1) Почему смесь для определения активности ферментов обязательно содержит буферный раствор.

Буферные растворы (англ. buffer, от buff — смягчать удар) — растворы с определённой устойчивой концентрацией водородных ионов; смесь слабой кислоты и её соли (напр., СН₃СООН и CH₃COONa) или слабого основания и его соли (напр., NH₃ и NH₄CI). Величина рН буферного раствора мало изменяется при добавлении небольших количеств свободной сильной кислоты или щёлочи, при разбавлении или концентрировании. Буферные растворы широко используют в различных химических исследованиях.

Буферные растворы имеют большое значение для протекания процессов в живых организмах. Например, в крови постоянство водородного показателя рН поддерживается буферными смесями, состоящими из карбонатов и фосфатов. Известно большое число буферных растворов (ацетатно-аммиачный буферный раствор, фосфатный буферный раствор, боратный буферный раствор, формиатный буферный раствор и др.).

Зависимость активности ферментов от рН среды. Ферменты обычно наиболее активны в пределах узкой зоны концентрации водородных ионов, соответствующей для животных тканей в основном выработанным в процессе эволюции физиологическим значением рН среды 6.0 - 8.0. рН-оптимум действия ферментов лежит в пределах физиологических значений. Исключение составляет пепсин, рН-оптимум которого равен 2.0. Объясняется это тем, что пепсин входит в состав желудочного сока, содержащего свободную соляную кислоту, которая создает оптимальную кислую среду для действия этого фермента. С другой стороны, рН-оптимум аргиназы лежит в сильно щелочной зоне (около 10.0); такой среды нет в клетках печени, следовательно, in vivo аргиназа функционирует, по-видимому, не в своей оптимальной зоне рН среды. Влияние изменений рН среды на молекулы фермента заключается в воздействии на состояние и степень ионизации кислотных и основных групп (СООН-группы дикарбоновых аминокислот, SH-группы цистеина, имидазольного азота гистидина и др.). При разных значениях рН среды активный центр может находиться в частично ионизированной или в неионизированной форме, что сказывается на третичной структуре белка и соответственно формировании активного фермент-субстратного комплекса. Кроме того, имеет значение и состояние ионизации субстратов и кофакторов.

Почему при определении активности ферментов реакционную смесь помещают в термостат.

Активность фермента меняется при различных условиях реакции и зависит от температуры, рН среды, от концентраций субстратов и кофакторов. Учитывая это, при определении активности фермента на разных стадиях необходимо строго соблюдать одни и те же условия. Термостат поддерживает определенную температуру. Ферменты термолабильны ( чувствительны к изменению t). температурный оптимум для большинства ферментов человека составляет 37-38 С. При увеличении температуры выше 40 градусов происходит денатурация фермента, сопровождающаяся изменением конформации белка. Снижение температуры замедляет броуновское движение молекул, взаимодействие фермента с субстратом => и образование продукта реакции идет с низкой скоростью. При 0 С ферменты сохраняют слабую активность но в процессе замораживания клеток бх-е реакции приостанавливаются. После оттаивания, если соблюдаются определенные условия, ферментативные процессы могут возобновиться.

Почему определение активности ферментов нельзя проводить при 80 С.

При увеличении температуры выше 40 градусов происходит денатурация фермента, сопровождающаяся изменением конформации белка, происходит потеря каталитических свойств

Почему надо знать Км данного фермента для определения его активности.

Концентрация субстрата при которой скорость реакции составляет половину максимальной, называется константой Михаэлиса- Ментен. Величина Кm характеризует сродство фермента к субстрату: чем ниже значение Кm фермента тем выше его сродство к субстрату, и наоборот.

Чем различается плазма и сыворотка крови.

Плазма крови- это жидкая часть крови, остающаяся после удаления форменных элементов и состоящая из растворенных в воде солей, белков, углеводов биологически активных соединений углекислого газа и кислорода. В плазме около 90% воды, 6,5-8,5% белка, 1,1%орг. Веществ и 0,9 неорг веществ. Она обеспечивает кислотно щелочное равновесие, постоянство объема внутренней жидкости организма, переносит бав, продукты метаболизма. СОДЕРЖИТ ФИБРИН. СЫВОРОТКА КРОВЯНАЯ, жидкая часть крови, не содержащая фибрина и форменных элементов.

Что означает термин энзимодиагностика.

Энзимодиагностика – раздел учения о ферментах, в котором постановка диагноза заболевания (или синдрома) проводится на основе установления активности определенных ферментов в биологических жидкостях организма. Состав ферментов и их тканевое распределение у взрослого человека в основном постоянны и могут изменяться при заболеваниях. При патологических процессах повреждаются мембраны клеток, и содержащиеся в этих клетках ферменты выходят в кровь. Активность и содержание таких ферментов в крови изменяется и отличается от нормы в течение определенного времени после начала заболевания.

