Itogavya / Инфекция и иммунитет

«Инфекция и иммунитет»

1.Патогенность микроорганизмов. Определение понятия. Вирулентность, единицы ее

измерения.

Патогенность – это способность МО в чувствительном к нему макроорганизме вызывать развитие той или иной формы инфекции (не обязательно заболевание!). Это качественное понятие, понятие о бактериию

Вирулентность – это степень, или мера, патогенности. Единицы измерения: Dlm – вызывает гибель 80% животных,Dcl – безусловно летальный исход, Dl50 – среднестатистическая летальность, для 50% животных. Это количественное понятие, понятие штаммовое.

2. Иммунитет, определение понятия, классификация иммунитета

Иммунитет - это способ защиты организма от живых тел и веществ, несущих на себе признаки чужеродной генетической информации.

Врождённый иммунитет (видовой, наследственный, неспецифический, естественная резистентность) — способность организма обезвреживать чужеродный и потенциально опасный биоматериал (микроорганизмы, трансплантат, токсины, опухолевые клетки, клетки, инфицированные вирусом), существующая изначально, до первого попадания этого биоматериала в организм.

Если микроорганизму удается проникнуть через первичные барьеры, он сталкивается с клетками и механизмами системы врождённого иммунитета. Врождённая иммунная защита неспецифична, то есть её звенья распознают и реагируют на чужеродные тела независимо от их особенностей. Эта система не создает длительной невосприимчивости к конкретной инфекции. Система врождённого иммунитета осуществляет основную защиту у большинства живых многоклеточных организмов.

Приобретённый иммунитет (специфический) - способность организма обезвреживать чужеродные и потенциально опасные микроорганизмы (или молекулы токсинов), которые уже попадали в организм ранее. Представляет собой результат работы системы высокоспециализированных клеток (лимфоцитов), расположенных по всему организму.

Различают активный и пассивный приобретённый иммунитет.

Активный может возникать после перенесения инфекционного заболевания или введения в организм вакцины. Образуется через 1-2 недели и сохраняется годами или десятками лет.

Пассивно приобретённый возникает при передаче готовых антител от матери к плоду через плаценту или с грудным молоком, обеспечивая в течение нескольких месяцев невосприимчивость новорожденных к некоторым инфекционным заболеваниям. Такой иммунитет можно создать и искусственно, вводя в

организм иммунные сыворотки, содержащие антитела против соответствующих микробов или токсинов (традиционно используют при укусах ядовитых змей).

3.Реакция связывания комплемента (РСК), техника постановки, учет результатов.

Для постановки основного опыта РСК необходимы следующие ингредиенты: а) антиген; б) исследуемая сыворотка;

в) комплемент:

г) гемолитическая сыворотка с известным титром; д) 3 %-ная взвесь отмытых эритроцитов барана; е) физиологический раствор.

Антиген для реакции связывания комплемента готовится из соответствующих микроорганизмов (бактерий, вирусов) или может быть неспецифическим (в реакции Вассермана – кардиолипиновый антиген). В связи с тем, что антиген может обладать антикомплементарным действием, перед постановкой опыта он титруется, т.е. устанавливается его рабочая доза. Титром антигена считается такая доза последнего, которая не вызывает задержки гемолиза. Для работы берут дозу антигена, равную половине его титра.

Источником комплемента для РСК служит свежая (или высушенная) сыворотка крови морской свинки. Титром комплемента называется его минимальное количество, которое в присутствии рабочей

дозы гемолитической сыворотки обеспечивает полное растворение эритроцитов. Для постановки основного опыта берут дозу комплемента, увеличенную на 20-25% по сравнению с установленным титром.

