6. Лабораторные методы выявления микобактерий туберкулеза Методы обследования на мбт

Лабораторная диагностика: Включает методы, входящие в диагностический минимум, и дополнительные методы исследования. Первые включают помимо физикального и рентгенологического исследования, следующие манипуляции. В случае заболевания микроскопия патологического материала (мокрота, отделяемое свищей, моча, промывные воды из бронхов) в мазках, окрашенных по Цилю—Нильсену, может выявить красные кислотоустойчивые палочки; в последние годы в практику внедрён метод Мурахаси-Йошиды (1957), позволяющий дифференцировать мёртвые и живые бактерии. Однако бактериоскопический метод наименее чувствителен, т.к. позволяет выявить возбудитель при содержании 100 000-500 000 микобактерий в 1 мл материала.

При незначительном содержании возбудителя можно использовать метод накопления по Уленгуту — материал смешивают с равным или двойным объёмом смеси NaCl и NaOH, энергично встряхивают и инкубируют 30 мин при температуре 21°С. Затем клеточный детрит и посторонние бактерии (в виде супернатанта), разрушившиеся под действием щёлочи, удаляют центрифугированием; осадок нейтрализуют 30% р-ром уксусной кислоты и готовят мазки, окрашиваемые по Цилю-Нильсену или Киньону.

Более эффективен метод флотации — в материал вносят р-р NaOH, дистиллят и ксилол (бензол) и энергично длительно встряхивают; образующаяся пена всплывает и захватывает микобактерий; её отсасывают и готовят мазки.

Определённую ценность в оценке тяжести процесса, эффективности лечения и прогноза заболевания имеет количественная оценка популяции микобактерий методом Гаффки- Стинкена (подсчёт бактерий на калиброванных стёклах в определённых полях зрения).

Наиболее результативный бактериоскопический метод — люминесцентная микроскопия, т.к. окраска флюорохромом (например, аурамин-родамином) позволяет выявлять даже незначительное количество микобактерий (окрашиваются в бело-жёлтый цвет), а также формы с изменёнными культуральными и тинкториальными свойствами.

Выделение возбудителя. Перед посевом исследуемый материал можно обработать по Уленгуту или Сумиоши (15-20% р-ром НС1 или H2SO4); исследуемые образцы центрифугируют, отмывают физиологическим р-ром и засевают, тщательно втирая на твёрдые питательные среды (обычно Лёвенштайна-Йенсена). Для простоты можно обработать образцы различными антибиотиками, подавляющими рост контаминирующей флоры.

Недостаток метода — длительность получения результата от 2 до 12 нед.

Достоинство — возможность получения чистой культуры, что позволяет её идентифицировать, оценить вирулентные свойства и определить чувствительность к лекарственным препаратам.

Разработаны ускоренные методы выделения возбудителя (например, Прайса); материал помещают на предметное стекло, обрабатывают H2SO4, отмывают физиологическим р-рами и вносят в питательную среду, дополненную цитратной кровью. Стекло вынимают через 3-4 сут и окрашивают по Цилю-Нильсену.

«Золотой стандарт» в диагностике туберкулёза — биологическая проба на морских свинках, заражённых подкожно или внутрибрюшинно 1 мл материала, полученного от больного.

У животных развивается генерализованная инфекция, приводящая к смерти через 1-2мес; однако заболевание можно распознать раньше постановкой проб с туберкулином — через 3-4 нед после заражения, а лимфадениты обнаруживают уже на 5- 10 сут. Пунктаты последних содержат значительное количество микобактерий.

Появление в последние годы резистентных (особенно изониазид-устойчивых) или изменённых микобактерий снизило чувствительность биологической пробы. Для её повышения применяют интратестикулярное заражение либо подавляют иммунитет организма животных введением глюкокортикоидов.

Серологические исследования. Предложено большое количество различных реакций, выявляющих Аг