2. Окраска включений волютина по методу Нейссера

Приготовить мазок и окрасить по методу Нейссера для выявления зёрен волютина, микроскопировать.

а) фиксированный мазок окрасить в течение 2 – 3 минут уксуснокислой синькой Нейссера;

б) препарат 10 – 30 секунд обрабатывать раствором Люголя;

в) не промывая водой, мазок докрасить в течение 30 – 60 секунд везувином.

Зёрна волютина окрашиваются в синий цвет, тела клеток – в жёлтый.

3. Микроскопировать препарат, приготовленный по методу Леффлера.

Окраска жгутиков по методу Леффлера

а) приготовить мазок из 18 – 24 – часовой культуры, для чего взвесь бактерий внести в каплю стерильной водопроводной воды, нанесенной на предметное стекло и высушить;

б) мазок обработать в течение 15 – 20 минут протравой, содержащей 1 мл насыщенного спиртового раствора фуксина, 10 мл 25 % водного раствора танина и 5 мл насыщенного водного раствора сернокислого железа;

в) мазок тщательно промыть водой, высушить на воздухе и докрасить фуксином Циля в течение 3 – 4 минут при легком подогревании;

г) препарат промыть водой и высушить.

4. Приготовить мазок из спороносной культуры способом Ожешки, окрасить по Цилю – Нильсену и микроскопировать.

Выявление спор способом Ожешки

а) приготовить мазок на краю предметного стекла;

б) нефиксированный мазок подвергнуть протравливанию кислотой при повышенной температуре, для чего на мазок налить 1 % раствор соляной кислоты и подогреть над пламенем горелки в течение 2 – 3 минут;

в) кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем.

При такой обработке оболочка споры размягчается и становится доступной для красителя. Далее мазок окрасить по методу Циля – Нильсена:

а) на мазок поместить кусочек фильтровальной бумаги, на него налить карболовый фуксин Циля и подогреть стекло над пламенем горелки до появления паров;

б) охладить, снять бумагу, промыть водой и обесцветить 5 % серной кислотой в течение 30 секунд;

в) препарат тщательно промыть водой и докрасить раствором метиленового синего в течение 3 – 5 минут;

г) препарат промыть водой и высушить.

Карболовая кислота разрыхляет оболочку споры и тем самым повышает её тинкториальные свойства, а высокая концентрация красителя и нагревание в процессе окраски усиливают реакцию взаимодействия бактериальных спор с красителями. Споры окрашиваются в красный цвет. При обработке препарата серной кислотой вегетативные тела бактерий обесцвечиваются метиленовым синим.

Контрольные вопросы

1. Какова роль капсулы в жизнедеятельности бактериальной клетки?

2. Каков химический состав капсул и микрокапсул?

3. Какими методами выявляется капсула бактерий?

4. Каковы основные функции включений?

5. Как обнаружить наличие зёрен волютина у бактерий?

6. Какова структура, химический состав и функции жгутиков бактериальной клетки?

7. Каков принцип выявления жгутиков?

8. Каковы особенности строения пилей, фимбрий?

9. Какую роль играют споры бактерий?

10. Каковы особенности структуры и химического состава бактериальных спор?

11. В чём состоит процесс спорообразования у бактерий?

12. Какими методами выявляются споры бактерий?