44. Методы мб диагностики холеры

Основным и решающим методом диагностики является бактериологический. Материалом для исследования служат испражнения и рвотные массы. На вибрионосительство исследуют испражнения. У лиц, погибших от холеры, для исследования берут лигированный отрезок тонкого кишечника и желчный пузырь. Из объектов внешней среды чаще всего исследуют воду открытых водоёмов и сточные воды. При поведении бактериологического исследования необходимо соблюдать следующие три условия: 1) как можно быстрее произвести посев материала от больного; 2) посуда, в которую берут материал, не должна обеззараживаться химическими веществами и не должна содержать их следа, т.к. холерный вибрион к ним очень чувствителен; 3) исключить возможность загрязнения и заражения окружающих. Выделение культуры производят по схеме: посев на ПВ, одновременно на щелочной МПА или какую-либо избирательную среду (лучше всего TCBS). Через 6 часов исследуют плёнку, образующуюся на ПВ, и в случае необходимости делают посев на вторую ПВ. С ПВ делают пересев на щелочной МПА. Подозрительные колонии пересевают для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, подвижности и окончательно типируют с помощью диагностических агглютинирующих сывороток О-, OR-, Инаба, Огава и фагов (ХДФ). Методом ускоренной диагностики является люминесцентно-серологический. Он позволяет обнаружить холерный вибрион непосредственно в исследуемом материале в течении 1,5-2 часов. Для быстрого обнаружения холерного вибриона в испражнениях и объектах внешней среды может быть использована РПГА с антительным диагностикумом.

45. Ускоренная диагностика холеры

Для ускоренной диагностики холерного вибриона был предложен набор бумажных индикаторных дисков, состоящих из 13 бх тестов (оксидаза, индол, лактоза, уреаза, глюкоза, сахароза, манноза, арабиноза, маннит, инозит, аргинин, орнитин, лизин), дифференцирующий от представителей семейства Enterobacteriaceae, бактерий родов Plesiomonas, Aeromunas и др. для быстрого обнаружения холерного вибриона (ХВ)в испражнениях и в объектах внешней среды может быть использована РПГА с антительным диагностикумом. С целью выявления некультивируемых форм ХВ в объектах внешней среды применяют только метод цепной полимеразной реакции.

46. Методы определения токсигенности хв

Для определения токсигенности следует приготовить взвеси

вибрионов, содержащие в 1 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида

9 9 8 8 8 7

2 x 10 , 1 x 10 , 5 x 10 , 2,5 x 10 , 1,25 x 10 и 6,25 x 10

микробных клеток в 1 мл.

В опыт берут 4 белых или светло-серых кроликов массой 2,5-3,0 кг. За 24 ч. до опыта удаляют шерсть с боковых поверхностей спины, используя депилаторий. После этого кожу тщательно промывают теплой водой и протирают полотенцем. Перед опытом поверхность кожи протирают стерильным ватным тампоном, смоченным спиртом и хорошо отжатым, а затем тампоном, смоченным стерильным 0,9%-м раствором натрия хлорида. Заражение животных проводят с соблюдением режима работы с возбудителем холеры. В депилированную поверхность кожи трех взрослых кроликов вводят внутрикожно по 0,1 мл культуры из каждого приготовленного разведения, начиная с меньшей дозы, по 2 ряда с каждой стороны на возможно отдаленном расстоянии. Четвертому кролику по 2 ряда с двух сторон вводят по 0,1 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида (контроль). Результаты учитывают через 24 ч., измеряя линейкой и циркулем размер образовавшейся папулы. За положительную реакцию принимают папулы размером 6 мм и более, папулы меньшего размера не учитывают.

Во время вскрытия у кроликов берут материал из органов и тканей для гистологического исследования.