МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Измерение биопотенциалов

Одна из важнейших функций биологической мембраны - генерация и передача биопотенциалов. Это явление лежит в основе возбудимости клеток, регуляции внутриклеточных процессов, работы нервной системы, регуляции мышечного сокращения, рецепции. В медицине на исследование электрических полей, созданных биопотенциалами органов и тканей, основаны диагностические методы: электрокардиография, электроэнцефалография, электромиография и другие. Практикуется и лечебное воздействие на ткани электрическими импульсами при электростимуляции. В клетках и тканях могут возникать разности электрических потенциалов: 1) окислительно-восстановительные потенциалы - перенос электронов от одних молекул к другим; 2) мембранные - перенос ионов через мембрану вследствие градиента концентрации. Основные биопотенциалы, регистрируемые в организме, - мембранные потенциалы. Мембранный потенциал - разность потенциалов между внутренней (цитоплазматической) и наружной поверхностями мембраны: Прогресс в исследовании биопотенциалов обусловлен: 1) развитием микроэлектродного метода внутриклеточного измерения потенциалов; 2) созданием специальных усилителей биопотенциалов (УПТ); 3) выбором объектов исследования крупных клеток (гигантский аксон кальмара). Диаметр аксона кальмара до 0,5 мм (в 100 - 1000 больше, чем у человека). _____________________________________________________________________________

М икроэлектродный метод В гигантский аксон кальмара вводится микроэлектрод, не нанеся значительных повреждений. Микроэлектрод представляет собой стеклянную микропипетку с очень тонким кончиком (рис. 1а).

Металлический электрод такой толщины гнется и не прокалывает клеточную мембрану, кроме того он поляризуется. Для исключения поляризации электрода используются неполяризующиеся электроды, например серебряная проволока, покрытая солью AgCl. В раствор КС1 или NaCl (желатинизированный агар-агаром), заполняющий микроэлектрод

Микроэлектродный метод измерения

биопотенциалов:

а - стеклянная микропипетка;

б - стеклянный микроэлектрод Второй электрод - электрод сравнения - располагается

в растворе у наружной поверхности клетки (рис. 1в).

Регистрирующее устройство Р, содержащее усилитель

постоянного тока, измеряет мембранный потенциал: Мембранные потенциалы подразделяются на

потенциалы покоя и потенциалы действия.

2. Методы исследования эндокринной системы

ОБЩИЙ ОСМОТР

Непосредственным осмотру и пальпации доступны лишь щитовидная железа и яички. При поражении других эндокринных желез (осмотреть и прощупать которые не удается) ориентироваться на результаты физического исследования различных органов и систем (кожа, подкожная жировая клетчатка, сердечно-сосудистая система и др.).

Уже при общем осмотре можно выявить ряд существенных признаков патологии эндокринной системы:

1. Изменения роста и непропорциональность телосложения (Гигантизм, карликовость, акромегалия)

2. Изменения массы тела: ожирение (сахарный диабет), значительное похудание (гипертиреоз, сахарный диабет, недостаточность надпочечников). При гиперкортицизме наблюдают избыточное отложение жира на лице, что придает ему лунообразный округлый вид (синдром Иценко-Кушинга).

3. При осмотре области шеи составляют ориентировочное представление о размерах щитовидной железы, симметричном или асимметричном увеличении различных ее отделов.

4. При исследовании кожи иногда выявляют гирсутизм (патология яичников, гиперкортицизм), гипергидроз (гипертиреоз), гиперпигментацию (гиперкортицизм), экхимозы (гиперкортицизм), багрово-синюшные стрии - своеобразные участки (полосы) атрофии и растяжения обычно на боковых участках живота (гиперкортицизм). особенности волосяного покрова, характерные для многих эндокринопатий, и большой ряд других симптомов.

5. При исследовании глаз может быть выявлен характерный экзофтальм (гипертиреоз), а также периорбитальный отек (гипотиреоз). Возможно развитие диплопии (гипертиреоз, сахарный диабет).