Гемолитическую сыворотку получают иммунизацией кролика эритроцитами барана. Титром гемолитической сыворотки называется то максимальное разведение ее; которое, будучи смешано с равным объемом (0,5 мл) 10%-ного раствора комплемента, полностью гемолизирует 0,5 мл взвеси эритроцитов в течение 1 часа при 37 °С . В основной опыт берется сыворотка, разведенная до 1/3 своего титра. Так, если титр сыворотки 1:1200, то в опыт берется сыворотка в разведении 1:400.

Исследуемая сыворотка (т.е. сыворотка больного) перед опытом инактивируется при 56 °С в течение 30 минут, чтобы исключить действие имеющегося в ней комплемента. В реакцию следует брать сыворотку в разведении 1:5.

Все ингредиенты для РСК берут в дозе по 0,5 мл. Недостающее количество компонентов доводят до указанного объема физиологическим раствором. Титрование ингредиентов производят накануне постановки реакции.

Результаты РСК учитывают дважды: после инкубации в термостате и на следующий день (через 18-20 часов). Интенсивность реакции оценивают по 4-баллъной системе:

++++ полная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами не окрашена, эритроциты в осадке;

+++ неполная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами слабо-розового цвета, значительный осадок эритроцитов;

++ частичная задержка гемолиза: жидкость красная, осадок эритроцитов; + слабая задержка гемолиза, жидкость интенсивно-красная, незначительный осадок эритроцитов;

± следы задержки гемолиза: гемолиз почти полный, при взбалтывании со дня поднимается незначительный осадок в виде облачка;

–полный гемолиз: лаковая кровь, осадок отсутствует.

4.Основные группы факторов патогенности бактерий.

Факторы патогенности (вирулентности) бактерий:

1)факторы адгезии - фимбрии, белки наружной мембраны, липополисахарид; 2)факторы инвазии - белки наружной мембраны и др.;

3)факторы, препятствующие фагоцитозу (различные компоненты клеточной стенки - пептидогликан, белок А, белок М, VIантиген, белки v-w , фракция I и др.);

4)факторы, подавляющие фагоцитоз (капсулы, продукты жизнедеятельности бактерий);

5)ферменты "защиты и агрессии" - плазмокоагулаза, фибринолизин, лецитиназа, гиалуронидаза, ДНКаза и др.;

6)токсины микробов.

5. Главная система гистосовместимости человека (МНС), ее основные локусы и функции.

Главная система гистосовместимости (Major Histocompatability Complex - MHC) у человека - система HLA - антигенов (Human Leucocyte Antigen System), с нею связаны следующие функции:

1)Интенсивное отторжение аллотрансплантатов ткани.

2)Стимуляция образования антител.

3)Стимуляция реакции в смешанной культуре лимфоцитов (бласттрансформации).

4)Реакция "трансплантат против хозяина".

5)Клеточная реакция лимфолиза.

6)Контроль силы иммунного ответа (гены Immune response - Ir ).

7)Рестрикция (ограничение) иммунного ответа.

8)Контроль синтеза некоторых компонентов системы комплемента.

Система МНС у человека (НLA) включает 7 генетических локусов. Основные среди них - локусы

А,В,С.

4.HLA - DR

5.HLA –DQ Контролируют синтез антигенов МНС класса II (Iа - антигены) 6.HLA –DP

7-й локус, отвечающий за синтез некоторых факторов системы комплемента (С2,С4,В) - антигены МНС класса III (встречаются только в сыворотке).

Кроме того, с системой HLA сцеплен локус Ir, контролирующий силу иммунного ответа.

6. Реакция иммунофлуоресценции прямая и непрямая, цели использования, учет результатов.

Сущность иммунофлуоресцентной микроскопии заключается в появлении специфического свечения комплекса антиген-антитело в случаях сине — и ультрафиолетового света при условии использования антител, соединенных с флуоресцирующим красителем.

Микроскопию производят в люминесцентном микроскопе. При этом используют специальное нефлуоресцирующее иммерсионное масло.

