Itogavya / Ответы к итоговой МБ №4 ООИ (КубГМУ Live)

Ответы к итоговому занятию по микробиологии «ООИ, капельные инфекции, гноеродные кокки»

1. Особенности организации работы баклаборатории особо опасных инфекций.

Лаборатория — это учебное, научное или производственное учреждение или же под разделение учреждения/предприятия, выполняющее экспериментальные, контрольные или аналитические исследования.

Лабораторная работа с патогенными микробами проводится в специально оборудованных лабораториях, обеспечивающих режим работы и технику безопасности, исключающие возможность заражения персонала утечку микробов за пределы лаборатории.

По номенклатуре ВОЗ выделяют три категории микробиологических лабораторий:

•базовые (основные или общего типа) лаборатории, которые в связи с конкретными особенностями работы могут быть оборудованы различными защитными устройствами;

•режимные (изолированные) лаборатории или лаборатории удержания;

•лаборатории особого режима (максимально изолированные) или лаборатории максимального удержания.

Безопасность проведения работ в лабораториях всех категорий обеспечивается соблюдением распорядка и правил работы в лаборатории, выполнением требований к лабораторным помещениям и их оснащению, обеспечением лабораторий соответствующим оборудованием, медицинским наблюдением за состоянием здоровья сотрудников, обучением и тренировкой персонала технике безопасности в лаборатории.

Каждую лабораторию оснащают, как минимум, микроскопом, автоклавом, термостата-, ми, сушильными и стерилизационными шкафами, аппаратом для свертывания сыворотки, дистиллятором, центрифугами, лабораторными весами, рН-метром, ФЭК, магнитной мешалкой, моечной ванной.

Рабочие кабинеты лаборатории должны быть светлыми, просторными, теплыми, снабжены подводкой холодной и горячей воды, электричеством, вакуумом, кислородом, воз духом высокого давления и т. п. В некоторых кабинетах оборудуются боксы и вытяжные шкафы.

В число обязательных помещений входят лаборатории кишечных, капельных инфекций, санитарно-бактериологическая, серологическая, а также вспомогательные помещения: средоварка, моечная, стерилизационная (чистая и грязная), регистратура, кладовые, санузел для сотрудников, виварий. В лабораториях с пунктами для обследования на носительство дополнительно оборудуют приемную, процедурную, туалеты для забора

1

материала. Располагают помещения таким образом, чтобы «грязный» и «чистый» потоки не перекрещивались и не соприкасались.

2. Какие признаки (критерии) характерны для особо опасных инфекций?

К категории ООИ бак природы относятся ЧУМА, ТУЛЯРЕМИЯ, БРУЦЕЛЛЕЗ, СИБИРСКАЯ ЯЗВА, САП И ХОЛЕРА. Парвые 5- зооатропонозы, а холерой болеют только люди. Эти болезни отнсятся к ООИ по следующим признакам:

1)обладают высокой заразительностью

2)способны вызывать эпидемии и пандемии

3)вызывают тяжело протекающие заболевания, которые могут привести к летальному исходу в короткие сроки от заражения.

3.Аллергены для диагностики ООИ.

Для специфической профилактики чумы используется живая ослабленная вакцина из штамма EV. Она вводится накожно, внутрикожно или подкожно. Кроме того, предложена сухая таблетированная вакцина для перорального применения. Поствакцинальный иммунитет формируется к 5—6-му дню после прививки и сохраняется в течение 11—12 мес. Для его оценки и ретроспективной диагностики чумы предложена внутрикожная аллергическая проба с пестином. Реакция считается положительной, если на месте введения пестина через 24—48 ч образуется уплотнение не менее 10 мм в диаметре и появляется краснота. Аллергическая проба положительна и у лиц, имеющих постинфекционный иммунитет.

