи, поэтому фагоциты не распознают стрептококки, имеющие капсулу, как чужеродные антигены.

3.Эритрогенин - скарлатинозный токсин, суперантиген, вызывает СТШ. Различают 3 серотипа (А,В и С). У больных скарлатиной он вызывает появление ярко-красной сыпи на коже и слизистой оболочке. Токсин обладает пирогенным, аллергенным, иммуносупрессивным и митогенным действием, разрушает тромбоциты.

4.Гемолизин (стрептолизин) О разрушает жритроциты, обладает цитотоксическим, в том числе лейкотоксическим и кардиотоксическим, действие, его образуют большенство стрептококков сергруппы А, С и G.

5.Гемолизин (стрептолизин) S обладает гемолитическим и цитотоксическим действие. В отличие от стрептолизина О, стрептолизин S, является очень слабым антигеном, его также продуцируют стрептококки серогруппы А, С и G.

6.Стрептокиназафермент, который превращает преактиватор в активатор, а он – плазминоген в плазмин, последний и гидролизует фибрин. Таким оброзом, стрептокиназа, активипуя фибринолиз крови, повышает инвазивные свойства стрептококка.

7. Фактор, угнетающий хемотаксис (аминопептидаза), подавляет подвижность нейтрофильных фагоцитов.

8.Гиалуронидаза-фактор инвазии.

9.Фактор помутнениягидролиз липопротиедов сыворотки крови.

10.Протеазыразрушение различных белков; возможно. С ними связанна тканевая токсичность.

11.ДНКазы (A,B,C,D) гидролиз ДНК.

12.Способность взаимодействия с Fc-фрагментом IgG с помощью рецептора2-угнетение системы комплемента и активности ыагоцитов

13.Выраженные аллергические свойствастрептококков, которые обуславливают сенсибилизацию организма.

74. Какие стрептококки вызывают скарлатину.

Скарлатина - острое инфекционное заболевание, которое клинически проявляется ангиной, лимфоденитом, мелкоточечной ярко-красной сыпьюна коже и слизистой оболочкес последующим шелушением и аллергическим осложнением. Возбудителями скарлтины яляются стрептококки серогруппы А (β-гемолитический стрептококк группы А) имеющие М-антиген и продуцирующие эритрогенин. Этиологическую роль при

36

скарлатине приписывают различным микроорганизмампростейшим, анаэробным и другим коккам,стрептококкам, фильтрующимся стрептококка, вирусам.

75. Патогенез скарлатины.

Заражение при скарлатине происходит в основном воздушно-капельным путем, однако входными воротами могут быть и любые раневые поверхности. Инкубационный период 3—7, иногда 11 дней. В патогенезе скарлатины находят свое отражение 3 основных момента, связанные со свойствами возбудителя:

1.действие скарлатинозного токсина, который обусловливает развитие токсикоза — первый период болезни. Он характеризуется поражением периферических кровеносных сосудов, появлением мелкоточечной сыпи ярко-красного цвета, а также повышением температуры и общей интоксикацией. Развитие иммунитета связано с появлением и накоплением в крови антитоксина;

2.действие самого стрептококка. Оно неспецифично и проявляется в развитии различных гнойно-септических процессов (отиты, лимфадениты, нефриты появляются на 2—3-й нед. болезни);

3.сенсибилизация организма. Она находит свое отражение в виде различных осложнений типа нефрозонефритов, полиартритов, сердечно-сосудистых заболеваний и т. п. на 2—3-й нед. болезни.

В клинике скарлатины также различают 1(токсикоз) и 2 стадию, когда наблюдаются гнойно-воспалительные и аллергические осложнения. В связи с применением для лечения скарлатины антибиотиков (пеницеллин) частота и тяжесть осложнений значительно снизились.

76. Особенности иммунитета при скарлатине.

Постинфекционный иммунитет прочный, длительный (вторичные заболеввания наблюдаются в 2-16% случаев), обусловлен антитоксикантами и клетками иммуной защиты. У переболевших сохраняется и аллергическое состояние к скарлатинозному аллергену. Оно выявляется с помощью внутрикожного введения убитых стрептококков. У переболевших на месте введенияпокраснение, припухлости, болезненность (проба Аристовского-Фанкони). Для проверки антитоксического иммунитета у детей используют реакцию Дика. С ее помощью установленно, что пассивный иммунитет у детей 1-го года жизни сохраняется в течение 3-4 месяцев.

77. Патогенез равматизма.

Этиологическая связь стрептококков группы А с ревматизмом коротко может быть подтверждена следующими фактами. Во-первых, многочисленные клинические и эпидемиологические исследования продемонстрировали тесную связь инфекции, вызванной стрептококками группы А, с ревматизмом. Во-вторых, в острой фазе

37

ревматизма практически всегда обнаруживаются иммунологические признаки перенесенной ранее стрептококковой инфекции (повышенные титры антител к стрептококковым антителам). Более того, в проспективных длительных исследованиях было показано, что ревматизм обостряется только вслед за интеркуррентной стрептококковой инфекцией. В-третьих, как первичные, так и повторные атаки ревматизма можно предотвратить адекватным лечением или профилактикой стрептококковой инфекции с помощью антибактериальной терапии. Воротами инфекции при начале ревматического процесса служит глотка. Стрептококковые поражения кожи или горла, вызванные некоторыми штаммами группы А, видимо, практически никогда не вызывают ревматизма.

