Министерство образования Республики Беларусь

Учреждение образования «Международный государственный экологический университет

имени А. Д. Сахарова»

Факультет экологической медицины

Кафедра биохимии и биофизики

С.Б. Бокуть, Л.М. Шейко, В.Э. Сяхович,

Н.В. Богданова, Е.А. Докучаева

Практикум по

общей и экологической биохимии

Часть I

«Аминокислоты. Белки.

Выделение и количественное

определение белков»

Минск

2011

Авторы:

зав. кафедрой биохимии и биофизики, канд. биол. наук Бокуть С.Б.,

доцент кафедры биохимии и биофизики Шейко Л.М.,

старший преподаватель кафедры биохимии и биофизики Сяхович В.Э.,

преподаватель кафедры биохимии и биофизики Богданова Н.В.,

преподаватель кафедры биохимии и биофизики Докучаева Е.А.

Рекомендовано научно-методическим советом Учреждения образования «Международный государственный экологический университет имени А.Д.Сахарова», протокол № от 2011 г.

Практикум по общей и экологической биохимии. Часть I: «Аминокис-лоты. Белки. Выделение и количественное определение белков» / Бокуть С.Б. и др. – Мн., 2011 – 79 с.

Практикум содержит учебно-методические материалы для проведения лабораторных работ по курсу "Общая и экологическая биохимия" со студентами 2-го и 3-го курса. Для каждой лабораторной работы приводятся основы теории по конкретной теме, вопросы для подготовки к занятию, список рекомендуемой литературы, перечень заданий к занятию, описание используемых в лабораторной работе приборов, материалов и реактивов. Включены материалы, описывающие принципы методов качественного и количественного определения аминокислот, пептидов и белков. Приложение содержит информацию о строении и номенклатуре аминокислот.

Все лабораторные занятия написаны авторами настоящего издания совместно.

Соответствует учебной программе курса «Общая и экологическая биохимия» для студентов МГЭУ имени А.Д. Сахарова.

Практикум рекомендуется для студентов ВУЗов, обучающихся по специальностям медико-биологического профиля.

 С.Б. Бокуть, Л.М. Шейко, В.Э. Сяхович, Н.В. Богданова, Е.А. Докучаева, 2011

 Учреждение образования «Международный государственный экологический университет им. А.Д. Сахарова», 2011

Содержание

Аминокислоты. Белки. Выделение и количественное определение белков
Лабораторная работа №1 Аминокислоты. Методы обнаружения и идентификации аминокислот. Качественные реакции на аминокислоты, пептиды и белки	4
Лабораторная работа №2 Простые белки. Физико-химические свойства белков	32
Лабораторная работа №3 Сложные белки. Методы выделения белков в гомогенном состоянии. Количественное определение белка. Определение белка неизвестной концентрации	57
Приложение Строение и номенклатура протеиногенных аминокислот	75

Лабораторная работа № 1

Тема:	Аминокислоты. Методы обнаружения и идентификации аминокислот. Качественные реакции на аминокислоты, пептиды и белки
Цель работы:	Изучение методов идентификации аминокислот. Освоение методов выявления белков, пептидов и индивиду-альных аминокислот в растворах по качественным реакциям

Оборудование и материалы:

• Термостат

• Камера хроматографическая

• Бумага хроматографическая

• Пипетки стеклянные на 1мл и 5 мл

• Микропипетки автоматические

• Цилиндры мерные на 250мл и 100мл

• Колба емкостью 250мл

• Пробирки

• Штативы для пробирок

• Бумага фильтровальная

• Индикаторная бумага универсальная

• Сито нейлоновое

• Ванночка со льдом

Реактивы:

• Яичный белок

• Гидроксид натрия (NaOH), 10% раствор, 14.3 М раствор

• Сульфат меди (CuSO₄), 2% раствор, 0.04М раствор

• Ацетат свинца (Pb(CH₃COO)₂), раствор

• Нитрит калия (натрия) (KNO₂, NaNO₂), 0.5% раствор

• Карбонат натрия (Na₂CO₃), 10% раствор

• Нитропруссид натрия (Na₂[Fe(CN)₅NO]), 10% раствор

• Нингидрин, 1% раствор

• Реактив Миллона

• -нафтол, 0.2% спиртовой раствор

• Сульфониловая кислота, 1% раствор в 5% соляной кислоте

Мочевина, 40% раствор	-Аланин, 0.01% раствор
о-фталевый диальдегид, раствор	Аргинин
Желатин, 1% раствор	Аргинин, 3% раствор, 0.01%
Фруктоза, 5% раствор	раствор
Глиоксалевая кислота	Аспарагиновая кислота
Формалин, раствор	Гистидин, 0.01% раствор
Сахароза, 5% раствор	Глицин
Уксусная кислота, ледяная	Глицин, 0.01% раствор
Борная кислота, 2.5% раствор	Глутаминовая кислота
Азотная кислота (HNO3), конц.	Метионин, 0.02% раствор
Серная кислота (H2SO4), конц.	Пролин, 0.01% раствор
Соляная кислота (HCl), конц.	Тирозин
Фосфорная кислота (H3PO4),	Триптофан, 0.01% раствор
конц.	Цистеин, 0.02% раствор
н-бутанол	Смесь аминокислот (для хромато-
Вода дистиллированная	графии)

Теоретическая Часть