16 Этапы приготовления питательных сред, правила хранения, контроль качества готовых питательных сред. Стерилизация простых и сложных пит. Сред.

Этапы приготовления сред: 1) варка; 2) установление оптимальной величины рН; 3) осветление; 4) фильтрация; 5) разлив; 6) стерилизация; 7) контроль.

Варят среды на открытом огне, водяной бане, в автоклаве или варочных котлах, подогреваемых паром

Осветление сред производят, если при варке они мутнеют или темнеют. Для осветления в среду, подогретую до 50° С, вливают белок куриного яйца, взбитый с двойным количеством воды, перемешивают и кипятят.

Фильтрацию жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или через матерчатые фильтры. Разливают среды в пробирки (по 3-5 мл или по 10 мл), флаконы, колбы, матрацы и бутылки не более чем на 2/3 емкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.

Контроль готовых сред: а) для контроля стерильности среды ставят в термостат на 2 сут, после чего просматривают. Если на средах не появятся признаки роста, их считают стерильными и передают для химического контроля по нескольку образцов каждой серии; б) химический контроль: окончательно устанавливают рН, содержание общего и аминного азота, пептона, хлоридов (их количество должно соответствовать указанному в рецепте).

Химический контроль сред производят в химической лаборатории; в) для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами микроорганизмов, и по их росту судят о питательных (ростовых) свойствах среды. К готовой среде прилагают этикетку и паспорт, в котором указывают название и состав среды, результаты контроля и др.

Хранят среды при комнатной температуре в шкафах, желательно специально для них предназначенных. Некоторые среды, например, среды с кровью и витаминами, хранят в холодильнике.

17 Принципы и методы культивирования микроорганизмов . Методы культуральных свойств микроорганизмов. Характеристика роста бактерий на жидких и плотных питательных средах

Для успешного культивирования, помимо правильно подобранных сред и правильно произведенного посева, необходимы оптимальные условия: температура, влажность, аэрация (снабжение воздухом). Как правило, подходящие условия удается создать, тщательно воспроизведя условия природной обстановки.

Температура. Оптимальную температуру для культивирования большинства патогенных микроорганизмов (37° С) создают в термостате

Свет подавляющему большинству микробов (к ним относятся все патогенные) не нужен - их культивируют в темноте. Однако для изучения пигментообразования, которое происходит активнее на рассеянном свету, культуры после термостата выдерживают 2-3 дня при комнатном освещении.

Влажность. Жизнь микробов невозможна без влаги - питательные вещества проникают в клетку только в растворенном виде. Это необходимо учитывать при культивировании на плотных средах: разливать их в чашки и скашивать в пробирках лучше в день посева. При культивировании микробов, особенно чувствительных к отсутствию влаги, например гонококков, в термостат ставят открытый сосуд с водой.

Сроки культивирования. Большинство патогенных микробов культивируют 18-24 ч, но есть виды, растущие медленно (до 4-6 нед). Чтобы сохранить в них влагу, ватные пробки после посева заменяют стерильными резиновыми или надевают на них резиновые колпачки.

Аэрация. По потребности микробов в свободном кислороде их делят на аэробы и анаэробы. Обе группы требуют различных условий культивирования.

Поступление кислорода, необходимого для культивирования аэробов и факультативных анаэробов, осуществляется при пассивной и активной аэрации.

Пассивная аэрация - это культивирование на плотных и жидких средах в сосудах, закрытых ватными или ватно-марлевыми пробками, или в чашках Петри. При таком культивировании микробы потребляют кислород, растворенный в среде, находящийся в сосуде над средой и поступающий через пробку. Пассивно аэрируемые культуры можно выращивать на поверхности или в тонком слое среды, куда проникает кислород воздуха.

Активную аэрацию применяют при глубинном культивировании микробов, когда их выращивают в больших объемах среды. Чтобы достаточно снабдить кислородом такие культуры, их помещают в специальные качалки - постоянное перемешивание культуры обеспечивает соприкосновение ее с воздухом. При культивировании в объемах жидкости, достигающих десятков и сотен литров, проводимом в приборах, называемых реакторами или ферментерами, воздух продувают через культуру при помощи специальных устройств.