6. При исследовании нервной системы выявляются нервозность (тиреотоксикоз), быстрая утомляемость (надпочечниковая недостаточность, гипогликемия). Возможны нарушения сознания вплоть до развития комы (например, гипергликемическая и гипогликемическая кома при сахарном диабете). Тетания с судорогами характерна для гипокальциемии.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА

Важное место в диагностике эндокринных болезней занимают лабораторные исследования. Проводят общий клинический анализ крови и мочи. Используют общедоступные методы оценки состояния белкового, углеводного, липидного, минерального и водно-электролитного обмена, кислотно-щелочного равновесия. Оценивают активность некоторых ферментов, ставят белково-осадочные пробы [70]. При болезнях эндокринных органов существенно изменяются биохимические показатели крови, мочи, молока и других биологических жидкостей, так как гормоны оказывают существенное влияние на обмен веществ. Например:

1. при сахарном диабете возрастает концентрация сахара в крови и моче, отмечается гиперлипидемия, а в тяжелых случаях — кетоацидоз, отрицательный азотистый баланс, увеличение гематокритного числа и т. д.

2. При диффузном токсическом зобе снижается содержание холестерина в сыворотке крови, умеренная гипергликемия.

3. Для гипотиреоза характерно снижение в сыворотке крови йода, связанного с белком (СБЙ),

4. для тиреоидита — нейтрофильный лейкоцитоз, повышение СОЭ, для эндемического зоба — снижение концентрации СБЙ в крови и молоке.

5. Гипопаратиреоз характеризуется выраженной гипокальциемией и гиперфосфатемией, а также нередко гиперпротеинемией, положительной печеночной пробой,

6. напротив, при гиперпаратириозе отмечают гиперкальциемию и гипофосфатемию.

7. При синдроме Кушинга, обусловленном нарушением гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, происходит снижение калия в плазме крови, эритроцитах, падение активности щелочной фосфатазы.

Безусловно, в диагностике эндокринных заболеваний обязательно определение в крови и моче гормонов. Анализы мочи в ряде случаев более практичны, однако уровень гормонов в крови точнее отражает скорость их секреции, суточную ритмику.

Существуют биологические, химические и сатурационные методы определения гормонов. Предпочтение отдается сатурационным методам, основанным на вытеснении меченого гормона из специфической связи с белками-носителями, рецепторами или антителами природным гормоном, содержащимся в испытуемой пробе. В ряде случаев определение гормонов проводят в условиях специфических нагрузок, одновременно находят концентрацию основного гормона и его регулируемого параметра. Сопоставляют с содержанием его физиологического регулятора, например при определении тироксина и ТТГ.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСНОВНОГО ОБМЕНА

Определение основного обмена имеет при ряде заболеваний эндокринных желез, особенно щитовидной, большое диагностическое значение. Под основным обменом понимают то минимальное количество энергии, выраженное в калориях, которое необходимо организму для поддержания его основных жизненных функций, т. е. кровообращения, дыхания и постоянной температуры тела. Поэтому определение основного обмена производится при полном физическом покое натощак (не ранее, чем через 12 часов после последнего приема пищи). Принцип определения основного обмена заключается в том, что с помощью специальной аппаратуры непосредственно определяются величины легочной вентиляции, т. е. количество выдыхаемого воздуха и его состав, за известный промежуток времени (обычно за 10 минут). Затем по особым таблицам вычисляется количество поглощенного кислорода и выделенной углекислоты и их соотношение (дыхательный коэффициент), а затем искомое количество калорий за один час на 1 кг веса (в норме около 1 калории) или на 1 м2 поверхности тела (в норме около 40 калорий). Повышение основного обмена более чем на 10-15% будет указывать на несомненное патологическое повышение его и чаще всего наблюдается при гипертиреозе или базедовой болезни, при которых повышение на 30-50- 80-100% представляет собой обычное явление. Понижение основного обмена на 15-30-50% против нормы характерно для гипотиреоза и микседемы, для гипофизарной дистрофии и болезни Симмондса. 