При наличии в исследуемом материале бактерий, по отношению к которым люминесцирующая сыворотка содержит антитела, на темном фоне препарата обнаруживается специфическое яркое желтозеленое свечение по периферии бактериальных клеток. Посторонние бактерии не светятся.

Для оценки интенсивности специфического свечения используют четырехкрестовую систему:

++++ сверкающая флуоресценция желтовато-зеленого цвета с четко выраженной формой клеток;

+++ яркая флуоресценция желто-зеленого цвета; ++ и + заметная, но слабо выраженная флуоресценция.

Положительным результатом считается флуоресценция, оцениваемая на ++++ и +++.

Иммунофлуоресцентный метод является методом ускоренной ориентировочной диагностики и должен сопровождаться полным бактериологическим исследованием.

б) Непрямой иммунофлуоресцентный метод предусматривает использование единой флуоресцирующей сыворотки - антиглобулиновой, содержащей антитела против кроличьих глобулинов. Кроличьи глобулины (специфические антитела) связываются с гомологичными антигенами. На образовавшихся комплексах фиксируются флуоресцирующие антиглобулиновые антитела и вызывают их свечение в люминесцентном микроскопе.

7. Экзотоксины бактерий, их отличительные свойства.

Экзотоксины – высокоактивные яды, выделяемые микроорганизмом на протяжении его жизни в качестве продуктов обмена в окружающую среду (организм животного, пробирка с культурой микроба). Обнаруживаются в высоких концентрациях в жидких средах, содержащих компоненты клеточной стенки грамотрицательных бактерий, освобождающиеся при их дезинтеграции полипептиды, ОММ 10000–100000. Липополисахаридные комплексы, липид А, очевидно, ответственен за токсичность.

Природа и свойства экзотоксинов: белки, секреция во внешнюю среду, высокая сила действия, специфичность и избирательность действия, различное отношение к температуре - термолабильные и термостабильные, индукция образования антитоксинов, превращение в анатоксины.

Экзотоксины синтезируют как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

Типы экзотоксинов:

1)состоят из двух фрагментов - А и В. Фрагмент В обладает рецепторными свойствами и способствует формированию внутримембранного канала. Фрагмент А - собственно токсин со свойствами фермента (холероген, энтеротоксины, дифтерийный токсин);

2)токсины - полипептиды. Вначале синтезируются в виде неактивной полипептидной цепи. Активация токсина осуществляется путем разрезания полипептида на две цепи - "разрезанные" токсины (токсины возбудителей ботулизма, столбняка);

3)токсины с мало изученной структурой. Особенности генетического контроля синтеза экзотоксинов: хромосомными генами, генами плазмид, генами умеренных конвертирующих фагов (лизогенная конверсия, например, возбудители дифтерии, дизентерии, эшерихиозов).

8. Что такое гаптены, полугаптены, шлеппер, детерминантная группа (эпитоп)?

Гаптены – это Аг, способные реагировать с ранее синтезированными АТ, то есть это неполноценный Аг; не способны запускать иммунные реакции. Они не распознаются иммунокомпетентными клетками. Гаптены могут приобретать св-ва полноценных Аг (то есть ещё способность индуцировать образование АТ) только тогда, если вводятся в орг-м в комплексе с белком – такой белок называетсяшлеппер («буксир»). Аг, состоящие из белка и гаптена, называются комплексными Аг, их специфичность определяют гаптены, а белок является активатором гаптена.

Полугаптены – неорганические в-ва (йод или хром), присоединение кот-х к молекуле белка меняет его иммуногенные св-ва.

Детерминантная группа – это компонент природного Аг. У антигена 2 компонента: белок (определяет антигенные св-ва) и детерминантная группа - аминокислотные остатки, полисахариды и липиды на поверхности белка (определяют специфичность Аг, то есть непосредственно реагируют с Аг).

Эпитоп – наименьшая распознаваемая единица Аг. Молекула Аг может иметь несколько эпитопов, то есть быть поливалентной. Чем > эпитопов, тем > вероятность развития иммунного ответа.

