
- •1. Основные приборы и оборудование для практических работ по молекулярной биологии
- •Практическая работа № 2 анализ днк методом электрофореза в агарозном геле
- •Практическая работе № 3 выделение и фракционирование наулеиновых кислот эукариот классическими методами
- •Занятие № 1 экстракция днк из животных организмов с ддс-Na
- •2. Состав и приготовление экстрагирующего буфера ов
- •Занятие № 2 став-экстракция днк из растений
- •Занятие № 3 выделение тотальной рнк по шерреру
- •Занятие № 4 фракционирование и определение соотношений _. Рибосомальных и транспортных рнк методом электрофореза в полиакриламидном геле
- •18 А фракции рнк, %
- •Занятие № 5 определение константы седиментации рнк методом электрофореза в полиакриламидном геле
- •Практическая работа № 4 выделение нуклеиновых кислот с использованием сорбентов
- •Занятие № 1 выделение днк с использованием набора d1атом™ dna prep 100
- •Занятие № 2
- •Практическая работа № 5 выделение плазмидной днк из рекомбинантных бактериальных клеток
- •5. Раствор I для выделения плазмидной днк
- •Практическая работа № 6 определение концентрации и качества препаратов нуклеиновых кислот методом -спектрофотометрии
- •Практическая работа №7 постановка полимеразной цепной реакции
- •358 Промотор вируса мозаики цветной капусты
- •Практическая работа № 9 реакция обратной транскрипции
- •Практическая работа №10 рестрикционный анализ днк
- •7.Условия рестрикции
- •Практическая работа №11 днк—днк-гибридизация
- •8. Значения максимумов поглощения (абсорбции) и испускания света (эмиссии) некоторых флуорофоров
- •Практическая работа №12 клонирование фрагментов днк в клетках
- •Практическая работа № 13 определение первичной структуры днк
- •Практическая работа № 14 информационный поиск с использованием баз данных интернета
- •Практическая работа № 15 экстракция белков из животных и растительных тканей
- •Практическая работа № 16 осаждение белков сульфатом аммония
- •9. Последовательность фракционирования белков сульфатом аммония
- •Практическая работа № 17 диализ белков
- •Практическая работа № 18 количественное определение белка по методу лоури
- •Практическая работа № 19 количественное определение белка по методу брэдфорд
Практическая работа № 1
ОЗНАКОМЛЕНИЕ С ОСНОВНЫМИ ПРИБОРАМИ
И ОБОРУДОВАНИЕМ ДЛЯ ПРАКТИКУМА ПО
МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ
Стремительное развитие современной физико-химической биологии тесно связано с усовершенствованием таких методов, как центрифугирование, электрофорез, хроматография, полиме- разная цепная реакция (ПЦР), а также методов генной инжене- рии. В связи с этим для выполнения молекулярно-биологических работ на современном уровне требуется соответствующее прибор- ное оснащение. Основными требованиями к оборудованию явля- ются надежность, простота в эксплуатации и эффективность при достижении искомого результата.
Цель работы. Ознакомиться с приборами и оборудованием для практикума по молекулярной биологии и сформировать первона- чальные навыки обращения с ними.
Оборудование и материалы. Основные приборы и оборудование, необходимые для выполнения практических работ по молекулярной биологии, представлены в таблице 1.
Задания. 1. Используя данные таблицы 1, сделать записи в ра- бочем журнале о целевом назначении каждого прибора, особенно- стях работы с ним и технике безопасности. 2. С помощью автома- тических дозаторов и наконечников отобрать следующие объемы воды: 1, 3, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 400, 600, 1000, 3000 и 5000 мкл.