Аллергические диагностические пробы при туляремии предложили Л. М. Хатеневер и др. Тулярин. Состав: взвесь убитых нагреванием туляремийных бактерий вакцинного штамма в физиологическом растворе, содержащем 3% глицерина. Назначение:

диагностика туляремии и проверка иммунитета после прививки и перенесённого заболевания. Способ применения: при накожной пробе каплю тулярина наносят на обработанную кожу наружной поверхности левого плеча в средней трети и стерильным оспопрививательным пером делают две параллельные насечки, а затем втирают тулярин и дают подсохнуть. Реакцию считают положительной при наличии вдоль насечек ясного покраснения и валика отёчности.Учитывают реакцию через 24—48 час. Реакция специфическая и появляется с 5-го. дня заболевания. Как и проба с бруцеллином, проба с тулярином может быть положительной длительное время после заболевания. Отрицательный ответ не исключает инфекции.

А. д. п. при бруцеллезе была предложена Бюрне (Е. Burnet). В качестве аллергена используют бруцеллин .Бруцеллин. Состав: 0,1% раствор полисахаридно-белкового

2

комплекса из вакцинного штамма 19-ВА. Назначение: для диагностики и определения иммунитета у иммунизированных людей аллергической пробой Бюрне. Способ применения: строго внутрикожно в ладонную поверхность предплечья вводят препарат. Реакция положительна при наличии красноты и отёчности диаметром 4-6 см.Учет проводят через 24 часа. Положительная реакция появляется через 6—8 час.Положительный результат наблюдают с 8—9-го дня заболевания и длительное время после выздоровления. Отрицательный ответ, указывающий на отсутствие аллергии, не исключает заболевания.

Антраксин применяется для лечения и профилактики сибирской язвы. Состав: белково- полисахаридно-нуклеиновый комплекс, полученный путем гидролиза вегетативных форм вакцинного штамма сибиреязвенной палочки. Способ применения: внутрикожно на внутренней поверхности предплечья. В кожу другого предплечья для контроля другим шприцем вводят физиологический раствор. Положительной считают воспалительную

реакцию с инфильтратом диаметром более 8 мм.

4.Значение реакции иммунофлуоресценции в диагностике ООИ.

РИФ, реакция иммунофлюоресценции - метод выявления специфических Аг (Ат) с помощью Ат (Аг), конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Применяется для экспресс-диаггностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в иссл. материале), а также для определения АТ и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток. Прямой И. м. состоит в обработке среза ткани или мазка из патологического материала или микробной к-ры с-кой, содержащей специфические АТ, конъюгированные с флюорохромом; препарат промывают для освобождения от несвязанных Ат и рассматривают в люминесцентный микроскоп. В положительных случаях по периферии объекта появляется светящийся иммунный комплекс. Необходим контроль для исключения неспецифического свечения. При непрямом. И. м. на первом этапе срез ткани или мазок обрабатывают нефлюоресцирующей специфической с-кой, на втором -люминесцирующей с-кой противg-глобулинов того животного, с-ка к-рого была применена на первом этапе. В положительном случае образуется светящийся комплекс, состоящий из Аг, Ат к нему и Ат против Ат (сэндвич-метод).

Для сибирской язвы и чумы.

ЧУМА

Чума — острая инфекционная природно-очаговая болезнь, относящаяся к группе карантинных (конвенционных) инфекций, характеризующаяся тяжелой интоксикацией,

3

лихорадкой, поражением кожи, лимфатических узлов, легких, сепсисом и высокой летальностью.

5. Морфологические и тинкториальные особенности возбудителя чумы.

Морфология.

Y. pestis, представляет собой неподвижную палочку овоидной формы, размером 1,5x0,7 мкм, с биполярным окрашиванием анилиновыми красителями. Образует нежную капсулу.

Окрашивается она биполярно. В мазках из клинического материала палочки могут располагаться цепочками, в мазках из бульонных культур — беспорядочно. Для чумной палочки характерны морфологически обособленное ядро и отсутствие подвижности.

Палочки склонны к полиморфизму, образуя нитевидные, колбовидные или шарообразные инволюционные формы (например, на средах с повышенным содержанием NaCI, в старых культурах и тканях разложившихся трупов).