9. Что собой представляет реакция агглютинации и каково ее практическое использование?

Агглютинация- склеивание антигеннесущих коспускулярных частиц молекулам специфических антител в присутствии электролита, которое заканчивается образование видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (аглютината).

Характер осадка зависит от природы антигена: жгутиковые бактерии крупнохлопьевидный осадок, безжгутиковые и бескапсульныемелкозернистый, капсульные — тяжистый.

Реакция агглютинации, как любая серологическая реакция, протекает в две фазы.

Первая фаза - специфическое соединение активного центра антитела с детерминантой антигена может происходить в отсутствие электролитов. Эта фаза не сопровождается, видимыми изменениями системы и может быть обнаружена только косвенным путем.

Вторая фаза - склеивание антигенов - следует за первой и ее специфичность менее выражена. Для ее проявления необходимы электролиты, которые снижают электрический заряд комплекса антиген - антитело и ускоряют реакцию. Эта фаза сопровождается видимым изменением среда, склеиванием антигенов и выпадением их в осадок.

10. Эндотоксины бактерий, их отличительные свойства.

Эндотоксины – менее ядовитые по сравнению с экзотоксинами вещества, образующиеся в результате распада микробной клетки. Следовательно, эндотоксины представляют собой фрагменты или отдельные химические компоненты микробных клеток.

Особенности эндотоксинов. Они имеются только у грамотрицательных бактерий, термостабильны, не обладают избирательностью и специфичностью действия, носителем эндотоксинов является липополисахарид.

Многообразие патогенных изменений в организме, возникающих при эндотоксикозе, обусловлено не только самим эндотоксином, но и высвобождением под его воздействием более 20 различных

медиаторов из гуморальных и клеточных источников организма (гистамин, серотонин, простагландины, лейкотриены и др.).

Эндотоксины не обезвреживаются формалином и индуцируют не антитоксические, а антимикробные антитела.

11. Какие центральные и периферические органы иммунной системы Вы знаете?

Выделяют центральные и периферические органы иммунной системы.

К центральным органам относят красный костный мозг и тимус, а к периферическим — селезёнку, лимфатические узлы, а также местноассоциированную лимфоидную ткань: бронхассоциированную (БАЛТ), кожноассоциированную (КАЛТ), кишечноассоциированную (КиЛТ, пейеровы бляшки).

Красный костный мозг — центральный орган кроветворения и иммуногенеза. Содержит самоподдерживающуюся популяцию стволовых клеток. Красный костный мозг находится в ячейках губчатого вещества плоских костей и в эпифизах трубчатых костей. Здесь происходит дифференцировка В-лимфоцитов из предшественников. Содержит также Т-лимфоциты.

Тимус — центральный орган иммунной системы. В нём происходит дифференцировка Т-лимфоцитов из предшественников, поступающих из красного костного мозга.

Лимфатические узлы — периферические органы иммунной системы. Они располагаются по ходу лимфатических сосудов. В каждом узле выделяют корковое и мозговое вещество. В корковом веществе есть В-зависимые зоны и Т-зависимые зоны. В мозговом есть только Т-зависимые зоны.

Селезёнка — паренхиматозный зональный орган. Является самым крупным органом иммунной системы, кроме того, выполняет депонирующую функцию по отношению к крови. Селезёнка покрыта капсулой из плотной соединительной ткани, которая содержит гладко-мышечные клетки, позволяющие ей при необходимости сокращаться. Паренхима представлена двумя функционально различными зонами: белой и красной пульпой. Белая пульпа составляет 20 %, представлена лимфоидной тканью. Здесь имеются В-зависимые и Т-зависимые зоны. И также здесь есть макрофаги. Красная пульпа составляет 80 %. Она выполняет следующие функции:

Депонирование зрелых форменных элементов крови.