ДРУГИЕ МЕТОДЫ

Визуализация эндокринных желез достигается различными методами. Менее информативным считается обычное рентгенологическое исследование. Оно позволяет определять изменения костного скелета и по ним судить об эндокринных заболеваниях.

_____________________________________________________________________________

Так можно распознавать:

1) опухоли гипофиза по изменениям величины и формы турецкого седла (расширение и углубление его, разрушение краев);

2) акромегалию - по утолщению костей и по увеличению воздушных полостей черепа, по большому развитию 'экзостозов в окружности суставов;

3) евнухоидизм - по недостаточному окостенению костных швов и замедленному окостенению эпифизарных зон;

4) гипергенитализм - по ускоренному окостенению эпифизов. 

_____________________________________________________________________

Современное ультразвуковое исследование более информативно.

Наиболее точную картину позволяет получить компьютерная томография, рентгеновская или основанная на магнитно-ядерном резонансе. Последнее исследование особенно ценно при исследовании гипофиза, тимуса, надпочечников, паращитовидных желез, поджелудочной железы. Эти исследования прежде всего используются для выявления опухолей соответствующих эндокринных желез.

Широкое распространение получило радиоизотопное исследование различных эндокринных желез, что прежде всего относится к щитовидной железе. Оно позволяет уточнить структурные особенности (величина), а также функциональные нарушения. Наиболее широко используются йод-131 или пертехнетат, меченный технецием-99. При помощи гамма-камеры на светочувствительной бумаге фиксируется гамма-излучение, и таким образом происходит сканирование, которое позволяет оценить размеры, форму, участки железы, активно накапливающие изотопы (так называемые горячие узлы). Радиоизотопное сканирование применяется при исследовании надпочечников.

3. Показатели состояния кислотно-щелочного равновесия

Кислотно-щелочное равновесие (КЩР) является интегральным показателем состояния обменных процессов организма, и данный показатель меняется при различных заболеваниях и патологических состояниях, как способ реакции организма на наличие метаболического стресса.

Показатели кислотно-щелочного равновесия

Показатели КЩР подразделяют на основные и дополнительные (табл. 13-1).

•  Основные показатели. Оценку КЩР и его сдвигов в клинической практике проводят с учётом нормальных диапазонов его основных показателей: pH, pCO2, стандартного бикарбоната плазмы крови, буферных оснований и избытка оснований капиллярной крови.

•  Дополнительные показатели. С целью выяснения причины и механизма развития негазовых форм нарушений КЩР определяют ряд дополнительных показателей крови (КТ, МК) и мочи (титруемая кислотность - ТК и аммиак).

