Оплодотворение in vitro

Непосредственно ЭКО проводится врачами-эмбриологами в условиях эмбриологической лаборатории. Собственно оплодотворение проводят одним из двух способов:

• Инсеминация in vitro;

• Интрацитоплазматическая инъекция сперматозоидов (ICSI, ИКСИ).

При первом, более простом способе к яйцеклеткам, которые находятся в питательной среде, добавляют суспензию сперматозоидов. Сперматозоиды добавляют из расчёта 100—200 тыс. на одну яйцеклетку. В течение 2—3 часов один из сперматозоидов проникает в яйцеклетку и тем самым оплодотворяет её. При втором способе (ИКСИ) сперматозоид вводят в яйцеклетку «вручную» с помощью микрохирургических инструментов. ИКСИ используют при очень плохом качестве спермы, когда оплодотворение не может быть получено даже в чашке.

После проникновения сперматозоида яйцеклетка считается эмбрионом. Вероятность успешного оплодотворения 60—70 % . Эмбрионы содержат в искусственных условиях от 2 до 6 дней. Для этого используют так называемые СО2-инкубаторы — шкафы, в которых поддерживается температура 37 °C и содержание углекислого газа в атмосфере 5—6 %. Эмбрионы (а до этого яйцеклетки) в инкубаторах непосредственно содержат в пластиковых чашках с культуральной средой. За время инкубации эмбрион человека практически не увеличивается в размере, но количество клеток, его составляющих, возрастает многократно.

Перенос эмбриона в матку

Перенос эмбриона в матку осуществляют через 2—5 дней после оплодотворения яйцеклетки. Процедура не требует анестезии (обезболивания) и выполняется на гинекологическом кресле в течение нескольких минут. Эмбрион переносят в матку, проводя через шейку матки специальный эластичный катетер. Согласно приказу N 67 Минздрава РФ от 2003 в полость матки не рекомендуется переносить более 4 эмбрионов, чтобы избежать многоплодной беременности. Современная практика ЭКО в России такова, что обычно осуществляют перенос 2 эмбрионов.

Генетический скринигн

Несмотря на довольно обнадеживающие результаты применения ИКСИ при лечении бесплодия, обусловленного мужским фактором, необходимо подчеркнуть особое значение генетического скрининга инфертильных (бесплодный) пациентов, нуждающихся в применении этого метода. Целым рядом исследований доказано, что мужчины с тяжелыми формами даже при нормальном кариотипе составляют группу высокого риска как носители различных генетических дефектов в половых клетках, которые могут передаваться потомству мужского пола, обусловливая в половозрелом возрасте аналогичную форму субфертильности или даже инфертильности у сыновей. Более того, сама процедура выполнения ИКСИ, включающая аспирацию ооплазмы, несет потенциальный генетический риск в связи с возможным нарушением мейотического веретена, что может обусловливать более высокую частоту пороков в эмбрионах после ICSI , чем после классического оплодотворения in vitro . Принимая во внимание тот факт, что частота рождения детей с хромосомными аномалиями у инфертильных мужчин в 10 раз выше по сравнению с общей популяцией, где этот показатель составляет 0,6%, в случае наступления беременности после выполнения ИКСИ обязательна пренатальная диагностика.

Во время беременности небольшое количество ДНК ребенка (фетальное ДНК) циркулирует в кровотоке матери и несет генетическую информацию о ребенке и его хромосомах. Технология неивазивного пренатального теста заключается в выделении из крови беременной женщины ДНК плода и ее анализа с помощью новейшей технологии секвестирования, что позволяет определить ряд тяжелых и наиболее распространенных хромосомных заболеваний плода, связанных с нарушением числа хромосом: синдром Дауна (трисомия 21 хромосомы), синдром Эдвардса (трисомия 18 хромосомы), синдром Патау (трисомия 13 хромосомы), изменение числа половых хромосом. Перечисленные синдромы составляют до 96% от всех хромосомных аномалий плода.

Инвазивный тест ДНК-диагностики. С помощью этого теста также можно определить пол ребёнка, но это запрещено в нашей стране. Такой тест необходимо делать при:

• Выявлении ультразвуковых маркеров хромосомных патологий;

• Повышенном риске в результате биохимического скрининга;

• Диагностированной хромосомной патологии в предыдущие беременности;

• Возрасте беременной женщины более 35 лет;

• При угрозе прерывания беременности в ранние сроки и невынашивании;

Данный тест не может быть выполнен при ЭКО с использованием донорской яйцеклетки и суррогатном материнстве. Срок выполнения анализа - 2-3 недели. При получении результата неинвазивного пренатального теста с высоким риском хромосомной патологии плода необходимо проведение инвазивной пренатальной диагностики. При методе ИКСИ технология данной диагностики заключается в извлечении одного бластомера из эмбриона и методом флюоресцентной окраски под микроскопом выполнить исследование кариотипа эмбриона и в целом хромосомного набора.