Алгоритм проведения биопробы (реакция нейтрализации на мышах) при диагностике газовой гангрены. Цель постановки данной реакции для определения вида возбудителя.
Для этого исследуемый материал разливают по 0,9 мл в 5 пробирок и в каждую прибавляют по 0,6 мл соответствующих антитоксических сывороток: C.perfringens, C. novyi, C. septicum, C. histolyticum, C.sordellii. В последнюю , 6–ю пробирку вносят изотонический раствор хлорида натрия – контроль.
Смесь токсина с антитоксической сывороткой оставляют при комнатной температуре на 40 мин для нейтрализации токсина. По 0,5 мл из каждой пробирки инъекции вводят подкожно в заднюю лапку с внутренней стороны двум мышам. За животными ведут наблюдение. Гибель животного может наступить в сроки 5-6 часов до 3-4 дней. Мыши, получившие токсин с гомологичной антисывороткой, остаются живыми.
При отрицательном результате биологической пробы опыт повторяют с выделенной чистой культурой по той же схеме.
Учитывая быстрое развитие клинических симптомов газовой гангрены, необходимо быстро дать ориентировочное заключение о виде возбудителя (с целью применения срочной серотерапии). Для этого из исследуемого материала делают мазок – отпечаток, обрабатывают иммунофлюоресцирующей видоспецифической сывороткой и изучают иммунофлуоресцентным методом.
4. Проба на чувствительность к антибиотикам на среде Цейсслера и инкубируют при температуре 370С 8 – 24 часа в анаэробных условиях.
Vэтап
1.Учет всех тестов.
2. Выдают окончательный ответ.
Заключение: «Выделены Clostridium рerfingens чувствительные к стрептомицину и гентамицину, промежуточные к тетрациклину, устойчивые к пенициллину и эритромицину.