Показатели кислотно-щелочного равновесия

Показатель и его обозначение	Характеристика	Метод исследования и материал	Единица измерения	Абсолютная величина в норме
рН	Отрицательный десятичный логарифм концентрации водородных ионов	Потенциометрический: артериальная и венозная кровь	-lg10	7,37—7,44 (артериальная)
				7,34—7,43 (венозная)
Парциальное давление углекислого газа в крови (рСО2)	Парциальное давление углекислого газа в газовой смеси, уравновешенной с кровью; отражает концентрацию СО2, растворенного в плазме крови (в т.ч. и гидратированного СО2)	Потенциометрическое измерение селективным электродом, определение по номограмме	кПа	4,7—6,0 (♂)
				4,3—5,7 (♀)
			мм рт. ст.	35—45 (♂)
				32—43 (♀)
Парциальное давление кислорода в крови (рО2)	Парциальное давление кислорода в газовой смеси, уравновешенной с кровью; отражает концентрацию О2 растворенного в плазме крови	Потенциометрический; артериальная кровь	кПа	31,1—11,4 (до 40 лет)
				9,6—13,7 (старше 40 лет)
			мм рт. ст.	83—108 (до 40 лет)
				72—104 (старше 40 лет)
Общее содержание СО2 в крови (прежнее название — щелочной резерв)	Концентрация общей углекислоты в крови и плазме, т.е. ее ионизированной фракции (ионы бикарбоната, карбамата и карбоната) и неионизированной фракции, содержащей в основном безводный углекислый газ и угольную кислоту	Газометрическое определение; артериальная и капиллярная кровь	ммоль/л	24,6—28,6 (♂)
				22,7—28,5 (♀) и
				19,84—24,76 (♂)
				18,93—24,87 (♀)
Стандартный бикарбонат плазмы крови	Концентрация бикарбонатных ионов в пробе крови, уравновешенной при 37° со стандартной газовой смесью при рСО2 — 40 мм рт. ст. и рО2 более 100 мм рт. ст.	Артериальная кровь	ммоль/л	22,5—26,9 (♂)
				21,8—26,2 (♀)
Актуальные (истинные) бикарбонаты крови	Концентрация бикарбонатных ионов в плазме крови в физиологических условиях (при 38° в плазме крови, взятой без соприкосновения с воздухом)	Артериальная кровь	ммоль/л	23,6—27,2 (♂)
				21,8—27,2 (♀)
Буферные основания (buffer base; ВВ)	Концентрация ионов бикарбоната и анионов белков (буферных оснований) в цельной крови, определяемая путем титрования до изоэлектрической точки белков при рСО2 равном 0	Определение по номограмме; капиллярная кровь	ммоль/л	43,7—53,5
Избыток оснований (base excess; BE)	Разница между концентрацией сильных оснований в крови и в той же крови, оттитрованной сильной кислотой или сильным основанием до рН 7,4 при рСО240 мм рт. ст. и 37°. Положительные величины свидетельствуют об относительном дефиците некарбоновых кислот, потере ионов Н+; отрицательные величины — об относительном избытке некарбоновых кислот и ионов Н+	Капиллярная кровь	ммоль/л	От -2,7 до +2,5 (♂)
		Определение по номограмме; артериальная кровь		От-3,4 до+1,4 (♀)
				От -1,0 до +3,1 (♂)
				От-1,8 до+2,8 (♀)
				От -4,0 до +2,0 (дети до 3-х лет)

4. Показатели осмотического состояния крови

Для характеристики осмотического состояния крови используют четыре показателя:

1. Осмотическое давление.

2. Осмолярность.

3. Осмоляльность.

4. Тоничность.

Осмотическое давление

Осмотическое давление крови равно 7,6 атм. Оно создаётся суммарным числом молекул и ионов. Несмотря на то что белков в плазме 7-8%, а солей около 1%, на долю белков приходится всего 0,03-0,04 атм (онкотическое давление). В основном осмотическое давление крови создается солями, 60% его приходится на долю NaCl. Это объясняется тем, что молекулы белков имеют огромные размеры, а величина осмотического давления зависит только от числа молекул и ионов. Постоянство осмотического давления очень важно, так как гарантирует одно из условий, необходимых для правильного хода физиологических процессов,- постоянное содержание воды в клетках и, следовательно, постоянство их объёма. Под микроскопом это можно наблюдать на примере эритроцитов. Если поместить эритроциты в раствор с более высоким, чем в крови, осмотическим давлением, то они теряют воду и сморщиваются, а в растворе с меньшим осмотическим давлением набухают, увеличиваются в объёме и могут разрушиться. То же самое происходит со всеми другими клетками при изменении осмотического давления в окружающей их жидкости.