Контроль состояния и разрушения старых и повреждённых эритроцитов и тромбоцитов.

Фагоцитоз инородных частиц.

Обеспечение дозревания лимфоидных клеток и превращение моноцитов в макрофаги.

12.Сущность реакции преципитации, методические варианты ее постановки.

Для постановки реакции преципитации необходимо иметь:

а) преципитирующую сыворотку; б)антиген в виде прозрачного раствора (экстракт из микробных

тел, из органов или из других патологических субстратов); в) физиологический раствор; г) набор специальных преципитационных пробирок.

Порядок работы

В преципитационную пробирку наливают 0,5 мл преципитирующей сыворотки, затем при помощи пастеровской пипетки наслаивают на сыворотку 0,5 мл раствора антигена. Пробирку при этом следует держать в наклонном положении, а после добавления антигена пробирку ставят в штатив (в вертикальном положении). При положительной реакции на границе двух жидкостей появляется тонкое кольцо помутнения. Степень реакции оценивается по выраженности кольца и времени его появления. Обычно кольцо появляется в течение первых 3-10 минут.

Приготовление бактериального гаптена

Суточная культура бактерий на пластинках МПА в чашках Петри смывается 4-5 мл 1%-ной уксусной кислоты. Смыв кипятят на водяной бане 30-60 минут, фильтруют через асбестовую вату, фильтрат нейтрализуют 20 %-ным раствором углекислого натрия в присутствии индикатора.

Полученный гаптен в количестве 0,5 мл наслаивают на равный объем преципитирующей сыворотки, цельной или разведенной вдвое. На границе между сывороткой и гаптеном появляется кольцо преципитата.

Реакция преципитации в агаре является одним из наиболее чувствительных методов анализа растворимых антигенов. Она позволяет выявить число индивидуальных антигенов в исследуемой жидкости (например, в бактериальных или тканевых экстрактах) и произвести анализ антигенного родства отдельных компонентов в смеси антигенов.

Для постановки реакции используют I %-ный агар, приготовленный на физиологическом растворе. Тщательно профильтрованный полностью прозрачный расплавленный агар разливают в чашки Петри слоем 0,5 см толщиной. После застывания в пластинке агара с помощью металлической трубочки вырезаются луночки диаметром 5-6 мм - одна в центре чашки и 4-5 по окружности на расстоянии 2 см от центральной. В центральную луночку наливается сыворотка кролика, иммунизированного исследуемым антигеном, а в периферические - раствор исследуемого антигена и сравниваемых с ним веществ. Чашки помещаются в эксикатор с налитой на дно водой (для предупреждения высыхания) при комнатной температуре. Учет результатов реакции производится через 24, 48 и 72 часа.

Антитела из центральной луночки и антигены из периферических диффундируют, навстречу друг другу, и в участках, где создаются эквивалентные концентрации антител и антигенов, выпадает дугообразная полоса преципитации. Появление нескольких полос преципитации между центральной и периферическими луночками указывает на наличие нескольких антигенных компонентов в исследуемой жидкости. Если полосы преципитации, идущие от двух соседних луночек, сливаются, это указывает на идентичность антигенов, содержащихся в этих луночках. Взаимное пересечение полос преципитации свидетельствует о серологической неидентичности антигенов.

13.Анатоксины, получение, практическое использование.

Анатоксины получают, добавляя к нативному экзотоксину 0,5% формалина. Смесь выдерживают

втечение 3-4 недель при 38-40 °С. Анатоксин применяют для создания активного антитоксического иммунитета. Концентрация анатоксина выражается в иммуногенных единицах (ИЕ) или в единицах связывания (ЕС). Одна ИЕ или ЕСэто то количество анатоксина, которое в смеси с 1 антитоксической единицей (АЕ) сыворотки дает инициальную флокуляцию.

14.Что такое антигены, их основные свойства? Что такое «полноценный антиген» и «неполноценный антиген»?