6. Культуральные свойства возбудителя чумы.

Культуральные свойства.

Факультативный анаэроб. Растет на простых питательных средах. Оптимальная температура роста 28 °С, но может расти в широком диапазоне температур от 2 до 40 °С. Для ускорения роста в питательные среды добавляют стимуляторы, сульфит натрия и гемолизированную кровь.

При росте на плотных питательных средах через 8— 12 ч появляются колонии в виде «битого стекла». Через 18—20 ч инкубации вирулентные бактерии образуют колонии в R-форме, которые имеют форму «кружевных платочков»: со светлым центром и фестончатыми краями. Менее вирулентные бактерии образуют колонии в S-форме. На жидких средах бактерии растут в виде пленки, от которой спускаются нити, напоминающие пещерные сталактиты; на дне образуется хлопьевидный осадок.

Биохимическая актвиность достаточно высокая. Синтезирует плазмокоагулазу, фибринолизин, гемолизин, лецитиназу, РНКазу. Основные Биохимические свойства, необходимые для идентификации:

—не разжижает желатину, не расщепляет мочевину,

—не ферментирует рамнозу и сахарозу,

—ферментирует декстрин. По отношению к утилизации глицерина подразделяется на хемовары.

4

7. Подвиды Y. Pestis.

Род Yersinia включает 11 видов, из которых в патологии человека основное значение имеют 3 вида: возбудитель чумы Y. pestis и энтеропатогенные иерсинии, возбудитель псевдоту беркулеза Y. pseudotuberculosis и возбудитель кишечного иерсиниоза

Y. enterocolitica.

Род назван в честь А. Иерсена, который в 1894 г. совместно с С. Китасато открыл возбудителя чумы.

8. Главные факторы патогенности возбудителя чумы.

Патогенность.

Y. pestis обладает многочисленными факторами патогенности, генетическая детерминация которых осуществляется как хромосомой, так и тремя плазмидами: pPst (6 мДа), pCad, (45 мДа), pFra (60 мДа).

Синтез ферментов патогенности: фибринолизина и плазмокоагулазы, а также пестицина детерминирует pPst плазмида; синтез F1-антигена — гликопротеидной природы, который продуцируется при температуре 37 °С и препятствует поглощению микроба фагоцитами, детерминируется pFra плазмидой; этой же плазмидой детерминируется синтез F2-фракции, «мышиного токсина», функция которого окончательно не ясна. Известно, что он обладает способностью блокировать адренергические рецепторы и ингибировать дыхательную активность митохондрий, понижая активность НАДФредуктазы.

Синтез V- и W-антигенов (V-антиген является пептидом, а W-антиген — внеклеточным липопротеином), обеспечивающих способность бактерий сохраняться в фагоцитах, детерминирует pCad плазмида. К факторам патогенности, обеспечивающим антифагоцитарную активность микроба, относят также внеклеточную аденилатциклазу и цитохромоксидазу, а также пигмент, связывающий гемин и способность к синтезу эндогенных пуринов.

9. Плазмиды и факторы патогенности чумы.

См. вопрос № 8.

10. Эпидемиология чумы.

Эпидемиология. Резервуаром возбудителя природной чумы являются дикие, синантропные и домашние животные (всего около 300 видов). Основными носителями являются грызуны (сурки, суслики, полевки, песчанки, крысы , зайцы и др.). У грызунов,

5

впадающих зимой в спячку, чума протекает в хронической латентной форме. Эти животные являются источником инфекции в межэпидемический период.

Вторичные очаги, связанные с деятельностью человека, обнаруживаются в географических зонах между 35° северной широты и 35° южной широты. В них источниками и хранителями возбудителя служат домовые виды крыс и мышей, от них заражаются некоторые виды домашних животных, в частности верблюды и, возможно, кошки.

