2. Генотипическая изменчивость. Трансформационная изменчивость, значение для диагностики и профилактики инфекционных заболеваний. Роль экологии.

Генотипическая изменчивость. Изменениям подвержен так¬же и генотип. Генотипическая изменчивость играет большую роль в эволюции организмов: если бы клетки не обладали способностью к изменению генотипа, то любое неблагоприят¬ное изменение условий среды привело бы к вымиранию вида.

В основе генотипической изменчивости лежат мутации и рекомбинации. Они происходят в структуре ДНК — генетиче¬ском аппарате клетки — и проявляются в стабильности изме¬нений каких-либо свойств.

Мутации. Под мутацией (от mutatio — изменение) пони¬мают внезапные, скачкообразные изменения наследственных свойств. Основу этого явления составляют качественные или количественные изменения последовательности нуклеотидов в ДНК, которые могут возникать при жизнедеятельности бак¬терий под влиянием эндогенных факторов или при действии химических и физических мутагенов.

3. Реакция преципитации, сущность, техника, варианты, применение. Приготовление преципитиногенов.

Реакция преципитации (РП) - это формирова¬ние и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количес¬твах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.

РП ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое рас¬пространение получили разновидности РП в полужидком геле агара или агарозы: двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.

Механизм. Проводится с прозрачными коллоид¬ными растворимыми антигенами, экстрагированными из патоло¬гического материала, объектов внешней среды или чистых культур бактерий. В реакции используют прозрачные диагности¬ческие преципитирующие сыворотки с высокими титрами анти¬тел. За титр преципитирующей сыворотки принимают то наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммун¬ной сывороткой вызывает образование видимого преципитата — помутнение.

Реакция кольцепреципитации ставится в узких пробирках (диаметр 0,5 см), в которые вносят по 0,2—0,3 мл преципити-рующей сыворотки. Затем пастеровской пипеткой медленно наслаивают 0,1—0,2 мл раствора антигена. Пробирки осторожно переводят в'вертикальное положение. Учет реакции производят через 1—2 мин. В случае положительной реакции на границе между сывороткой и исследуемым антигеном появляется пре¬ципитат в виде белого кольца. В контрольных пробирках преци¬питат не образуется.

4. Крышка на банке с заготовленными впрок грибами вздулась. Наметить план обнаружения возбудителя порчи продукта и его судьбу.

Была нарушена стерилизация (пастеризация) продукта. Чаще всего это клостридиум ботулинум.

Экзаменационный билет № _51

1. Герпесвирусы. Вирус Эпштейн-Барр и цитомегаловирус.

Вирус Эпстайна-Барр выделен английским вирусологом М. Эпстайном и канадским вирусологом И.Барр из биоптатов пациентов с лимфомами Бёркитта (1964). Инфицирование регистрируют повсеместно; специфические AT выявляют у 90% лиц старше 40 лет.

Резервуар инфекции вируса Эпстайн-Барра — человек. Основной путь передачи вируса Эпстайн-Барра — воздушно-капельный, реже трансмиссивный или половой. В раннем возрасте инфекцию сопровождают стёртые проявления, либо она бывает вообще бессимптомной.

Первичное инфицирование вирусом Эпстайна-Барра в подростковом или более старшем возрасте может вызвать заболевание, известное как инфекционный мононуклеоз. Реже наблюдают реактивированную инфекцию, обусловленную хронической персистенцией вируса Эпстайна-Барр.

Клинические проявления вируса Эпстайн-Барра вариабельные, чаще наблюдают синдром хронического мононуклеоза. Хроническая активная инфекция вирусом Эпстайна-Барр, проявляющаяся прогрессирующими лимфопролиферативными заболеваниями или лимфомами ЦНС, обычна для пациентов с иммунодефицитными состояниями.

Развитие злокачественных превращений инфицированных клеток даёт основание предполагать участие вируса Эпстайна-Барр (как коканцерогена) в развитии болезней злокачественного роста, таких как африканские формы лимфомы Бёркитта, карцинома носоглотки у мужчин некоторых этнических групп Южного Китая, а также саркома Капоши у пациентов со СПИДом.

Патогенез поражений вирусом Эпстайна-Барра

При инфекционном мононуклеозе вирус Эпстайн-Барра размножается в верхних отделах дыхательных путей и ассоциированной лимфоидной ткани с развитием местных воспалительных реакций. Возбудитель может гематогенно диссеминировать в периферические лимфатические узлы, селезёнку, печень и другие органы, формируя лимфоидные инфильтраты. Заражение макрофагов и лимфо-идных клеток приводит к появлению крупных мононуклеарных клеток. Латентная инфекция В-лимфоцитов вызывает их поликлональную активацию с образованием низкоспецифичных гетерофильных AT, агглютинирующих эритроциты различных животных. Подобные поражения типичны для большинства лиц. Реже наблюдают развитие злокачественных трансформаций, связанных с нарушениями дифференцирования В-клеток.

Лимфомы Бёркитта характеризуются экспрессией 1-го ядерного Аг (1-ЯАг) вируса Эпстайна-Барр в заражённых клетках, обусловливающего латентное течение процесса посредством длительного персистирования вируса в виде эписом. Хромосомные аномалии обусловлены нарушениями в хромосоме 8 с формированием точечных с-тус мутаций.