Антигены - любые вещества, в том числе содержащиеся в микроорганизмах и клетках или выделяемые ими, которые несут признаки генетически чужеродной информации и при введении в

организм вызывают развитие специфических иммунологических реакций. Свойства антигена:

чужеродность

высокая молекулярная масса

коллоидная природа(растворимость в жидкостях макроорганизма)

способность подвергаться метаболизированию в организме

способны при попадании в организм индуцировать образование антител (АТ)- иммуногенность

способны соединятся с этими АТ (специфичность)

Полноценные АГ: обладают обоими свойствами АГиммуногенностью и специфичностью. Полноценными АГ являются чаще всего белки, липопротеины, гликопротеины, липополисахариды. Неполноценные АГ: обладают только одним свойством АГспособностью связаться с АТ.

15.В чем состоит сущность радиоиммунного метода диагностики (РИМ или РИА) инфекционных заболеваний?

Радиоиммуный метод (РИМ) предусматривает использование антител, меченных изотопом, поэтому результаты реакции оценивают путем определения радиоактивности исследуемых образцов. При положительной реакции уровень радиоактивности опытных образцов более чем в 2 раза превышает уровень радиоактивности контрольных, заведомо отрицательных образцов.

Обнаружение специфических антител с помощью ИФМ и РИМ

Для обнаружения антител эти реакции также ставятся в три этапа.

Первый этап - адсорбция специфических антигенов на стенках луночек. Обычно планшеты в коммерческих тест-системах уже имеют сенсибилизированные луночки, т.е. на их стенках антигены уже адсорбированы.

Второй этап - добавление в луночки образцов исследуемой сыворотки для обнаружения в них специфических антител к данному антигену. Если они имеются, то вступают во взаимодействие с антигеном и образуют комплекс антиген-антитело.

Третий этап - после отмывания луночек в них добавляют специфические антиглобулиновые антитела (антивидовые, т.е. антитела против человеческих иммуноглобулинов, но меченные ферментом (ИФМ) либо изотопом (РИМ). Результаты реакции оцениваются как указано выше. В качестве контролей используют образцы, заведомо положительные и заведомо отрицательные.

16. Факторы адгезии и колонизации бактерий, их природа и значение.

Факторы адгезии и колонизации – начальные, пусковые механизмы болезни. С их помощью бактерии распознают рецепторы на мембранах клеток, пркрепляются и колонизируют клетки. К этим факторам относятся компоненты клеточной стенки: фимбрии (короткие выросты), белки наружной мембраны, липополисахарид, пептидогликан, тейхоевые кислоты (Г+).

17.Что такое «антитела»? Молекулярная структура иммуноглобулина класса G(IgG), цепи, фрагменты.

Антитела - иммуноглобулины, которые вырабатываются клетками лимфоидных органов после парентерального поступления антигена и способны специфически взаимодействовать с ним.

IgG является основным иммуноглобулином сыворотки здорового человека (составляет 70-75 % всей фракции иммуноглобулинов), наиболее активен во вторичном иммунном ответеи антитоксическом иммунитете. Благодаря малым размерам (коэффициент седиментации 7S, молекулярная масса 146 кДа) является единственной фракцией иммуноглобулинов, способной к транспорту через плацентарный барьер и тем самым обеспечивающей иммунитет плода и новорожденного.

В составе IgG 2-3 % углеводов; два антигенсвязывающих Fab-фрагмента и один FC-фрагмент. Fabфрагмент (50-52 кДа) состоит из целой L-цепи и N-концевой половины H-цепи, соединённых между собой дисульфидной связью, тогда как FC-фрагмент (48 кДа) образован C-концевыми половинами H- цепей. Всего в молекуле IgG 12 доменов (участки, сформированные из β-структуры и α-

спиралей полипептидных цепей Ig в виде неупорядоченных образований, связанных между собой дисульфидными мостиками аминокислотных остатков внутри каждой цепи): по 4 на тяжёлых и по 2 на лёгких цепях.

