Реакція імунофлюоресценції (ріф)

Реакція імунофлюоресценції - РІФ (метод Кунса). Розрізняють три різновиди методу прямої, непрямої, з комплементом. Реакція Кунса є методом експрес-діагностики для виявлення антигенів мікробів або визначення антитіл.

Прямий метод РІФ заснований на тому, що антигени тканин чи мікроби, оброблені імунними сироватками з антитілами, міченими флюорохромами, здатні світитися в УФ-променях люмінесцентного мікроскопа. Бактерії в мазку, оброблені такою сироваткою, світяться по периферії клітини у вигляді кайми зеленого кольору.

Непрямий метод РІФ полягає у виявленні комплексу антиген - антитіло за допомогою анти-глобулінової (проти антитіла) сироватки, міченої флюорохромами. Для цього мазки з суспензії мікробів обробляють антитілами антимікробної кролячій діагностичної сироватки. Потім антитіла, що не зв’язались з антигенами мікробів, відмивають, а ті що залишилися на мікробах антитіла виявляють, обробляючи мазок антиглобуліновою (антикролячою) сироваткою, міченою флюорохромами. В результаті утворюється комплекс мікроб + антимікробні кролячі антитіла + антикролячі антитіла, мічені флюорохромами. Цей комплекс спостерігають в люмінесцентному мікроскопі, як і при прямому методі.

Пряма РІФ	Непряма РІФ

Радіоімунний метод, або аналіз (ріа)

Радіоімунний метод, або аналіз (РІА) - високочутливий метод, заснований на реакції антиген - антитіло із застосуванням антигенів або антитіл, мічених радіонуклідом (125J, 14C, 3Н, 51Сr та ін.) Після їх взаємодії відокремлюють радіоактивний імунний комплекс , що утворився і визначають його радіоактивність у відповідному лічильнику (бета або гамма випромінювання). Інтенсивність випромінювання прямо пропорційна кількості молекул антигену і антитіл, що зв'язалися.

Імуноферментний аналіз (іфа)

Іммуноферментний аналіз, або метод (ІФА) - виявлення антигенів за допомогою відповідних їм антитіл, кон'югованих з ферментом-міткою (лужною фосфатазою). Після з'єднання антигену з міченою ферментом імунною сироваткою в суміш додають субстрат / хромоген. Субстрат розщеплюється ферментом і змінюється колір продукту реакції - інтенсивність забарвлення прямо пропорційна кількості зв'язавшихся молекул антигену і антитіл. ІФА застосовують для діагностики вірусних, бактеріальних і паразитарних хвороб, зокрема для діагностики сальмонельозу, мікоплазмозу та ін, а також визначення гормонів, ферментів, лікарських препаратів та інших біологічно активних речовин, що містяться в досліджуваному матеріалі в мінорних концентраціях - 10¹⁰ - 10¹² г / л.

Твердофазний ІФА - варіант тес-ту, коли один з компонентів імунної реакції (антиген або антитіло) сорбований на твердому носії, напр., в лунках планшеток з полістиролу. Компоненти виявляють додаванням мічених антитіл або антигенів. При позитивному результаті змінюється колір хромогену. Кожного разу після додавання чергового компоненту з лунок видаляють не зв’язані реагенти шляхом промивання. При визначенні антитіл в лунки планшеток з сорбованим антигеном послідовно додають сироватку крові хворого, антиглобулінову сироватку, мічену ферментом і субстрат / хромоген для ферменту. При визначенні антигену в лунки з сорбованими антитілами вносять антиген (напр., сироватку крові з шуканим антигеном), додають діагностичну сироватку проти нього і вторинні антитіла (проти діагностичної сироватки), мічені ферментом, а потім субстрат / хромоген для ферменту.

I. Определение антител в сыворотке больного (в лунках планшеток с сорбированным антигеном ) II. Определение антигена в сыворотке больного (в лунках планшеток с сорбированными диагностическими антителами)

Конкурентний ІФА для визначення антигенів: невідомий антиген (1) і мічений ферментом антиген (2) конкурують один з одним за антитіла (3), сорбовані на твердій фазі.