1. Основные приборы и оборудование для практических работ по молекулярной биологии
Название |
Предназна ченеие |
Краткая характеристика |
Особенности работы и безопасности |
Термометр (ДНК-амплиикатор,программируемый термостат) AMPLY4 |
Предназначен для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) и других термициклических процессов |
Прибор с суховоздушным способом охлаждения и строенным микрокомпьютером, может программироваться как назависимо. Так и от внешнего персонального компьютера. Программное обеспечения позволяет контролировать состояние прибора, наблюдать и регистрировать процесс амплифиикации в реальном времени в графическом и цифровом отображении, сохранить и редиктировать рабочие программы управления термоциклическими процессами |
В процессе работы прибора не перекрывать вентиляционное отверствие и не открывать крышку термоблока (во избежание ожогов) |
Термостат твердотельный «ТЕРМО 24-15» |
Предназначен для термостатирования микропробирок |
Прибор относится к твердотельным термостатам, вмещает 24 пробирки объемом 1,5 мл и 15 пробирок объемом 0,5мл, обеспечивает термостатирование в расширенном диапазоне температур:от комнатной до 1200С. Особенности конструкции гарантируют быстрый выход на заданную температуру и высокую точность ее поддержания. |
Не дотрагиваться до термоблока (во избежание ожогов) |
Термостат твердотельный «ТЕРМО 4-99» с функцией охлаждения |
Служит для термостатирования микропробирок |
Прибор представляет собой термостат, работающий в диапазоне температур от 4 до 990С, вмешает 13 пробирок объемом 0,5 мл и 24 пробирки объемом 1,5мл, позволяет выбирать и поддерживать температур с высокой точностью, успешно заменет ледяную баню |
В процессе работы прибора не перекрывать вентиляционное отверствие |
Прибор для горизонтального электрофореза ЕС-12 |
Предназначен для разделения молекул нуклеиновых кислот в агарозном геле в постоянном электрическом поле |
В комплект входят: кювета для заливки геля; аппликаторы (гребенки) для формирования лунок в геле;камера для электрофореза с проводами и клеммаи для подключения к источнику напряжения |
Во избежание деформации кюветы для заливки геля не наливать в нее горячий расплав агарозы. При проведении электрофореза не открывать крышку безпредварительного отключения напряжения. |
Источник постоянного тока НИП-300 |
Предназначен для подачи напряжения к прибору для электрофореза |
Прибор регулируется в режиме стабилизации напряжения (до 300 В и 250 мА) независимо от колебания напряжения в сети и изменения сопротивления нагрузки. Две пары выходных гнезд для безопасности утоплены в корпус и позволяют подключать одновременно две камеры для горизонтального электрофореза |
Не включать без нагрузки |
Трансиллюминатор УВТ-1 |
Предназначен для детекции фрагментов нуклеиновых кислот в ультрафиолетовой области спектра, а белковых фракций- в видимой |
Конструкция прибора обеспечивает равномерную освещенность, а чрезвычайно малый прогрев светофильтра позволяет достаточно долго рассматривать гель, не опасаясь «расплывания» зон. Прибор имеет встроенный таймер, комплектуется кабинетом для наблюдения гелей (так называемая темная комната) с защитным экраном. |
После просмотра геля светофильтр трансиллюминатора необходимо протирать мягкой салфеткой |
Гель-документирующая видеосистемаVITran-Photo |
Предназначена для фотографирования гелей,их последующей обработки и записи всех результатов в общую базу данных |
Система ориентирована на обработку результатов ПЦР-анализа (электрофореграмм) |
При работе с видеосистемой необходимо следить за правильностью ее подключения, не допускать попадания влаги на электро-контакты и объектив и их загрязнения |
Микроцентрифуга-вортекс ТЭТА-2 |
Предназначена для встряхивания, перемешивания, а также осаждения проб |
Прибор обладает плавной регулировкой скорости вращения ротора до 2000 g, имеет два сменных ротора на 12 мест для микропробирок 0,5 мл и 1,5 мл и спин-модуль (встряхиватель) |
Включать прибор только при уравновешенном роторе, нельзя прикасаться к ротору во время центрифугирования |
Высокоскоростная микроцентрифуга |
Предназначена для осаждения проб |
Прибор позволяет достигать скорости центрифугирования 10000g, что достаточно практически для всех стадий подготовки проб и выделения нуклеиновых кмслот при проваедении ПЦР-диагностики |
Включать прибор толькол при уравновешенном роторе и закрытой крышке центрифуги |
Одноканальные автоматические дозаторы переменного объема серий КЛАССИК или КОЛОР до 10, 50,200,1000,5000 мкл |
Предназначены для отбора необходимых объемов растворов |
Дозаторы позволяют с высокой точностью отбирать объемы используемых в работе реагентов, снабжены механизмом сбрасывания отработанного наконечника, что позволяет быстро выполнять необходимые операции |
Использовать только с соответствии с указанным на корпусе дозатора диапазоном объемов и предназначеными для этого наконечниками |