2. Специальные методы микроскопии: люминесцентная, фазовоконтрастная, темнопольная. Понятие об электронной микроскопии. Принципы устройства и работы электронного микроскопа.

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Осно¬вана на явлении фотолюминесценции.

Люминесценция — свечение веществ, возникающее после воз¬действия на них каких-либо источников энергии: световых, элек¬тронных лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесцен¬ция — люминесценция объекта под влиянием света. Если осве¬щать люминесцирующий объект синим светом, то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В ре¬зультате возникает цветное изображение объекта.

Темнопольная микроскопия. Микроскопия в темном поле зре¬ния основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля). Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоидконденсора, которые заменяют обычный конденсор в био¬логическом микроскопе .

Фазовоконтрастная микроскопия. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Они приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение объекта в светлом поле зрения, негативным — светлое изображение объек¬та на темном фоне.

Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устройство, а также специальные осветители.

Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способно¬сти светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмик¬роскопических объектов.

Принципиальная оптическая схема электронного микроскопа аналогична схеме светового, в котором все оптические элементы заменены соответствующими элек¬трическими: источник света — источником электронов, стеклянные линзы — линзами электромагнитными. В электронных микроскопах просвечивающего типа различа¬ют три системы: электронно-оптическую, вакуумную, электропитания. Фотографи¬рование изображений при всех видах исследований проводится на фотопластинки или фотопленку. Источником электронов является электронная пушка, состоящая из V образного вольфрамового термокатода, который при нагревании до 2900 °С при подаче постоянного напряжения до 100 кВ в результате термоэмиссии испуска¬ет свободные электроны, ускоряемые затем электростатическим полем, создавае¬мым между фокусирующим электродом и анодом. Электронный пучок затем форми¬руется с помощью конденсорных линз и направляется на исследуемый объект. Элек¬троны, проходя сквозь объект, за счет его разной толщины и электроноплотности отклоняются под различными углами и попадают в объективную линзу, которая формирует первое полезное увеличение объекта.

После объективной линзы электроны попадают в промежуточную линзу, кото¬рая предназначена для плавного изменения увеличения микроскопа и получения дифракции с участков исследуемого образца. Проекционная линза создает конеч¬ное увеличенное изображение объекта, которое направляется на флуоресцирую¬щий экран. Благодаря взаимодействию быстрых электронов с люминофором экра¬на на нем возникает видимое изображение объекта. После наведения резкости сразу проводят фотографирование. Увеличение конечного изображения на экране определяется как произведение увеличений, даваемых объективной, промежуточ¬ной и проекционной линзами.

4. L-формы бактерий, их особенности и роль в патологии человека. Факторы, способствующие образованию L-форм. Микоплазмы и заболевания, вызываемые ими.

Она может быть обратимой и необратимой. В случае если генетический контроль синтеза клеточной стенки сохраняется, L-формы при благоприятных условиях могут возвращаться в исходную бактериальную форму с восстановлением всех основных биологических свойств, включая патогенность. Если же генетический контроль синтеза клеточной стенки нарушен необратимо, трансформация приоб¬ретает необратимый характер, а такие L-трансформанты по своим морфологичес¬ким, культуральным и иным свойствам становятся неотличимыми от микоплазм. L-трансформация происходит как in vitro, так и in vitro (в организме человека и жи¬вотных). Факторами, индуцирующими ее, являются различные антибиотики, угнетаю¬щие биосинтез клеnочной стенки (пенициллин, цефалоспорины, циклосерин, ванкомицин и т. п.); ферменты (лизоцим, амидаза, эндопептидаза); антимикробные антитела; высокие концентрации некоторых аминокислот, особенно глицина и фенилаланина.

Исключительное значение L-трансформации патогенных бактерий заключается в том, что она является частой причиной перехода острых форм заболеваний в хро¬нические и их обострений. L-трансформацию надо рассматривать не просто как одно из проявлений изменчивости бактерий, а как своеобразную, присущую всем бакте¬риям форму приспособления к неблагоприятным условиям существования (подоб¬но спорообразованию), которая способствует сохранению вида бактерий в природе. Клеточная стенка и ее синтез чувствительны к действию антител и различных химиопрепаратов. Освобождение от нее не лишает бактерии жизнеспособности, но по¬зволяет переживать действие этих неблагоприятных для них факторов, а по их устра¬нении — возвращаться в свое исходное состояние.

Клеточная стенка — сложный структурный эле¬мент, встречающийся только у эубактерий (кроме микоплазм) и характеризующий¬ся наличием в его составе уникального химического соединения — пептидогликана, наделяющего клетку важными иммунобиологигескими свойствами и определяющего ее постоянную форму;

Микоплазмы различные по форме бактериальные клетки (мелкие шары, короткие нити), лишенные клеточной стенки, имеющие небольшие размеры (125-250 нм).

Микоплазмы адсорбируются на поверхности клеток хозяина и внедряются в нее.

Вирусы урогенитальных и респираторных заболеваний могут располагаться на мембранах микоплазм, обитающих в мочеполовой или дыхательной системах.

Классификация микоплазм

Микоплазмы относятся к семейству Mycoplasmataceal. Это семейство разделяется на 2 рода:

Род Mycoplasma включает около 100 видов.

Основные 4 вида:

Mycoplasma hominis

Mycoplasma genitalium

Mycoplasma species

Mycoplasma pneumonia

Род Ureaplasma (2 вида)

ureaplasma urealiticum

ureaplasma parvum

Ныне известно 6 видов микоплазм, вызывающих болезни человека: Mycoplasma pneumonia, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Mycoplasma species, Ureaplasma urealticum, Mycoplasma incognita(выделена у больных СПИДом).

В настоящее время количество заболеваний, вызванных микоплазмами, существенно увеличилось.

Микоплазма гениталиум (Mycoplasmagenitalium) обладает наиболее выраженным патогенным потенциалом.

С помощью специальной структуры (органеллы) клетки микоплазмы прикрепляются к эритроцитам и другим клеткам.

Микоплазма хоминис (Mycoplasmahominis) является менее патогенной, но встречается значительно чаще при инфекционных процессах мочеполовой системы. Mycoplasmahominis значительно чаще обнаруживается при воспалительных процессах у женщин, чем у мужчин.

Микоплазма пневмония (Mycoplasmapneumoniae) возбудитель первичной атипичной пневмонии человека служит причиной внутриутробной инфекции.

Микоплазмозы классифицируются по локализации (микоплазменный уретрит, простатит, цервицит, эндометрит, сальпингит и т.д.)

Мочеполовые микоплазменные инфекции могут быть острыми, хроническими и бессимптомными.

Обычно малосимптомные вульвовагиниты, уретриты, цервициты переходят в хроническую форму мочеполового микоплазмоза (например, воспалительные процессы в маточных трубах, яичниках, негонококковые уретриты).

Больные жалуются на: зуд в области мочеполовых органов, незначительные слизистые выделения, которые могут и исчезать, а спустя некоторое время вновь появляться и усиливаться.

Острый урогенитальный микоплазмоз наблюдается редко. При правильном лечении пациент полностью выздоравливает.

У мужчин: микоплазмозы вызывают поражение мочеиспускательного канала, предстательной железы, семенных пузырьков, придатков яичек, мочевого пузыря, почек и мочевыводящих путей.

При мужском бесплодии целесообразно исследовать сперму микробиологическим методом (бактериальный посев) на микоплазму и уреаплазму.

У женщин: женщины наиболее часто являются бессимптомными носителями микоплазм.

Под воздействием стрессовых факторов скрытая инфекция может перейти в хроническую или острую инфекцию.