20. . Преципитирующие свойства иммунных сывороток. Использование преципитации в агаре и применение ее для изучения- антигенов и определения токсигенности дифтерийной палочки.

Реакция преципитации и ее варианты

Реакции агглютинации и преципитации очень близки по своей сути. Различия между ними зависят главным образом от величины частиц антигена. Преципитаци¬ей называют процесс, когда происходит агрегация антител с растворимыми антиге¬нами; если же антиген представлен корпускулами, специфическая агрегация таких антигенов описывается как агглютинация.

Появление преципитата при реакции антиген—антитело определяется не только возникновением решетки, образуемой ее участниками, но и особой ро¬лью Fс-фрагмента иммуноглобулина, изменение конформации которого приво¬дит к утрате этим комплексом растворимости в солевых растворах. В связи с этим в реакции преципитации используют неразведенную или слабо разведен¬ную сыворотку.

Для постановки реакции преципитации необходимы: антитела — испытуемая сы¬воротка больного или иммунная диагностическая сыворотка (при идентификации выделенных микробов); антиген — экстрагированный гаптен или полный гаптен со¬ответствующих микроорганизмов; физиологический раствор как источник электро¬литов. Существует множество модификаций этой реакции, которые подразделяют на две группы: преципитация в жидкой среде (реакция флоккуляции и реакция коль- цепреципитации) и преципитация в геле.

Реакция флоккуляции представляет собой преципитацию, при которой рас¬творы антигенов и антител смешивают в пробирке. Учет реакции производят с по¬мощью измерения на фотоэлектроколориметре мутности получаемой системы, что позволяет определить концентрацию исследуемого антигена.

Значительно чаще применяется качественная реакция кольцепреципитации. Для ее постановки в тонкие преципитационные пробирки наливают сначала неразведенную преципитирующую сыворотку и сверху на нее наслаивают, не до¬пуская перемешивания, раствор антигена. В случае гомологичности антител и ан-тигена на границе между этими растворами быстро, через 3—10 мин, появляется кольцо преципитата. В отличие от реакции агглютинации, титр преципитирующей сыворотки определяют с помощью разведения не сыворотки, а антигена.

Реакция преципитации в геле является одним из наиболее эффективных методов анализа растворимых антигенов. Она позволяет выявить число индиви¬дуальных антигенов в исследуемой жидкости и провести анализ их антигенного родства. В 1946 г. Дж. Оудин предложил метод простой диффузии, по которому один из компонентов реакции преципитации, обычно сыворотка, находится в ге¬ле, а другой — антиген — наслаивается на первый в виде раствора. Антиген, диф¬фундируя в гель, образует в нем с антителами белые линии преципитации, хоро¬шо видимые при боковом освещении. В 1948 г. Ё. Оухтерлоню разработал еще бо¬лее простой и удобный метод встречной двумерной диффузии, позволяющий про¬водить прямое сравнение различных ан¬тигенов и сывороток. Этот метод также является весьма ценным при исследова¬нии перекрестных реакций (рис. 73).

Для постановки реакции по Оухтерло¬ню используют 1 %-ный агар, приготов¬ленный на физиологическом растворе, ко¬торый разливают в чашки Петри слоем 0,5 см. После застывания в пластинке агара вырезают луночки диаметром 5—6 мм — одна в центре чашки, 4—5 — по окружно¬сти на расстоянии 1—2 см от центральной. В центральную луночку наливают диагнос¬тическую преципитирующую сыворотку, а в периферические — раствор гомологич¬ного и сравниваемых с ним антигенов. Учет результатов проводят через 24, 48 и 72 ч инкубации при комнатной темпера¬туре. Антитела и антигены диффундируют навстречу друг другу, и в участках, где со¬здаются их эквивалентные концентрации,

образуются дугообразные полосы преципитации. Если полосы преципитации, иду¬щие от двух соседних луночек, сливаются, это указывает на наличие нескольких ан¬тигенных компонентов в исследуемой жидкости. Реакцию встречной диффузии по Оухтерлоню часто применяют для определения токсигенности бактерий, например дифтерийных.

Дальнейшим развитием метода преципитации в геле является иммуноэлектро- форез. Этим термином обозначают метод, объединяющий электрофоретическое разделение смеси антигенов и встречную диффузию по Оухтерлоню на одной и той же пластинке агарового геля. Преципитирующую сыворотку при этом наливают в канавку, вырезанную в геле параллельно направлению электрофоретического раз¬деления. Образующиеся в результате реакции линии преципитации имеют вид дуг, вытянутых в направлении электрофоретического движения фракций антигенов. Иммуноэлектрофорез позволяет определять состав сложных смесей растворимых антигенов, содержащих до 30 компонентов, и является поэтому ценным диагности¬ческим методом.