Обладнання, прилади, матеріали

Конічні колби|баклаги|, чашки Петрі|, піпетки, пробірки, автоклав, дистильована вода|водний|.

Порядок і рекомендації щодо виконання роботи

Зважте 1 грам зразка ґрунту. Додайте до 10 мл стерильної дистильованої води. Приготуйте різні розведення з дистильованою водою: щоб одержати ізольовані колонії, ґрунт розводять у стерильній воді, користуючись постійним коефіцієнтом розведення 10. Таким чином, одержують серію розведень, у якій концентрації клітин утворюють геометричну прогресію. Розведення роблять у такий спосіб: 1 г ґрунту вносять в 10 мл стерильної води в пробірці й розмішують протягом 3 хв. Отримана суспензія являє собою розведення 1:10 (1 розведення, пробірка № 1). Після відстоювання ґрунтової суспензії протягом 1 хв. стерильною піпеткою беруть 1 мл цієї ґрунтової суспензії і вносять в 9 мл стерильної води в пробірку № 2, одержуючи при цьому розведення вихідного субстрату 1:100 (2 розведення). Після розмішування (барботації) беруть 1 мл ґрунтової суспензії із пробірки № 2 і вносять у пробірку № 3. Далі за аналогією готують необхідну кількість розведень. Піпетку міняють при кожній новій концентрації ґрунтової суспензії.

Посів у чашки. Висівати суспензію можна поверхневим і глибинним способами. Перед посівом суспензії поверхневим способом у стерильні чашки Петрі розливають розплавлене агаризоване середовище (по 20 мл). Чашки залишають на горизонтальній поверхні поки середовище не застигне. Далі на поверхню середовища стерильною піпеткою наносять 1 мл розведення 10^–3. Цей об’єм розподіляють стерильним скляним шпателем по поверхні поживного середовища .

Засіяні чашки Петрі поміщають у термостат кришками донизу.

При глибинному способі посіву 1 мл розведеної суспензії вносять стерильною піпеткою в стерильну чашку Петрі. Потім, обережно відкривши під кутом кришку, заливають дно чашки 20 мл розплавленого й охолодженого до 45 ⁰С агаризованого середовища. Кришку чашки закривають і ретельно перемішують поживне середовище із посівним матеріалом, після чого чашки залишають на горизонтальній поверхні до застигання агару. Засіяні чашки Петрі поміщають у термостат при температурі 37ºC кришками донизу протягом 24 днів.

Аналіз одержаних результатів

На наступному занятті проаналізуйте ріст мікроорганізмів на чашках Петрі. В результаті досліду можна отримати поодинокі колонії із|із| зонами|зональний||стримування|, що мають антимікробну|антибактеріальну| дію.

Промікроскопуйте мікроорганізми за допомогою клейкої стрічки:

1. За допомогою пінцету та ножиць відріжте невеликий «квадрат» скотчу;

2. Покладіть цей скотч клейкою стороною на повітряний міцелій;

3. Перенесіть препарат на предметне скло клейкою стороною догори;

4. Додайте краплю спирту;

5. Після того, як спирт висохне, додайте барвник «лактофуксин». Витримайте 3 – 5 хв;

6. Перенесіть препарат (перевернувши його) на інше предметне скло;

7. Промікроскопуйте Х40;

8. Замалюйте.

Зробіть висновки та оформіть протокол лабораторної роботи.

Контрольні запитання і завдання

1. Охарактеризуйте екологічну роль антибіотиків.

2. Які природні умови індукують синтез антибіотиків мікроорганізмами? Як ці умови можливо відтворити в лабораторних та промислових умовах?

3. Назвіть родові назви мікроорганізмів–продуцентів антибіотиків.

4. Охарактеризуйте методи створення штамів–гіперпродуцентів антибіотиків.

5. Наведіть різні класифікації антибіотиків.

Література: [].

Лабораторна робота № 3.4