Алгоритм проведения биопробы (реакция нейтрализации на мышах) при диагностике столбняка. Цель постановки данной реакции для лабораторного диагноза столбняка.

Измельченный в ступке материал, залитый изотоническим раствором хлорида натрия, оставляют на 1 час для экстрагирования токсина. Полученный экстракт фильтруют через ватно – марлевый фильтр. Фильтрат делят на две порции. К одной из порций добавляют противостолбнячный антитоксин и оставляют на 1 час для нейтрализации токсина.

Постановка опыта (реакция нейтрализации на мышах). В опыт берут две пары мышей. Первой паре внутримышечно в бедро задней лапки вводят по 0,5 мл экстракта. Двум другим мышам вводят то же количество экстракта с антитоксической противостолбнячной сывороткой. Животных помещают в стеклянную банку и ведут за ними наблюдение.

Вторую часть эмульсии засевают на питательные среды во флаконах и на чашки Петри с питательным агаром (для получения отдельных колоний). Посевы инкубируют в анаэробных условиях при температуре 35- 37⁰С.

Если животные не погибли, продолжают за ними наблюдение. Признаки столбняка у мышей: взъерошенная шерсть, ригидность конечностей и хвоста («хвост трубой»), паралич лапки, в которую введен токсин. Животные погибают в характерной позе: поджав передние лапки и вытянув задние.

После гибели животного производят микроскопическое и бактериологическое исследование тканей из органов. У контрольных мышей, получивших токсин одновременно с антитоксином, заболевание столбняком не возникает. При отрицательном результате биологической пробы изучают посевы. Подозрительные колонии пересевают для выделения чистой культуры на среду Китта – Тароцци.

Изучают культуральные свойства выделенных микроорганизмов. Делают мазки и микроскопируют их. Полученную культуру испытывают на наличие столбнячного токсина в биологической пробе (по той же схеме).

4. Проба на чувствительность к антибиотикам на среде Цейсслера и инкубируют при температуре 37⁰С 8 – 24 часа в анаэробных условиях.

Vэтап

1. Учет всех тестов.

2. Выдают окончательный ответ.

Заключение: «Выделены Clostridium tetani чувствительные к эритромицину и тетрациклину, промежуточные к гентамицину, устойчивые к пенициллину и стрептомицину».

Клостридии газовой гангрены

Таксономия. Семейство Bacillaceae, род Clostridium, виды:

Cl.perfingens, Cl.novyi, Cl.septicum, Cl.histolyticum, Cl.sordelii, Cl.fallax,Cl.oedematiens, Cl.sporogenes, Cl.bifermentas, Cl.ramosum Основные четыре вида: Cl. perfingens, Cl. novyi, Cl. septicum, Cl. histolyticum. Реже газовую гангрену вызывают Cl. sordelii, Cl. oedematiens, Cl. fallax, Cl. ramosum, Cl. bifermentas, Cl.sporogenes.

Полимикробный характер инфекции. Газовая гангрена – полиэтиологическая раневая инфекция. Проявляется она массивным омертвением мышечных тканей, интенсивным отеком и газообразованием в них, выраженной токсемией и высокой температурой. Чаще всего газовой гангреной осложняются рвано – ушибленные осколочные ранения нижних конечностей, загрязненные почвой, содержащей споры токсигенных клостридий, которые попадают в нее с испражнениями животных и человека. Споры способствуют ее развитию быстрая некротизация мощных пластов мышечной ткани вследствие нарушения в ней кровотока и большой кровопотери, резко снижающих реактивность организма, на фоне которой активируются гноеродные аэробы, ускоряющие процесс некроза тканей и понижающие в них окислительно – восстановительный потенциал. При этом среди сопутствующих микробов – индикаторов газовой гангрены в ране чаще всего обнаруживаются стафилококк, стрептококки, синегнойная палочка, вульгарный протей, Cl.sporogenes.

Морфология. Cl.perfingens – крупные полиморфные палочки, не имеет жгутиков, образует в организме человека и животных капсулу. Споры овальной формы, располагающиеся субтерминально или центрально. Грамположительны.