• Он­ко­ти­че­ское дав­ле­ние в ка­пил­ля­ре. Это та часть ос­мо­ти­че­ско­го дав­ле­ния плаз­мы, ко­то­рая при­хо­дит­ся на до­лю бел­ков. Известно, что белки являются гидрофильными, поэтому это давление играет большую роль в регуляции обмена воды между капиллярами и тканями организма. Если онкотическое давление более 30 мм рт.ст., тогда вода удерживается в сосудистом русле и уменьшаетсятранскапиллярная фильтрация, что приводит к увеличению объема циркулирующей крови за счет жидкой ее части, то есть при этом гематокритный показатель уменьшается. Если онкотическое давление меньше 25 мм рт.ст. (при уменьшении количества белков плазмы), тогда вода в сосудистом русле не удерживается  и увеличивается транскапиллярная фильтрация, при этом уменьшается объем циркулирующей крови за счет жидкой части, поэтому гематокритный показатель увеличивается.

Осмолярность

Поскольку осмотическое давление прямо пропорционально количеству частиц в единице раствора, то это количество обычно и используют как более удобный показатель. Оно называется осмолярностьюи измеряется в осмолях на литр. 1 осмоль = 1 моль недиссоциирующего вещества. Иными словами, 1 моль глюкозы (180 г) даст в растворе 1 осмоль. Поскольку один моль любого вещества содержит одинаковое количество молекул, осмолярность отражает количество молекул в 1 л раствора. Однако для диссоциирующих веществ картина иная: так, каждая молекула NaCl в растворе даст две частицы, и поэтому 1 моль (57,5 г) NaCl даст 2 осмоля. Осмолярность прямо пропорциональна осмотическому давлению: 1 мосмоль/л создает осмотическое давление, равное 19,3 мм рт. ст. Таким образом:

Pосм = Осм *19,3,

где Осм — осмолярность, мосмоль/л; Pосм — осмотическое давление, мм рт. ст.

Нетрудно подсчитать, что при осмотическом давлении в 5500 мм рт. ст. осмолярность крови будет равна около 285 мосмоль/л.

Осмоляльность

Этот показатель часто используют вместо осмолярности. Он измеряется в осмолях на 1 кг растворителя (а не на 1 л раствора). Осмолярность и осмоляльность крови близки.

Тоничность

В отличие от остальных, это не количественный и не столько физический, сколько биологический показатель. Он характеризует поведение данной клетки в данном растворе. Так, эритроцит сморщивается в растворе NaCl с осмолярностью 400 мосмоль/л, но может не менять свой объем в аналогичном растворе другого вещества (например, мочевины), легко проходящего через его мембрану (см. выше, разд. «Осмос и его физиологическое значение»). Раствор, в котором клетка не меняет свой объем, называют изотоническим. Таким образом, выделяют изотонические, гипотонические и гипертонические растворы. В норме для практических целей можно считать, что любые растворы, изоосмолярные крови (с такой же осмолярностью), являются изотоническими, но бывают и важные исключения (например, раствор мочевины, которая легко проникает через клеточные мембраны и потому не создает эффективного осмотического давления).

5. Основные константы крови

Количество крови 

В норме у человека  количество крови составляет 6-9℅ веса. Например, у человека весом 65 кг должно быть 5 литров крови, а у человека весом 91 кг – 7 литров крови. Количество крови можно определить двумя способами: 1) методом разведения индеферентного красителя – этим способом можно определить только плазму; 2) с использование радиоактивных изотопов – этим способом можно определить только количество форменных элементов, зная гематокритный показатель, можно определить общее количество крови.

Гематокритный показатель 

Объёмное соотношение форменных элементов и плазмы, определяется при помощи центрифугирования крови. В норме этот показатель равен 40-45%

Удельный вес крови – в норме составляет 1,05 – 1,06.

Вязкость крови – в норме составляет 4,5 – 5,0. Этот показатель зависит от  количества форменных элементов и белков плазмы.

Осмотическое давление (см. №4) – это сила, способствующая диффузии (проникновению) растворителя через полупроницаемую мембрану, отделяющую растворы разной концентрации. В норме осмотическое давление составляет 7,6 – 8,1 атм.

