Тема: Исследование крови

Техника взятия крови

У крупного рогатого скота кровь берут обычно из сосудов наружной поверхности шеи (яремная вена), из подхвостовой вены. Перед взятием крови из яремной вены в месте прокола шерсть вытирается, кожа дезинфицируется 70 спиртом. Чтобы вызвать набухание вены, её сдавливают в средине шеи (ниже места вкола иглы) большим пальцем левой руки или накладывают жгут. Простерилизованная кровопускательная игла вводится в вену под острым углом по направлению к голове и продвигают в полость сосуда. Если кровь не вытекает, то можно слегка продвинуть иглу вперед или назад.

В нашем случае мы брали кровь из подхвостовой вены с помощью моновета.

Окраска мазков крови

Для окраски мазков крови использовали метод Романовского-Гильзе. Фиксированные мазки заливали рабочим раствором краски Романовского (к 1мл нейтральной дистиллированной воды прибавляют 2-3 капли фабричного раствора краски Романовского). Окрашивали 20минут. Затем смыли дистиллированной водой и высушили на возухе.

Определение количества гемоглобина

1. В градуированную пробирку гемометра Сали до нижней метки наливают глазной пипеткой 0,1Н раствор соляной кислоты (HCl)

2. Карилляром набирают кровь немного выше метки 20мкм (0,02мл)

3. Ватой уравнивают столбик крови до метки и очищают капилляр

4. Осторожно выдувают кровь на дно пробирки в раствор соляной кислоты (HCl) без образования пузырей воздуха

5. Промывают верхним слоем HCl 2-3 раза пипетку для удаления остатков крови

6. Осторожным встряхиванием пробирки жидкость перемешивают

7. Перемещают пробирку в среднее гнездо штатива гемометра на 5 минут

8. Через 5 минут добавляют дистиллированную воду, перемешивают стеклянной палочкой до тех пор, пока окраска жидкост в пробирке не сравниться с цветом стандарт.пробирок

9. По нижнему миниску деления шкалы определяют количество гемоглобина в граммах на 100мл крови:

____________________________________________________________________________________________________________________________________

Определение количества эритроцитов

1. В пробирку Флоринского наливают 4мл 3%-ного раствора хлорида натрия (NaCl)

2. Капиллярной пипеткой от гемометра Сали набирают 20мкм (0,02мл) крови

3. Тщательно протирают наружную поверхность капилляра ватой и уравнивают столбик крови по метке

4. Осторожно выдувают кровь на дно пробирки в раствор хлорида натрия (NaCl) без образования пузырей воздуха

5. 2-3 раза промывают этой же жидкостью капилляр

6. Пробирку закрывают резиновой пробкой и осторожно перемешивают. Получается разведение крови 1:200.

7. После концом стеклянной палочкой отбирают из пробирки каплю крови и заполняют камеру Горяева та, чтобы вся поверхность, на которой нанесена сетка, была заполнена жидкостью. После заполнения камеру оставляют на 1-2минуты в покое до оседания форменных элементов.

8. Выждав нужное время, подсчитывают эритроциты под микроскопом. Считают число Er в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких, расположенных по диагонали, начиная с левого большого квадрата.

9. При подсчете в 80 маленьких квадратах и при разбавлении крови в 200 раз используют формулу X = A 10000, где X – количество эритроцитов в 1мл крови; A – количество эритроцитов, подсчитанных в 80 маленьких квадратах. Ошибка при подсчете достигает 10%.

Х = ____________________________________________________________

Определение цветного показателя

Цветной показатель(ЦП) отражает содержание Hb в Er

; где

Hb(Х) и Er(Х) – показатели исследуемого животного,

Hb(N) и Er(N) – среднее нормальное количество Hb и Er у здоровых животных

ЦП = __________________________________________________________________

Подсчет лейкоцитов

1. В пробирку Флоринского набирают 0,4мл жидкости Тюрка

2. Капиллярной пипеткой от гемометра Сали набирают 0,02мл крови

3. Тщательно протирают наружную поверхность капилляра ватой и уравнивают столбик крови точно по метке, осторожно выдувая в пробирку с жидкостью Тюрка, 2-3 раза промывая жидкостью капилляр

4. Пробирку закрывают резиновой пробкой и тщательно перемешивают. Получают разведение в 20раз.

5. Пипеткой берут каплю крови и заполняют счетную камеру.

6. Через 1-2 минуты после оседания лейкоцитов на дно камеры, подсчитывают их количество под микроскопом в 100 больших квадратах сетки Горяева.

При подсчете используют формулу: X = A 50, где X – количество лейкоцитов в 1мл крови;

A – количество лейкоцитов, подсчитанных в 100 больших квадратах.

Х = __________________________________________________________________

Техника выведения лейкограммы

Лейкограмма – это процентное отношение отдельных видов лейкоцитов. Лейкограмму выводят по окрашены мазкам под микроскопом с иммерсией. Используют объектив 90, окуляр 10(или 7) и иммерсионное масло. При микроскопировании диафрагму полностью открывают, осветитель поднимают. Используют метод Филиппченко(трехпольный). Подсчитывают лейкоциты в 3-х участках, расположенных поперек мазка. В начале и в конце мазка подсчитывают по 35кл, в середине 30кл. Для записи подсчитанных клеток используют 11клавишный счетчик.