Механизм, в соответствии с которым стрептококки группы А запускают патологический процесс, остается неизвестным. Ревматизм развивается у относительно небольшого процента лиц, перенесших стрептококковое заболевание горла. После того как через несколько дней или недель после острой стрептококковой инфекции развивается ревматизм, в пораженных органах микроорганизмы уже не обнаруживаются. Не было установлено причинной связи какой-либо из составных частей стрептококка с последующим развитием заболевания. Ни одна из них не выступает в качестве прямого тканевого токсина или антигена, вызывающего реакцию гиперчувствительности. Была выявлена перекрестная реактивность нескольких стрептококковых антигенов с тканями сердца и других органов. Однако их непосредственное отношение к патогенезу ревматизма не доказано, и аутоиммунный ответ, вызванный стрептококком, остается единственной популярной, но недоказанной патогенетической концепцией, объясняющей механизм ревматического процесса.

Ревматизм : патологические изменения.

Морфологические изменения при ревматизме затрагивают весь организм. При этом отмечается избирательная тропность к соединительной ткани. Локальные воспалительные очаги возникают главным образом вокруг мелких кровеносных сосудов

78. Факторы патогенности стрептококков.

1)Белок М – главный фактор патог. М-белки стрептококка представляют собой фибриллярные молекулы, которые образуют фимбрии на поверхности клеточной стенки стрептококков группы А. М-белок определяет адгезивные свойства, угнетает фагоцитоз, определяет АГ типоспецифичность и обладает свойствами суперантигена.

2)Капсула. Состоит из гиалуроновой кислоты, аналогичной той, которая входит в состав ткани, поэтому фагоциты не распознают стрептококки, имеющие капсулу, как чужеродные антигены.

3)Эритрогенин – скарлатинозный токсин, суперАг, вызывает синдром токсического шока. Есть три серотипа( А В С). У больных скарлатиной вызывает появление ярко-

38

красной сыпи на коже и слизистой. Обладает приогенным, аллергенным , иммуносупрессивным и митогенным дейсвием, разрушает тромбоциты.

4)Гемолизин (стрептолизин) О разрушает эритроциты , обладает цитотоксическим, в том числе лейкотоксическим и кардиотоксическим действием.

5)Гемолизин (стрептолизин) S – гемолитич и цитотоксич действие, слабее , чем гемолизин О.

6)Стрептокиназа – активирует фибринолизин крови – повышает инвазивные свойства.

7)Фактор, угнетающий хемотаксис (аминопептидаза)

8)Гиалуронидаза – фактор инвазии

9)Фактор помутнения – гидролиз липопротеидов сыворотки крови.

10)Протеазы – разрушение разл белков

11)ДНКазы

12)Способность взаимодействовать с Fc - фрагментом IgG – угнетение системы комплимента и активности фагоцитов

13)Выраженные аллергенные свойства стрептококков, которые обуславливают сенсибилизацию организма.

79.Морфология пневмококков.

Имеют форму, напоминающую пламя свечи : один конец клетки заострен, другой уплощен. Располагаются обычно парами (плоские концы обращены друг к другу), иногда в виде коротких цепочек. Жгутиков нет, спор нет. В организме человека и животных, на средах, содержащих кровь или сыворотку, образуют капсулу.

80. Правила взятия и пересылки материала при подозрении на менингококковую инфекцию.

Выбор материала для исследования обусловлен клинической формой болезни. Материалом для исследования служат носоглоточная слизь (от больных и носителей), ликвор, кровь, гной с мозговых оболочек, соскоб из элементов геморрагической сыпи на коже и др.

39

При цереброспинальном менингите основным исследуемым материалом является ликвор, который берут в день госпитализации больного асептически люмбальной пункцией в количестве 2—5 мл. Ликвор собирают в стерильную пробирку и сразу же сеют на пита тельные среды или же немедленно, не допуская охлаждения, отправляют в лабораторию.

Носоглоточную слизь берут специальным тампоном, изогнутым под углом, с задней стенки глотки при визуальном контроле, вводя тампон за мягкое нёбо. От трупа исследуемый материал (гной с оболочек мозга, из кожных поражений и т. п.) берут во время вскрытия. Поскольку менингококки очень неустойчивы вне организма человека, клинический материал транспортируют в утепленных контейнерах при 30—35 °С.

81. Эпидемиология менингококковой инфекции.

Экологической нишей для менингококка является слизистая оболочка носоглотки человека. Источник инфекции — больной человек или носитель.

Различают три группы источников инфекции: больные генерализованными формами (около 1 % от общего числа инфицированных лиц), больные назофарингитом (10-20 % от общего числа инфицированных лиц) и здоровые носители. Основное значение имеют здоровые носители, которые составляют до 80-90 %. Здоровое носительство у детей 1-2 лет встречается очень редко; с возрастом количество носителей на растает, достигая максимума к 14—19 годам. Носительство продолжается в среднем 2—3 недели, при наличии хронических воспалительных процессов носоглотки может длиться 6 недель и более.

Механизм передачи — аэрогенный, путь — воздушно-капельный. В отличие от других респираторных инфекций заражение происходит при длительном и тесном контакте.

Заболеваемость носит сезонный характер, увеличиваясь в осенне-зимний период. Восприимчивость к менинкококку невысокая. Болеют в основном дети до 15 лет (70— 80%) и лица юношеского возраста (10— 15 %). Возникновению вспышек способствует скученность детей в детских организованных коллективах, учашихся школ и техникумов, студентов в общежитиях, новобранцев в казармах и т. п. Заболевания возникают при низком распространении носительства менингококка в коллективе (2 % и ниже). В коллективах, где носительство составляет 20 % и выше, заболевания не регистрируются, поскольку интенсивная циркуляция менингококка иммунологически перестраивает организм, обеспечивая «естественную иммунизацию» населения в эндемичных очагах заболевания.

82. Культуральные свойства менингококков.

40