          б) Ферменты, активность которых определяют при энзимодиагностике, должны удовлетворять требованиям :

          • органоспецифичность;

          • в норме активность в крови должна быть невысокой;

          • при паталогии ферменты должны поступать в кровь.

          Также важно, чтобы активность фермента была достаточна для его обнаружения.

Что означает термин саливадиагностика.

Это неинвазивный метод исследования слюны, для оценки возрастного и физиологического статуса, выявления соматических заболеваний, патологии слюнных желез и тканей полости рта, генетических маркеров, мониторинга лекарственных средств.

Какие компоненты определяются в моче в норме.

Ионы натрия и хлора, калия кальция магния, аммонийные соли, серосодержащие ак( цистеин, цистин, метионин), бикарбонаты, Фосфор неорганический, Мочевая кислота, Мочевина, Креатинин:, Индикан

гиппуровая кислота, аминокислоты, щавелевая, молочная, лимонная, масляная, валериановая кислоты

Какие компоненты определяются в моче при патологии.

Белок.Протеинурии делятся на две большие группы: почечные и внепочечные.

При почечных протеинуриях белки (в основном белки плазмы крови)

попадают в мочу вследствие органического повреждения нефрона, увеличе-

ния размеров пор почечного фильтра, а также в результате замедления тока

крови в клубочках. Внепочечные протеинурии обусловлены поражением

мочевых путей или предстательной железы.

Кровь. В моче кровь может быть обнаружена либо в форме красных

кровяных клеток (гематурия), либо в виде растворенного кровяного

пигмента (гемоглобинурия).

Глюкоза. При патологических состояниях содержание глюкозы в моче увеличива-

ется (глюкозурия).

Кетоновые (ацетоновые) тела.-кетонурией.

Билирубин.-билирубинурией. Она встречается при закупорке желчного протока

и заболевании паренхимы печени.

Уробилин. В моче уробилин, точнее стеркобилин, присутствует всегда

в незначительном количестве. Концентрация его резко возрастает при

гемолитической и печеночной желтухах.

Порфирины.=порфирии

Какие патологические компоненты появляются в моче при сахарном диабете.

Глюкоза и кетоновые тела

Какие изменения в составе крови наблюдаются при сахарном диабете.

Увеличивается содержание глюкозы в крови

О чем свидетельствует повышение содержания мочевины и креатинина в плазме крови.

• характерно для нарушения функции почек и развития почечной недостаточности

С какой целью определяют активность трансаминаз в плазме крови.

В сыворотке крови здоровых людей активность этих трансаминаз в тысячи раз ниже, чем в паренхиматозных органах. Поэтому органические поражения при острых и хронических заболеваниях, сопровождающиеся деструкцией клеток, приводят к выходу трансаминаз из очага поражения в кровь. Так, уже через 3–5 ч после развития инфаркта миокарда уровень АсАТ в сыворотке крови резко повышается (в 20–30 раз). Максимум активности обеих трансаминаз крови приходится на конец первых суток, а уже через 2–3 дня при благоприятном исходе болезни уровень сывороточных трансаминаз возвращается к норме. Напротив, при затяжном процессе или наступлении повторного инфаркта миокарда наблюдается новый пик повышения активности этих ферментов в крови. Этим объясняется тот факт, что в клинике трансаминазный тест используется не только для постановки диагноза, но и для прогноза и проверки эффективности лечения . При поражениях клеток печени, например при гепатитах, также наблюдается гипертрансаминаземия (за счет преимущественного повышения уровня АлАТ), но она имеет более умеренный и затяжной характер, а повышение активности трансаминазы в сыворотке крови происходит медленно. При различного рода коронарной недостаточности (стенокардия, пороки сердца и др., кроме инфаркта миокарда) гипертрансаминаземия или не наблюдается, или незначительна. Определение активности трансаминаз в сыворотке крови при заболеваниях сердца следует отнести к дифференциально-диагностическим лабораторным тестам. Повышение уровня трансаминаз в сыворотке крови отмечено, кроме того, при некоторых заболеваниях мышц, в частности при обширных травмах, гангрене конечностей и прогрессивной мышечной дистрофии.

Какие патологические компоненты появляются в моче при инфаркте миокарда.

при инфаркте миокарда не покажет изменений, если нет болезней почек. Если развивается кардиогенный шок — тяжелое осложнение инфаркта, то появляется олигоурия — снижение количества выделенной мочи. Можно обнаружить повышение лактатдегидрогеназы с мочой в сут не превышает 35 мг/сут

Какие патологические компоненты появляются в моче при остром пиелонефрите.

Лейкоциты.В норме в разовой порции мочи количество лейкоцитов в поле зрения у мужчин до 5-7, у женщин до 7-10

Какой фермент появляется в моче при остром панкреатите.

Амилаза в сыв крови в норме 25-125 е/л