Осмотическую резистентность эритроцитов определяем  с помощью гипотонических растворов. Осмотическая резистентность эритроцитов – это наибольшая концентрация гипотонического раствора, при котором происходит разрушение оболочки эритроцитов. Например, эритроцит с осмотической резистентностью 0,5% начинает разрушаться в 0,5% растворе NaCl. Если этот эритроцит поместить в раствор концентрация которого больше 0,5%, то эритроцит только набухает, но не лопается. Если этот эритроцит поместить в раствор концентрация которого меньше 0,5% он также лопается.

Онкотическое давление  (см. №4) В норме это давление равно 25-30 мм рт.ст., то есть в 200 раз меньше осмотического давления.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) – измеряется величиной столба плазмы, освобождающейся от эритроцитов при их оседании из цитратной смеси в специальной пипетке и измеряется в мм за 1 час. Внорме этот показатель равен от  2 до 9 мм за час. СОЭ  зависит от многих факторов: количества эритроцитов, их морфологических особенностях и белкового состава плазмы. На СОЭ влияет физиологическое состояние организма. Так, например, при беременности, воспалительных процессах, эмоциональном напряжении СОЭ увеличивается.

Содержания форменных элементов крови. Эритроцитов – 4,5-5х1012 на литр; лейкоцитов 4,5-9х109 на литр; тромбоцитов 180-320х109 на литр.

Количество гемоглобина – дыхательного пигмента, находящегося в         эритроцитах и состоящего из белковой части – глобина и небелковой части – гема, в состав которого входит железо. В норме гемоглобина у мужчин – 130-160 г на литр, у женщин – 120-140г на литр.

Белки крови  - в норме 65 – 85 г/л. К ним относятся альбумины (52 – 58%), глобулины ифибриноген. Белки выполняют следующие функции:

а) определяют величину онкотического давления (благодаря этому белки играют важную роль в транскапиллярном обмене воды, влияя на общую массу циркулирующей крови);

б) буферные свойства крови (за счет их амфотерности);

в) вязкость плазмы;

г) транспортную;

д) иммунную защиту (за  счет  глобулинов, определяющих уровень иммуноглобулинов  G, M, A, E);

е) гемостатическую (за счет фибриногена).

6.Определение осмотической резистентности эритроцитов

Наиболее простым и распространенным в клинике методом оценки физико-химических свойств эритроцитов является исследование их осмотической резистентности (устойчивости). Метод основан на количественном определении степени гемолиза в гипотонических растворах хлорида натрия, в которых, как известно, происходит набухание и гемолиз эритроцитов.

Предварительно готовят рабочие растворы натрия хлорида различной концентрации: 1%; 0,85%; 0,75%; 0,70%; 0,65%; 0,60%; 0,55%: 0,50%); 0,45%; 0,40%; 0,35%; 0,30%; 0,20% и 0,10%. Рабочие растворы натрия хлорида разливают в 14 центрифужных пробирок (по 5,0 мл).

В стерильную пробирку с гепарином берут 1,5 мл венозной крови, перемешивают и добавляют в каждую из 14 центрифужных пробирок с рабочими растворами натрия хлорида по 0,02 мл гепаринизированной крови. Пробирки оставляют на 1 ч при комнатной температуре, а затем центрифугируют (5 мин при 2000 об/мин).

Надосадочную жидкость из каждой пробирки исследуют на фотоэлектроколориметре. В качестве холостой пробы используют надосадочную жидкость из пробирки, содержащей 1% раствор натрия хлорида. Определяют процент (степень) гемолиза, приняв за 100% гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида.

_____________________________________________________________________________

Процент гемолиза=Ех*100 / Е1, где  Е1 — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1% раствором хлорида натрия;  ЕХ — экстинкция исследуемой пробы;  100 — процент гемолиза в пробирке с 0,1 % раствором хлорида натрия.