18.В чем состоит сущность иммуноферментного метода диагностики (ИФМ, ИФА, РЭМА) инфекционных заболеваний?

Воснове иммуносорбентного анализа твердой фазы лежит сорбция анатител (для обнаружения неизвестного антигена) или антигена (для обнарудения соответствующих антител) и специфических антител, меченных ферментом (имф) и изотопом (рим). Практически эти методы могут быть использованы для диагностики любого инфенкионного заболевания. С помощью этих методов можно определять как антигены, так и антитела к ним. Этот метод включает три этапа:

1-ый этап – адсорбция специфических антител на стенках луночек. обычно планшеты в коммерческих тест-системах уже имеют сенсибилизированные луночки, т.е. на их дне и стенках антитела уже адсорбированы.

2-ой этап – связывание антигена из суспензии исследуемого материала за счет реакции антителоантиген. после этого луночки промывают раствором, содержащий слабый неионный детергент, для удаления из системы других, неспецифически связанных с антителами компонентов.

3-ий этап – обработка твердой фазы с фиксированными на ней комплексами антитело-антиген специфическими антителами против данного антигена, но меченными либо ферментом, либо изотопом.

Защитный эффект нормальной микрофлоры заключается в том, что между ее представителями и патогенными микроорганизмами, которые попадают в данную область, неизбежно возникают сложные формы взаимоотношений, от конкуренции до прямого антагонизма (конкуренция за питательные вещества, выделение антибиотических веществ, изменение pH среды и т. д.)

Функции:

колонизационная резистентность

угнетает рост патогенной и гнилостной микрофлоры

стимулирует лимфоидную ткань

участвует в пищеварении

снабжает организм витаминами и аминокислотами

23.Чем отличается первичный иммунный ответ от вторичного?

•первичным — при первой встрече с антигеном. Его выраженность достигает максимума к 7—8-му дню, сохраняется в течение 2 недель, а затем снижается;

•вторичным — при повторной встрече с антигеном. Вторичный иммунный ответ развивается быстрее и достигает большей (в 3—4 раза) интенсивности.

24.Что собой представляет реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА) и для каких целей она применяется?

Внастоящее время для диагностики многих заболеваний широко используется реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Она основана на способности эритроцитов адсорбировать на своей поверхности специфические микробные антигены или антитела к ним. Сенсибилизированные таким образом эритроциты агглютинируются в присутствии гомологичных антител или антигенов.

Во все пробирки (луночки) разливают физиологический раствор: в 1-ю пробирку -0,9 мл, а в остальные - по 0,5 мл. Затем в 1-ю пробирку вносят 0,1 мл испытуемой сыворотки, перемешивают и переносят 0,5 мл во 2-ю, вновь перемешивают и переносят из 2-й пробирки в 3-ю 0,5 мл и так далее до 7-й пробирки включительно. Из 7-й пробирки 0,5 мл жидкости выливают, 8-я пробирка служит контролем и поэтому сыворотки не содержит.

Эритроцитарный диагностикум перед использованием встряхивают до полного исчезновения осадка на дне и получения гомогенной взвеси. По ходу работы встряхивание часто повторяют. Эритроцитарный диагностикум разливают во все пробирки по 0,5 мл. после этого пробирки встряхивают и помещают на 1,5-2 часа в термостат при 37 °С, а затем учитывают результаты реакции (иногда через 16-20 часов).

Учет реакции производят по четырехкрестной схеме:

++++ полная гемагглютинация, эритроциты равномерно устилают почти все дно пробирки, нередко в виде зонтика;

+++ почти все эритроциты агглютинированы и равномерно покрывают дно пробирки; ++ наряду с равномерным агглютинатом на дне пробирки имеется осадок в виде маленького колечка или "пуговки";

+ большинство эритроцитов осело в центре дна пробирки в виде диска и лишь незначительное количество агглютинировалось с образованием мелких хлопьев;

—признаков агглютинации нет: эритроциты осели в виде маленького колечка или "пуговки" (диска) в центре дна пробирки.

