Контрольные вопросы

1. Каковы основные различия в ультраструктуре клеток прокариотических и эукариотических микроорганизмов?

2. Чем характеризуются микоплазмы?

3. Как устроены клетки микроскопических грибов?

4. Какими способами размножаются грибы?

5. Чем отличаются низшие грибы от высших?

6. Каковы морфологические особенности простейших?

7. Какие микроорганизмы относят к переходным формам и чем они характеризуются?

8. Каковы особенности строения актиномицетов?

9. Какое строение имеют спирохеты?

10. Каковы отличительные особенности риккетсий и хламидий?

11. Какими методами изучаются грибы и актиномицеты?

12. Какие методы исследования применяют для выявления спирохет и простейших?

Раздел II. Физиология микроорганизмов тема 1. Бактериологический метод. Культивирование микроорганизмов: питательные среды и методы стерилизации

Культивирование микроорганизмов широко используется в лабораторных условиях для их выделения, накопления и сохранения. Для культивирования бактерий пользуются естественными и искусственными питательными средами различного состава. Питательные среды должны отвечать следующим требованиям:

• содержать в достаточном количестве все необходимые питательные вещества, соли и ростовые факторы;

• иметь оптимальную рН, вязкость достаточную влажность;

• должны быть стерильными и по возможности прозрачными.

По назначению питательные среды подразделяют на следующие основные категории:

• основные – предназначены для выращивания многих видов бактерий (мясо – пептонный бульон, мясо – пептонный агар);

• элективные – способствующие развитию отдельных видов микробов (кровяные, сывороточные, яичные);

• селективные – подавляющие рост одних микроорганизмов и не влияющие на рост других (среды Мюллера, селенитовая, Рапопорт);

• дифференциально – диагностические – позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям (среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гиса).

По консистенции питательные среды могут быть жидкими, плотными и полужидкими. Жидкие среды готовят на основе водных растворов каких – либо веществ, чаще всего мясной воды, различных гидролизатов, иногда естественных продуктов (молока, крови). Для получения плотных сред к ним добавляют агар – агар, который представляет собой полисахарид сложного состава, получаемый из морских водорослей. Агар – агар плавится при 100⁰С, но при охлаждении сохраняет жидкую консистенцию до 45⁰С. Для получения плотных сред его добавляют в концентрации 1,5 – 3,0 %. Полужидкие среды имеют вязкую консистенцию благодаря добавлению к ним небольшого количества агара (0,3 – 0,7 %).

Стерилизация – обеззараживание, полное уничтожение микроорганизмов в питательных средах, посуде и прочих различных материалах. Производится с помощью физических, химических и механических методов.

К физическим относятся:

а) прокаливание, или фламбирование, над пламенем горелки; б) кипячение; в) стерилизация сухим жаром; г) стерилизация паром под давлением – автоклавирование; д) стерилизация текучим паром; е) дробная стерилизация; ж) тиндализация; з) пастеризация; и) стерилизация УФ – лучами;к) стерилизация ионизирующим излучением (рентгеновские или гамма – лучи).

Химическая стерилизация проводится с помощью веществ, обладающих антимикробным действием. В качестве стерилизантов в настоящее время используют растворы карболовой кислоты или фенола (3 – 5 %), сулемы (0,1 – 0,2%), хлорамина (1 – 5 %), этиловый спирт, щелочи и кислоты различной концентрации.

Для обработки сред, компоненты которых легко разлагаются при нагревании, применяют механическую стерилизацию фильтрованием через мелкопористые фильтры (свечи Шамберлана, Беркефельда, фильтр Зейтца).

Демонстрация

1. Питательные среды: основные, элективные, селективные, дифференциально – диагностические.

2. Бактериальные фильтры.

ЗАДАНИЕ

1. Ознакомиться с устройством и работой автоклава и сушильного шкафа.

2. Приготовить питательный мясо – пептонный бульон, для чего в колбу со 100 мл дистиллированной воды поместить навеску пасты, содержащей концентрированный рыбный гидролизат, размешать, кипятить в течение 2 – 3 минут, определить рН (7,2 – 7,5), профильтровать, разлить в пробирки и простерилизовать в автоклаве.

3. Приготовить питательную среду из сухого агара, для чего всыпать в колбу со 100 мл дистиллированной воды навеску сухого порошка, размешать, кипятить на слабом огне 1 – 2 минуты, профильтровать, разлить по пробиркам. После автоклавирования пробирки оставить на столе в наклонном положении для застывания агара в виде скошенной поверхности (скошенный агар).