386 Глава 14

Часть электромагнитного спектра, используемая для исследований в области физической биохимии.

РИС. 14-3.

тельным уровнем первого возбужденного состояния, лежат в ультрафиолетовой и видимой области спектра. Возможны также низкие по энергии переходы между колебательными уровнями в пределах одного электронного уровня. Эти переходы происходят в результате поглощения излучения в инфракрасной области. На рис. 14-3 показана часть электромагнитного спектра, пред­ставляющая интерес для биохимиков, и обозначены переходы, которые возникают при поглощении излучения в различных ди­апазонах частот.

Вероятность перехода при одной длине волны характеризует­ся молярным коэффициентом погашения * при этой длине волны. Чтобы определить этот параметр, рассмотрим, как он измеря­ется. Если свет интенсивности I₀ проходит через раствор с тол­щиной слоя d и концентрацией с, интенсивность прошедшего све­та I подчиняется закону Ламберта — Бера:

РИС. 14-4.

Положительное и отрицательное отклонение от закона Бера и причины откло­нений.

а — спектральный сдвиг, связанный с возрастанием концентрации, часто в результате полимеризации. Отметим, что при длине волны λ не наблюдается изменения молярного коэффициента погашения при изменении концентрации. Эта длина волны соответствует изобестической точке, б — кривая, показывающая отклонения от закона Бера. При λ₁ отклонение положительное (1), при λ₃ — отрицательное (2). В изобестической точке при λ₂ закон всегда соблюдается (3).

декс λ указывает длину волны, при которой проводится измере­ние. Оптической плотностью удобно пользоваться, так как она равняется εхс. В некоторых случаях, если с велико, ε становится функцией с, и тогда можно сказать, что закон Бера * наруша­ется. Это может быть результатом рассеяния света или структур­ных изменений (например, димеризации, агрегации или химиче­ских изменений) при высоких концентрациях (рис. 14-4).

Аппаратура для измерения поглощения в видимом и ультрафиолетовом свете

Измерение поглощения осуществляют с помощью спектрофото­метра. (При описании биохимических образцов почти всегда име­ются в виду растворы этих образцов.) Несмотря на различия в конструкции, все спектрофотометры состоят из источника света, монохроматора (для выделения определенной длины волны), прозрачной кюветы, куда помещается образец, детектора света и измерительного прибора или самописца для регистрации вы­ходного сигнала детектора (рис. 14-5). Ход работы обычно сле-

• Закон Ламберта — Бера почти всегда называют законом Бера, хо­тя это не совсем правильно (имеется другой закон Бера).

13*