Культивирование анаэробов сложнее, чем аэробов, так как их необходимо лишить доступа свободного кислорода воздуха. Для этого удаляют воздух из питательной среды различными способами.

Методы изучения культуральных св-в мо

Рост микробов на плотной среде

Различают ровные края в виде четко выраженной линии и неровные. Неровные делятся на

• Фестончатый край, состоящий из крупных, слегка округлых зубцов правильной формы.

• Волнистый край, крупные зубцы выражены нечетко.

• Эрозированный или зазубренный, из острых зубцов различной величины и формы.

• Бахромчатый край, имеющий нежные ворсинки.

Рельеф колонии хар-ся приподнятостью ее над поверхностью пит. Среды и контуром формы в вертикальном разрезе.

• Каплеобразные колонии праивльной формы круглой с различной степенью выраженной выпуклостью.

• Колонии плоско-выпуклые с плоским верхом

• Конусообразные колонии имеющище в вертикальном разрезе форму треугольника

• колонии с вдавленным центром

• колонии плоские

поверхность колонии бывает матовая и блестящая, сухая или влажная, гладкая или шороховатая. Гладкие колонии означают буквой S.шероховатые R

Цвет колонии определяется пигментом, который продуцирует культура микробов.

Структура колонии определяется в проходящем свете прислабом увеличении микроскопа,суженной диафрагмы или при несколько опущенном конденсоре.

По характеру структуры различают след. Виды колонии:

• гиальновые-безцветные прозрачные, без видимой определенной структуры

• зернистые, в зависимости от величины зерен разделяют на мелко и крупнозернистые

• нитевидные или волокнисте наличием длинных чуть переплетающихся нитей

колонии бываю однородные и неоднородные

по характеру консистенции колонии бывают

• пастообразные наподобие сливочого масла

• вязкие или слизистые, примыкающие и тянущие за петлей.

• Волокнистые или кожистые, плотные,сжимающиеся поверхности пит среды в виде упругой пленки

• Хрупкие, сухие, рассыпающие при прикосновении петли.

Особенности роста на жидких пит. Средах.

• Рост бактерий с равномерным помутнением среды,цвет которой остается неизмененным или изменятеся в соответствии цвета водорастворимого пигмента,образующегося в культуре микроба.

• Природный рост хар-ся образованием осадка на дне пробирки с жидкой пит. Средой м.б. в виде хлопьев на дне.

• Цвет осадка и среды, находящимся над ним определяется наличием пигмента, продуцируемого культурой микробов. Если культура пигмента не образует цвет среды не изменяется, а осадок приобретает серовато-белый цвета то это специфически характерно для бактерий с анаэробным типом дыхания

• Пристеночный рост бактерий выражается в том что питательная среда находящаяся в пробирке, остается совершенно прозрачной. Бактерии растут, образуя более или менее крупные, рыхлые хлопья или нвобород коспактные зерна.

• Поверхностный рост бактерий хар-ся появлением пленки:пленка тонкая, нежная, безцветная: влажная пленка толстая хорошо видимая невооруженным глазом:пленка плотная сухая внешним видом напоминает кусочкикожи и при попытке взятия из нее материала снимается целиком в виде круглого диска: плотная пленка сухая иногда бородавчатая поверхнасть краями прикрепляющимися к стенке сосуда при взбалтывании разбиватеся на кусочки, погружаясь вглубь жидкости.

Рост на полужидкой питательной среде

Для выявления оссобенностей микробного роста на полужидкой пит среде исследуемую культуру засевают в столбик 0,2-0,5% полужидкого агара. Для того что бы особенности роста появились наиболее четко, прокол среды делают в непосредственной близкости к стенке прбирки. Посев произведенным образом дает возможность выявить подвижные расы мокробов и дифференцировать их от подвижности.

Подвижные микробы в столбике полужидкого агара вызывают выраженное помутнение, распространяющееся более или менее равномерно по всей толщине среды. Неподвижные формы микробов растут только по ходу прокола среды,напоминая сосульки цилиндричской или конической формы. При этом окружающая среда остается совершенно прозрачной.