Методика виконання завдання

Виготовлення бактеріального препарату — мазка. Бактерійний препарат — мазок готують на чистому знежиреному предметному склі. Знежирення здійснюється такими способами:

а) зануренням скла в розчин спирт — ефір 1:1;

б) над полум'ям спиртівки (проводячи над полум'ям поверхню скла);

в) протиранням скла серветкою обробленою господарським милом.

Для рівномірного розподілу культури мікроорганізмів взятих з щільного поживного середовища, використовують краплину дистильованої води.

Культуру мікробів розподіляють бактеріологічною петлею по склу рівномірним тонким шаром на площі 1-2 см2.

Під час взяття культури мікроорганізмів з рідкого середовища використовують пастерівську піпетку або бактеріологічну петлю.

Відбір всього матеріалу для дослідження проводять над полум'ям спиртівки, бактеріологічну петлю до і після використання пропалюють. Потім препарат висушують на повітрі при кімнатній температурі.

Наступний етап - фіксація препарату-мазка, який виконується фізичним або хімічним методом.

Хімічний метод заснований на здатності деяких речовин віднімати воду (гідрофільні властивості) - спирти, ацетон, ефіри або їх суміші.

Фізичний метод - термічна обробка препарату (60^оС), який використовується шляхом прогрівання зворотної сторони препарату 3-5 разів над полум'ям спиртівки.

Контроль за температурою здійснюється шляхом доторкування предметного скла до тильної сторони долоні.

Фіксація препарату переслідує мету: закріпити мікроби на склі, вбити бактерії для запобігання зараження і забруднення мікрофлорою оточуюче середовище, розруйнувати оболонку клітини для кращого проникнення фарби.

Фарбування.

Розрізняють прості, складні і спеціальні способи фарбування мікроорганізмів.

Просте фарбування дозволяє побачити форму і розмір бактерій, взаємне розміщення, дати родову назву мікроорганізмам.

Простий спосіб фарбування передбачає використання однієї фарби: карболового фуксину (експозиція 1-2 хвилини) або метиленової сині (експозиція 3-4 хвилини).

Після закінчення зазначеного терміну фарбу змивають, препарат висушують фільтрованим папером і проводять мікроскопію. Роблять малюнки у зошиті.

Контрольні питання

1· Основні правила роботи і техніки безпеки в мікробіологічній лабораторії;

2· Механічні частини світлового мікроскопу;

3· Оптичні частини світлового мікроскопу;

4· Як підготувати мікроскоп до роботи?

5· Принцип роботи електронного мікроскопу;

6· Будова люмінесцентного мікроскопу;

7· Одиниці вимірювання розмірів бактерій, дріжджів, рикетсій, мікоплазм та вірусів;

8· Визначення загального збільшення світлового мікроскопу;

9· Техніка мікроскопії бактерійних препаратів з імерсійною системою;

10· Основні форми бактерій (кулясті, паличкоподібні, звивисті);

11· Що дає імерсійна система під час мікроскопії бактерійних препаратів?

12· Хто вперше виготовив мікроскоп?

13· Вклад в розвиток ґрунтової мікробіології в Росії С.Н. Виноградського, В.Л. Омелянського, С.П. Костичева, В.С. Буткевича;

14· Значення мікробіології у природі та сільському господарстві;

15· Місце мікробіології у системі звичайних та спеціальних наук;

16· Значення робіт Л. Пастера, Р. Коха, І.Мечнікова, Ценковського в розвитку мікробіології.

17 Які матеріали необхідні для виготовлення бактерійних препаратів — мазків?

18 Які розчини використовують для фарбування бактерій?

19 Методи фіксації бактерійних препаратів і їх призначення;

20 Способи обробки предметного скла;

21 Техніка фарбування бактерій простим методом;

22 Правила сушки препаратів;

23 Вимоги щодо відбору бактеріальної культури для виготовлення мазку;

24 Методика нанесення бактеріальної культури на предметне скло, взятої з щільного і рідкого поживного середовища.

Заняття № 2

Тема: Складні і спеціальні методи фарбування мікроорганізмів.

Мета заняття: Навчити студентів фарбуванню мікробів складним способом за методом Грама та спеціальним методам фарбування спор і капсул мікроорганізмів.

ЛІТЕРАТУРА: I. 41-46; IV. 46-47; VІ. 32-33;VІІ.36-39

Зміст заняття

Викладач:

1. проводить опитування студентів з пройденого та наступного матеріалу;

2. демонструє фарбування бактерій за методом Грама, спор і капсул за методом Пєшкова і Буррі, пояснює сутність цих методів.

Самостійна робота студентів

Кожен студент:

1. готує мазки з чистих культур і проводить їх фарбування за методом Грама, Пєшкова, Буррі;

2. проводить мікроскопію препаратів, замальовує в зошиті, підписує під малюнками латинські назви бактерій.

Оснащення заняття

Забезпечити кожного студента:

- мікроскопом, предметним склом, спиртівкою, бактеріологічною петлею, практикумом з мікробіології.

Забезпечити кожні дві людини:

- фільтрованим папером, імерсійною олією, промивалкою з ванночкою, олівцем по склу, фарбуючими розчинами, реактивами (генціанвіолет у вигляді смужок фільтрувального паперу, розчин Люголя, 96% спирт, карболовий фуксин, метиленовою синню, 0,5% водний розчин нейтральроту, склянка з дезинфікуючим розчином );

Забезпечити підгрупу студентів:

- трьома, пробірками з грамнегативною (Асеtоbаctег асеti) і грампозитивною культурою (Вас. subtilis, Вас. mycoides), спороутворюючою (Вас. mesentericus), капсуло утворюючою (Вас. mucylaginosus, або Аzоtоbасtег).

Студенти повинні мати кольорову пасту або олівці (синього і червоного кольору).