*Экстинкция-оптическая плотность раствора

_____________________________________________________________________________

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины

У здоровых в свежей крови начало гемолиза отмечают при концентрации хлорида натрия 0,50—0,45 %, а полный гемолиз — при 0,40—0,35 % растворе хлорида натрия.

Клиническое значение

Исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Понижение осмотической резистентности, т. е. появление гемолиза эритроцитов при более высокой, чем в норме, концентрации хлорида натрия (0,70—0,75%), наблюдается при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, а также иногда при аутоиммунной гемолитической анемии. В ряде случаев понижение осмотической резистентности выявляется только при исследовании инкубированной крови. Повышение осмотической резистентности характерно для талассемии, гемоглобинопатий.

7.Определение времени свертывания крови и остановки кровотечения

1)Вре­мя кро­во­те­че­ния

Это вре­мя, в те­че­ние ко­то­ро­го идет кровь при про­ко­ле мяг­ких тка­ней тон­кой иг­лой. По­сколь­ку кро­во­те­че­ние из мел­ких со­су­дов ос­та­нав­ли­ва­ет­ся со­су­ди­сто-тром­бо­ци­тар­ным ге­мо­ста­зом, это тест имен­но на со­су­ди­сто-тром­бо­ци­тар­ный ге­мо­стаз. Нор­маль­ные зна­че­ния: не бо­лее 7 мин.

Определение длительности кровотечения (уколочная проба Дуке). Наносят более глубокий, чем обычно, укол в палец (3 мм). Через каждые 30 с полоской фильтровальной бумаги прикасаются к капле крови (1-ю каплю не удаляют! ). Постепенно капли крови на бумаге становятся все меньше и в конце концов исчезают. Время кровотечения подсчитывают по количеству капель на фильтровальной бумаге, снятых через известные промежутки времени. В норме время кровотечения равно 2—4 мин.

2)Вре­мя свер­ты­ва­ния

Это вре­мя, в те­че­ние ко­то­ро­го све­же­вы­пу­щен­ная кровь сво­ра­чи­ва­ет­ся в про­бир­ке. Оче­вид­но, что это тест на коа­гу­ля­ци­он­ный ге­мо­стаз.

метод Сухарева (для капиллярной крови). После укола в палец 1-ю каплю крови удаляют. В капилляр для определения скорости оседания эритроцитов сплошным столбиком набирают 25 мм крови. Включают секундомер. Путем наклона капилляра на 45—50° переводят взятую кровь на его середину. Капилляр оставляют в горизонтальном положении в руке. Затем через каждые 30 с наклоняют капилляр на 30—45° (лучше, если угол наклона всегда один и тот же) сначала в одну сторону, затем возвращают капилляр в горизонтальную плоскость и через 30 с вновь наклоняют его, но уже в другую сторону. При наклоне капилляра следят за тем, чтобы столбик крови смещался не более чем на 10 делений. Свободное передвижение крови в капилляре свидетельствует о том, что свертывание еще не наступило. Замедление движения крови или появление капилляра на стенке небольших сгустков крови свидетельствуют о наличии свертывания крови. Окончание процесса свертывания регистрируют в момент полной остановки движения крови. В норме время свертывания капиллярной крови: начало от 30 с до 2 мин; конец — от 3 до 5 мин..

метод Ли—Уайта (для венозной крови);

Определение времени свертывания венозной крови. Подготавливают водяную баню температурой 37 °С, сухую серологическую пробирку и секундомер. 1 мл венозной крови, взятой из локтевой вены обследуемого сухим и стерильным шприцем, помещают в серологическую пробирку, одновременно включают секундомер. Пробирку устанавливают в водяную баню. Через 2 мин после взятия крови, а затем через каждые 30 с пробирку наклоняют на 45°, при этом желательно не выносить пробирку из воды. В момент, когда образуется плотный сгусток и кровь не выливается при переворачивании пробирки вверх дном, определение заканчивают. Время свертывания крови регистрируют от момента взятия ее до появления плотного сгустка. В норме время свертывания крови, взятой из вены, составляет от 5 до 10 мин.

