Реакция с формальдегидом

1. В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.

2. В обе пробирки добавляют по 2 капли раствора формалина.

3. Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H₂SO_{4 (конц.)}, следя, за тем, чтобы жидкости не перемешивались.

4. Наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.

Реакция Адамкевича

1. В первую пробирку вносят 5 капель 0.01% раствора триптофана, во вторую – 5 капель 1% раствора белка.

2. В обе пробирки добавляют по 2 мл концентрированной CH₃COOH.

3. В случае выпадения осадка пробирки осторожно нагревают до его растворения, после чего охлаждают.

4. Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H₂SO_{4 (конц.)}, следя, за тем, чтобы жидкости не перемешивалась.

5. Через некоторое время наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.

Реакция Гопкинса-Коле

1. В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.

2. В обе пробирки добавляют по 1 мл глиоксалевой кислоты и по 10 капель 0.04 М раствора сульфата меди (II).

3. Далее в обе пробирки приливают небольшими порциями (по несколько капель) 2 мл концентрированной серной кислоты, охлаждая пробирку каждый раз в ванночке со льдом.

4. Оставляют на 10 мин при комнатной температуре и ставят на 5 мин в кипящую водяную баню.

5. Отмечают появление окраски.

Реакция с 5-(оксиметил)фурфуролом (реакция Шульце-Распайля)

1. В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.

2. В обе пробирки добавляют по 4 капли сахарозы.

3. Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H₂SO_{4 (конц.)}, следя, чтобы жидкости не перемешивалась.

4. Через некоторое время наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.

Качественная реакция на пролин (нингидриновая реакция)

1. В пробирку к 3 мл 0.01% раствора пролина добавляют 5 капель 1% раствора нингидрина в 95% ацетоне.

2. Содержимое пробирки перемешивают и нагревают на водяной бане при 70°С в течение 5 мин.

3. Отмечают появление окраски и ее отличие от типичной окраски нингидриновой реакции.

Качественная реакция на тирозин (реакция Миллона)

1. В пробирку к нескольким кристаллам тирозина добавляют 5 мл 2.5% раствора серной кислоты и перемешивают до полного растворения.

2. Приливают 1 мл реактива Миллона, встряхивают и оставляют при комнатной температуре (для ускорения реакции раствор можно слегка прогреть).

3. Отмечают появление окраски.

Качественная реакция на аргинин (реакция Сакагучи)

1. В пробирку наливают 2 мл 0.01% раствора аргинина, добавляют 2 мл 10% раствора NaOH и 5 капель 0.2% спиртового раствора -нафтола.

2. Содержимое пробирки хорошо перемешивают, приливают 0.5 мл раствора гипобромита (NaBrO) и вновь перемешивают.

3. Немедленно добавляют 1 мл 40% раствора мочевины (для стабилизации окраски).

4. Отмечают появление окраски.

Качественная ракция на гистидин (реакция Паули)

1. К 1 мл 1% раствора сульфаниловой кислоты в 5% растворе соляной кислоты добавляют 2 мл 0.5% раствора нитрита калия (натрия).

2. Пробирку сильно встряхивают и немедленно добавляют сначала 2 мл 0.01% раствора гистидина

3. Затем после перемешивания содержимого пробирки приливают 6 мл 10% раствора карбоната натрия.

4. Отмечают появление окраски.

 Качественная реакция на метионин (по Мак-Карти и Салливану)

1. К 5 мл 0.02% раствора метионина прибавляют (при помешивании) сначала 1 мл 14.3М раствора NaOH, а затем 0.3 мл 10% раствора нитропруссида Na.

2. Смесь нагревают в течение 10 мин на водяной бане при температуре 35-40⁰С.

3. Затем смесь охлаждают 2 мин в ледяной воде и добавляют при помешивании 5 мл смеси соляной и фосфорной кислот.

4. Смесь взбалтывают 1 мин и охлаждают водой комнатной температуры в течение 10 мин.

5. Отмечают появление окраски.

Качественная ракция на глицин (реакция Циммермана)

1. К 2 мл 0.01% раствора глицина (рН 8.0) приливают 0.5 мл водного раствора о-фталевого диальдегида.

2. Отмечают появление окраски и выпадение осадка.

Задание III

Освоение методов выявления пептидных связей в белках и пептидах

Биуретовая реакция (обнаружение в молекулах пептидов и белков пептидных связей)

1. В одну пробирку наливают 2 мл 1% раствора белка, в другую 2 мл 0.01% раствора глицина, а в третью – столько же дистиллированной воды,

2. Затем в каждую из них вносят по 2 мл 10% раствора NaOH и хорошо перемешивают.

3. Добавляют по 3 капли 2% раствора CuSO₄. Пробирки встряхивают.

4. Отмечают появление окраски, объясняют различия окрашивания.

Оформление работы

К занятию:

1. Кратко законспектировать теоретический материал по лабораторной

работе.

Во время занятия:

2. Описать этапы лабораторной работы.

3. Зарисовать результаты хроматографического разделения аминокислот.

4. Описать результаты выполнения качественных реакций на аминокислоты.

5. Сделать выводы.