3. Реакция агглютинации, сущность, техника, варианты, применение.

Реакция агглютинации — простая по постановке реакция, при которой происходит связыва¬ние антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов). Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изо¬тонического раствора натрия хлорида.

Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировоч¬ная, непрямая и др. Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осад¬ка (клетки, «склеенные» антителами, име ющими два или более антигенсвязывающих центра — рис. 13.1). РА используют для:

1) определения антител в сыворотке крови боль¬ных, например, при бруцеллезе (реакции Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реак¬ция Видаля) и других инфекционных болезнях;

2) определения возбудителя, выделенного от больного;

3) определения групп крови с использова¬нием моноклональных антител против алло-антигенов эритроцитов.

Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к разве¬дениям сыворотки крови больного добавля¬ют диагностикум (взвесь убитых микробов,) и через несколько часов инкубации при 37 ˚С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.

Характер и скорость агглютинации зави¬сят от вида антигена и антител. Примером являются особенности взаимодействия диагностикумов (О- и H-антигенов) со специ¬фическими антителами. Реакция агглютина¬ции с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернис¬той агглютинации. Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые фор¬малином, сохранившие термолабильный жгу¬тиковый Н-антиген) — крупнохлопчатая и протекает быстрее.

Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентиро¬вочную реакцию агглютинации, применяя диа¬гностические антитела (агглютинирующую сыворотку), т. е. проводят серотипирование возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К капле диа¬гностической агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больно¬го. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида. При появлении в капле с сывороткой и микроба¬ми хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увели-чивающимися разведениями агглютинирую¬щей сыворотки, к которым добавляют по 2—3 капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмеча¬ется в разведении, близком к титру диагнос¬тической сыворотки. Одновременно учитыва¬ют контроли: сыворотка, разведенная изото¬ническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе — равномерно мутной, без осадка.

Разные родственные бактерии могут агглю¬тинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудня¬ет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыво¬ротками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыво¬ротках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии.

4. У двух реконвалесцентов проведены бактериологические исследования. У одного возбудитель не обнаружен, у другого – выявлен. Как оценить исход заболевания? С чем это может быть связано?

   ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ № 46