3)Определение ретракции кровяного сгустка. 10 мл крови, взятой из вены, помещают в градуированную пробирку и оставляют при комнатной температуре на 24 ч. В процессе свертывания крови образуется сгусток, постепенно уплотняющийся при этом отделяется сыворотка. Через сутки учитывают степень уплотнения сгустка и количество отделившейся сыворотки. В норме уплотнение сгустка заканчивается в течение 18—24 ч, а количество Отделившейся сыворотки составляет от объема взятой для определения крови. Индекс ретракции определяют путем деления объема отделившейся сыворотки на общий объем взятой для исследования крови. В норме индекс ретракции равен 0, 3—0, 5. Удлинение времени свертывания крови, длительности кровотечения, замедление или отсутствие ретракнии кровяного сгустка может иметь место при геморрагических диатезах.

4)Про­тром­би­но­вое вре­мя

Это вре­мя, в те­че­ние ко­то­ро­го сво­ра­чи­ва­ет­ся цит­рат­ная кровь (то есть кровь, в ко­то­рой пред­ва­ри­тель­но свя­за­ли все ио­ны каль­ция до­бав­ле­ни­ем цит­ра­та) по­сле до­бав­ле­ния каль­ция и тка­не­во­го фак­то­ра. Это тест на внеш­ний (и об­щий) путь свер­ты­ва­ния кро­ви, так как имен­но внеш­ний путь за­пус­ка­ет­ся тка­не­вым фак­то­ром. Нор­маль­ные зна­че­ния: 12—14 с.

Го­раз­до ча­ще при­ме­ня­ют два по­ка­за­те­ля, про­из­вод­ных от про­тром­би­но­во­го вре­ме­ни:

про­тром­би­но­вый ин­декс (по­ка­за­тель Кви­ка) — от­но­ше­ние стан­дарт­но­го про­тром­би­но­во­го вре­ме­ни к про­тром­би­но­во­му вре­ме­ни у об­сле­дуе­мо­го, вы­ра­жен­ное в про­цен­тах;

ме­ж­ду­на­род­ное нор­ма­ли­зо­ван­ное от­но­ше­ние (МНО). Этот по­ка­за­тель пред­став­ля­ет со­бой от­но­ше­ние про­тром­би­но­во­го вре­ме­ни у об­сле­дуе­мо­го к стан­дарт­но­му про­тром­би­но­во­му вре­ме­ни, скор­рек­ти­ро­ван­ное с уче­том осо­бен­но­стей при­ме­няе­мых в дан­ной ла­бо­ра­то­рии реа­ген­тов. Вне­дре­ние это­го по­ка­за­те­ля бы­ло свя­за­но со зна­чи­тель­ны­ми раз­ли­чия­ми в дан­ных, по­лу­чае­мых в раз­ных ла­бо­ра­то­ри­ях, и в на­стоя­щее вре­мя имен­но МНО, а не про­тром­би­но­вое вре­мя са­мо по се­бе и не про­тром­би­но­вый ин­декс, счи­та­ет­ся пред­поч­ти­тель­ным по­ка­за­те­лем про­тром­би­но­во­го вре­ме­ни.

Ак­ти­ви­ро­ван­ное час­тич­ное тром­бо­пла­сти­но­вое вре­мя

Это вре­мя, в те­че­ние ко­то­ро­го сво­ра­чи­ва­ет­ся цит­рат­ная кровь по­сле до­бав­ле­ния каль­ция, фос­фо­ли­пи­дов и взве­си мел­ких час­тиц (по­след­ние не­об­хо­ди­мы для кон­такт­ной ак­ти­ва­ции фак­то­ра XII). Это тест на внут­рен­ний (и об­щий) путь. Нор­маль­ные зна­че­ния: 26—33 с.