Специфическими переносчиками возбудителя в обоих типах очагов служат блохи. В инфицированной блохе возбудитель размножается в преджелудке, а при кровососании человека попадает в ток его крови. Человек заражается в очаге трансмиссивно — через укусы инфицированных блох, контактным путем при контакте с инфицированными животными (разделка шкур и мяса зараженных животных) и алиментарным путем — при употреблении в пищу продуктов, обсемененных чумными микробами. От больных легочной формой чумы происходит аэрогенное заражение.

11. Пути и способы заражения человека чумой.

Патогенез и клиника заболевания. Зависят от пути заражения.

При контактном пути, проникая через неповрежденную кожу, и трансмиссивном пути заражения возбудитель с током лимфы заносится в регионарные лимфатические узлы, где происходит его размножение. Вследствие незавершенности фагоцитоза в лимфатических узлах развивается серозно-геморрагическое воспаление, с развитием бубона, т. е. увеличенного лимфатического узла, иногда достигающего размеров куриного яйца. Так возникает первичная бубонная форма. Утрата лимфатическим узлом барьерной функции приводит к генерализации процесса. Возбудитель разносится гематогенно в отдаленные лимфатические узлы, где формируются вторичные бубоны, а также в органы, где развиваются септико-пиемические очаги. Гематогенный занос чумных микробов в легкие приводит к развитию вторично-легочной формы заболевания, которая характеризуется развитием пневмонии с обильным серозно-геморрагическим экссудатом, содержащим большое число микробов. При воздушно-капельном заражении возникает первично-легочная форма, а при контактном и алиментарном путях заражения развиваются соответственно кожная и, в редких случаях, кишечная формы заболевания.

12. Основные клинические формы чумы, материал для МБ диагностики.

Инкубационный период — от нескольких часов до 2 -6 дней, у привитых — до 10 дней. Заболевание начинается остро: температура тела повышается до 39 °С и выше, возникает озноб, наблюдаются явления интоксикации, которая проявляется резкой головной болью, разбитостью, мышечными болями, помрачением сознания. Больной возбужден.

6

Возбудителем кишечного иерсиниоза является Y. enterocolitica. Грамотрицательные палочки, размером 1,8-2,7х0,7-0,9 мкм, подвижные, капсулу не образуют.

Помимо обших для энтеропатогенных иерсиний факторов патогеннос ти, Y. enterocolitica обладает термостабильным энтеротоксином, гомологичным термостабильному энтеротоксину ЭТКП (Энтеротоксигенные кишечные палочки)

Основные биохимические признаки, необходимые для идентификации:

—расщепление мочевины,

—ферментация сахарозы,

—отсутствие ферментации рамнозы,

—продукция орнитиндекарбоксилазы.

Антигенная структура. Обладает О- и Н-антигенами. По строению О-антигена подразделяется более чем на 30 сероваров. Наиболее часто заболевание у человека вызывают серовары О3 , О5 , О9 , О8.

Псевдотуберкулез — инфекционное заболевание, характеризующееся полиморфностью клинической картины, затяжным течением, аллергизацией организма. Возбудитель псевдотуберкулеза Y. Pseudotuberculosis.

Палочка, с биполярным окра шиванием, размером 0,8-2х0,4-0,6 мкм, подвижная, т. е. имеет жгутики, при температурах ниже 37 °С. Образует капсулу.

Основные биохимические признаки, необходимые для идентифиации:

—продукция уреазы,

—ферментация рамнозы,

—отсутствие ферментации сахарозы,

—отсутствие продукции индола,

—отрицательная реакция Фогеса— Проскауэра.

Антигенная структура. Обладает 0-антигеном, на основании строения которого подразделяется на 8 сероваров, а также Н-антигеном.

15. Методы МБ диагностики чумы.

Микробиологическаядиагаостика. Используют бактериоскопический,

бактериологический, биологический и серологический методы исследования, которые проводят в специальных лабораториях, работающих в соответствии с инструкциями о режиме работы противочумных учреждений.

8

Материалами для исследования являются: пунктаты бубонов мокрота, отделяемое карбункулов и язв, кровь, моча, рвотные массы, трупный материал. Материал засевают на питательные среды (мясопептонный агар — МПА, бульон Хоттингера, элективные среды), и ставят биопробу на морских свинках и белых мышах. В качестве экспрессдиагностики используют РИФ, позволяющую поставить предварительный диагноз уже через 2 ч. Серологическое исследование проводится постановкой РИГА, ИФА, PH антител.