Небёркиттовские лимфомы вируса Эпстайн-Барра. При подобных трансформациях в В-лимфоцитах преимущественно экспрессируются 2- и 5-Аг, а также 1 и 2 латентные белки оболочки. 2- и 5-ЯАг активируют G1 циклин, делая клетки практически бессмертными. Трансформацию клеток обусловливают латентные белки оболочки, вызывающие избыточную рецепцию ростовых факторов.

Продолжительность инкубационного периода инфекционного мононуклеоза составляет 30-50 сут у взрослых и 10-40 сут у детей. Заболевание проявляется лихорадкой, общей разбитостью, ангинозными поражениями и лимфангиитами с гепато- и спленомегалией. Очень редко наблюдают поражения в форме гепатита или менингита.

Диагностика вируса Эпстайн-Барра

До настоящего времени методы выделения вируса Эпстайн-Барра не разработаны, и основу диагностики составляет выявление специфических AT. Наиболее адекватна РНИФ (реакция Хёнле), выявляющая AT (IgM, IgG и IgA) к капсидным, некапсидным «ранним» и ядерным Аг. Некоторую информацию можно получить, определяя наличие гетерофильных AT (капельный тест на инфекционный мононуклеоз); недостаток этого метода — невозможность отличить имеющуюся инфекцию от предшествующего заражения. Характерный признак — наличие крупных атипичных мононукле-аров в периферической крови, содержание которых может достигать 10-15% и более. Для выявления вирусной ДНК в трансформированных клетках применяют метод ДНК-гибридизации.

Лечение инфекций вируса Эпстайн-Барра

Специфические средства терапии отсутствуют; лечение симптоматическое.4

Вирус цитомегалии

Вирус вызывает цитомегаловирусную (от греч. cytys – клетка, megas – большой) инфекцию человека, характеризующуюся поражением почти всех органов (преимущественно слюнных желез) с образованием в них гигантских клеток с внутриядерными включениями, протекающую в различных формах – от бессимптомного носительства до тяжелой генерализованной формы, заканчивающейся летальным исходом. Вирус впервые выделен К. Смитом в 1956 г.

Таксономия, морфология, антигенная структура. Возбудитель цитомегалии – ДНК-содержащий вирус, относится к семейству Herpesviridae, роду Cytomegalovirus. Морфология, химический состав типичны для семейства герпесвирусов (см. раздел 11-2.7). Установлено 2 антигенных серотипа вируса.

Культивирование. Цитомегаловирус репродуцируется в ограниченном числе первичных и перевиваемых клеточных культур, вызывая характерный цитопатический эффект – образование гигантских («цитомегаловирусных») клеток с внутриядерными включениями. Вирус патогенен для обезьян.

Резистентность. Вирус термолабилен, чувствителен к дезинфицирующим средствам и жирорастворителям.

Эпидемиология. Цитомегаловирусная инфекция широко распространена на земном шаре. Источником вируса является больной человек или носитель. Вирус выделяется со слюной, мочой, секретами организма, реже фекалиями. Предполагается, что ведущий механизм передачи инфекции – контактно-бытовой, возможны аэрогенный и фекально-оральный механизмы передачи. Цитомегаловирус обладает высокой способностью проникать через плаценту (вертикальная передача), вызывая внутриутробную патологию плода.

Патогенез и клиническая картина. Патогенез не вполне выяснен. Инфекция связана с длительным носительством вируса, который в латентном состоянии сохраняется в слюнных железах, почках и других органах. Активация латентной инфекции происходит при иммунодефицитных состояниях, иммунодепрессив-ной терапии. Вирус поражает ЦНС, костный мозг, почки, печень, клетки крови. У беременных женщин цитомегалия может приводить к недоношенности, мертворождению, развитию аномалий у плода.

Иммунитет. У больных независимо от клинической формы инфекции, а также у носителей образуются антитела, которые, однако, не препятствуют сохранению вируса в организме и выделению его в окружающую среду. Интенсивность развития болезни находится под контролем клеточной иммунной системы хозяина.

Лабораторная диагностика. Обследованию на цитомегалию в первую очередь подлежат дети с поражением ЦНС и врожденными уродствами, а также женщины с неблагополучно протекающей беременностью. Исследуемый материал – слюна, моча, мокрота, цереброспинальная жидкость, кровь, пунктат печени. Диагностика основана на выявлении в исследуемом материале под микроскопом «цитомегалических» клеток, а также обнаружении антител класса IgM с помощью РИФ, ИФА, РИА. Вирус выделяют в культуре клеток, идентифицируют по морфологическим изменениям зараженных клеток и с помощью РН. Экспресс-диагностика – РИФ с моноклональными антителами. Применяют также методы генодиагностики: ПЦР и гибридизацию.

Специфическая профилактика и лечение. Разработана живая ат-тенуированная вакцина. Для лечения применяют химиотерапев-тические препараты (ганцикловир, фоскорнет натрия), иммуно-модуляторы, интерферон.