Титром испытуемой сыворотки считается последное ее разведение, которое дает ярко выраженную агглютинацию эритроцитов, не менее чем на +++.

25.Какие ферменты «защиты и агрессии» бактерий Вы знаете? Методы их обнаружения у бактерий?

Ферменты «защиты и агрессии» способствуют распространению бактерии в тканях организма. К ним относят плазмокоагулазу, фибринолитический фермент, лецитиназу, гиалуронидазу, ДНК-азу и др.

Для выявления гиалуронидазы кролику в один участок депилированной кожи вводят внутрикожно 0,2 мл туши в физрастворе, а в соседний участок – 0,2 мл туши с прибавлением фильтрата бульонной культуры стафилококка. Пятно на месте инъекции туши с фильтратом через 24-48 ч в несколько раз превосходит по размерам пятно на месте введения туши без фильтрата за счет повышения проницаемости ткани в присутствии гиалуронидазы.

Для выявления фибринолитического фермента в чашки Петри с агаровой средой, содержащей плазму, засевают испытуемую культуру. После инкубации в течение 24-48 ч при 37 градусах образуется зона просветления вокруг колоний бактерий , продуцирующих фибринолизин.

Для выявления плазмокоагулазы испытуемую культуру засевают в 0,2 мл цитратной кроличьей или человеческой плазмы. В случае выработки плазмокоагулазы через 2-4-6-18 ч после инкубации при 37 градусах происходит свертывание плазмы. В контроле плазма остается жидкой.

Для выявления лецитиназы изучаемую культуру засевают на желточный агар . при наличии лецитиназы вокруг колоний бактерий образуется зона помутнения и радужного венчика.

26. Понятие о системе мононуклеарных фагоцитов. Функции макрофагов.

Фагоцитарные клетки:микрофаги (гранулоциты),

макрофаги (моноциты и клетки ретикулоэндотелиальной системы)

Макрофаги – клетки, обладающие высокой фагоцитарной активностью. Они различаются по форме и размерам, в зависимости от того, в какой ткани обнаруживаются. По классификации ВОЗ все макрофаги объединены в систему мононуклеарных фагоцитов. К этой системе относятся клетки, имеющие костномозговое происхождение, обладают активной подвижностью, способны осуществлять фагоцитоз и прилипают к стеклу.

Функции макрофагов:хемотаксис,фагоцитоз,

выработка биологически активных соединений,переработка антигена (процессинг) и его презентация.

27.Какие варианты реакции агглютинации применяются в качестве экспресс-методов для диагностики инфекционных заболеваний?

а) реакция коагглютинации: Одним из вариантов пассивной, т.е. опосредованной клетками-носителями антител, реакции агглютинации является коагглютинация. В основу этой реакции положено уникальное свойство стафилококков, имеющих в составе своей клеточной стенки белок А, связывать молекулы иммуноглобулинов классов Ig G и Ig M. Поскольку белок А взаимодействует с рецептором, который располагается на Fc - фрагменте молекулы антитела, его активные центры остаются свободными и могут взаимодействовать со специфическими детерминантами антигена.

б) реакция латекс-агглютинации: Реакция латекс-агглютинации (ЛАГ) также является чувствительным и специфическим методом диагностики. Основным условием успешной постановки ЛАГ является строгое соблюдение количественных соотношений компонентов системы при постановке реакции, выполняемой микрометодом, в лунках на стекле: к 50 мкл исследуемого материала добавляют 10 мкл латекс-препарата, частички которого несут на себе специфические антитела. После перемешивания смесь в течение 10 мин встряхивают. Результаты учитывают по 4-х крестной системе. Положительной