16. Специфическая профилактика чумы.

Больные чумой подлежат строгой изоляции и обязательной госпитализации. Для лечения используют этиотропную антибиотикотерапию. Прогноз неблагоприятный, так как при генерализованных формах болезни летальность может достигать 100 %.

Специфическая профилактика осуществляется живой вакциной из штамма EV. После вакцинации развивается иммунитет продолжительностью до 6 месяцев. Вакцина вводится однократно накожно или подкожно с помощью безыгольного инъектора; разработана таблетированная живая вакцина из штамма EV для перорального применения (А. А. Воробьев, Е. М. Земсков), а также аэрозольная вакцина. Большое значение имеет не специфическая профилактика, которая включает: предупреждение заболевания людей и возникновения эпизоотий в природных очагах, предупреждение завоза чумы на территорию страны, которое осуществляется согласно специальным «Международным санитарным правилам»; предупреждение заражения лиц, работающих с заразным Y. pestis материалом, осуществляемое регламентом работы противочумных уч реждений. Вся работа с заразным У. pestis материалом и в госпиталях для больных чумой должна проводиться в специальных защитных противочумных костюмах с соблюдением строгого порядка их надевания и снятия. В случае появления больного чумой проводятся карантинные мероприятия.

БРУЦЕЛЛЕЗ

Бруцеллы являются возбудителями бруцеллеза — острого или хронического антропозоонозного инфекционного заболевания, которое характеризуется интоксикацией, преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, сердечно-сосудистой, мочеполовой систем и других органов, аллергазацией организма, затяжным течением, приводящим. как правило, к инвалидизации.

9

17. Морфологические и тинкториальные свойства бруцелл.

Возбудители бруцеллеза относятся к роду Brucella, который включает в себя следующие вилы: В. melitensis, В. abortus, В. suis, В. ovis, В. mis, В. meotomae. Название рода связано с именем Д. Брюса, открывшего в 1886 г. возбудителя бруцеллеза.

Морфология. Бруцеллы — мелкие грамотрицательные микробы шаровидной, овоидной или палочковидной формы. Спор не образу ют, неподвижны. При действии специфического бактериофага или при выращивании на среде с 10 % иммунной сыворотки образуют нежную капсулу.

18. Культуральные свойства бруцелл.

Аэробы. Требовательны к питательным средам: на простых питательных средах не растут, растут на сложных питательных средах (сывороточно-декстрозный и кровяной агар). Характеризуются за медленным ростом на питательных средах, посевы инкубируют не менее 3 недель.

В жидких средах вызывают равномерное помутнение с небольшим осадком, но без пленки на поверхности. На плотных средах формируют мелкие круглые выпуклые гладкие прозрачные голубовато-серые колонии. Гемолиза не дают, пигмента не образуют. Наблюдается диссоциация от S- к R-формам колоний. В гладкой форме некоторые штаммы бруцелл лизируются бруцеллезным фагом. Температурный оптимум роста - 37 °С, оптимум pH 6,6-7,4. Под действием антибиотиков превращаются в L-формы. Хорошо культивируются в желточном мешке куриного эмбриона.

19. Эпидемиология бруцеллеза.

Резервуаром возбудителя в природе являются сельскохозяйственные и домашние животные — крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, реже — олени, лошади, собаки, кошки.

Бруцеллез распространен на всех континентах, особенно в странах с развитым животноводством. Источник инфекции — больные сельскохозяйственные и домашние животные.

Возбудителями бруцеллеза крупного рогатого скота являются В. abortus, мелкого рогатого скота — В. melitensis, свиней — В. suis, оленей — В. neotome, собак — В. canis, баранов — В. ovis. Наибольшее эпидемическое значение для человека имеют

В. melitensis, В. abortus и В. suis.

10