3.4.10 Количественное содержание полисахаридов

Около 2 г (точная навеска) препарата помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды очищенной, колбу нагревают при перемешивании на водяной бане при температуре 40⁰С в течение 30 мин, охлаждают и доводят объем раствора водой очищенной до метки. 5 мл полученного раствора помещают в центрифужную пробирку. Затем содержимое центрифугируют с частотой вращения 5000 об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость сливают, повторяют процедуру с одной и той же пробиркой несколько раз для полученного экстракта. Затем центрифужные пробирки с осадком высушивают при температуре 100-105°С до постоянной массы.

Содержание полисахаридов в процентах (X) вычисляют по формуле:

(

Х =

m₂ - m₁) ^. 5 ^. 100%

m , (17)

где:

m₁ – масса пробирки, в граммах;

m₂ – масса пробирки с осадком, в граммах;

m – масса навески препарата, в граммах [51].

3.5 Определение антиоксидантной активности субстанций

Антиоксидантную активность определяли на тканях печени крыс. Для получения гомогената навеску (0,5-1,0 г) ткани печени крыс после промывания в охлажденном физиологическом растворе помещали в 10 мл среды, содержащей 0,85% NaCl и 50мл КН₂РО₄, (рН 7,4 при 4°С) и гомогенизировали гомогенизатором типа Polytron в течение 90 сек. Гомогенат центрифугировали при 10000g в течение 20 мин.

Микросомную фракцию получали, центрифугируя супернатант при 30000g в течение 60 мин. Надосадочную жидкость осторожно сливали и осадок, представляющий собой фракцию тяжелых микросом, сус­пендировали в среде, содержащей 25% глицерина, 0.1 мл ЭДТА, 0.2 мл СаСl₂, 10 мл гистидина, (рН 7.2 при 4°С) и хранили при минус 4°С.

Об интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) в микросомах печени судили по содержанию ТБК-активных продуктов. Концентрацию малонового диальдегида (МДА) определяли по интенсивности развивающейся окраски в результате взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) по методу Н.О. Ohkawa e.a. [82]. Для индукции процесса ПОЛ в мембранах применяли систему Fe²⁺ (0,02мМ)+аскорбат (0,5мМ). Окисление проводили в среде гомогенизирования в термостатируемых ячейках при 37°С с постоянным перемешиванием в течение 60 мин. За накоплением малонового диальдегида (МДА) – продукта ПОЛ, следили по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой, оптическую плотность измеряли при 532 нм. Расчет содержания продуктов, реагирующих с ТБК, проводили с учетом коэффициента молярной экстинкции МДА, равного 1.56´10⁵ М^-1×см^-1 [52, 53].

3.6 Определение физических параметров субстанции

Определение потери массы субстанции при высушивании

Определение выполняется при использовании аналитических весов и сушильного шкафа, следующим порядком:

Стакан для взвешивания (бюкс) высушить в условиях, описанных для испытуемой субстанции, в течении 1 часа в сушильном шкафу, затем охладить в течении на 40 – 45 мин. и взвесить. Поместить в бюкс указанное в НД количество испытуемой субстанции, записать результат в журнал, закрыть бюкс крышкой и вновь взвесить. Бюкс с субстанцией поместить в сушильный шкаф и высушить до постоянной массы или на определенное время, указанное в НД. Вытащить бюкс с высушенной субстанцией из сушильного шкафа, поместить в эксикатор на 40 – 45 мин и взвесить. Результат записать в журнал. Потерю в массе при высушивании рассчитать по формуле:

, (18)

где:

m₄ – масса бюкса с навеской после высушивания, г;

m₃ – масса бюкса с навеской до высушивания, г;

m₂ – навеска испытуемой субстанции, г.

Допускается использование анализатора влажности при условиях, указанных в НД [10, 54].

Определение сыпучести

Определение проводится на оборудовании - Тестер определения сыпучести ERWEKA GTB (приложение В), в следующем порядке:

Включить прибор за 10 мин. до начала работы для прогревания. Ввести в графе «Operator» с помощью клавиатуры слово GRANU, в графе «Password» - TEST. Выбрать позицию “Measurement” – измерение, нажать ENTER. Выбрать в диалоговом окне строчку «Flowability (EP)», нажать ENTER. В окне «Produkt data» выбрать наименование нужного продукта (порошка) и нажать ENTER. Появится окно «Flow Rate (EP), выставить нужное значение в строчке Nozzle, нажать ENTER. В окне «Press» выбрать ЕКО, нажать ENTER. Курсором ↓↑ выбрать нужный диаметр воронки и нажать ENTER. Вставить воронку нужного диаметра в основание, закрутить гайку. Вставить собранное устройство в ячейку и закрепить зажимом. Всыпать испытуемый образец (субстанция, гранулят) массой примерно 100 г в воронку. Проследить, чтоб чаша весов стояла ровно по стрелочке, указывающей на уровень и правильность установки чаши весов. Поставить на чашу весов под воронку специальный стакан – приемник, куда будет высыпаться испытуемый образец. Установить стакан так, чтобы он не закрывал окошко, откуда проходит лазерный луч, который определяет скорость высыпания образца. Нажать кнопку Start. Изменять параметры клавишей «N», выбрать нужный параметр и нажать ENTER и Start. Выключить прибор. Расслабить зажим и вытащить воронку. Разобрать воронку на составляющие и почистить [10, 55].

Определение насыпной плоности

Определение выполняется на тестере по определению насыпной плотности (прииложение Б), в следующем порядке:

Включить прибор за 10 мин. до начала работы, для прогревания. В сухой цилиндр поместить без уплотнения 100 мл испытуемого материала. Навеску зафиксировать в журнале (m). Закрепить цилиндр на подставке и зафиксировать насыпной объем до усадки V₀ с точностью до миллилитра. При помощи клавиш установить необходимое число колебаний, подтвердить выбранное число клавишей ENTER и начать испытание нажатием клавиши START. Произвести 10, 500 и 1250 соскоков цилиндра и зафиксировать объемы V₁₀, V₅₀₀, V₁₂₅₀ с точностью до ближайшего деления. Если разность между V₅₀₀ и V₁₂₅₀ превышает 2 мл, производят еще 1250 соскоков цилиндра [10, 56].

Насыпную плотность до усадки или плотность насыпного (г/мл) продукта рассчитать по формуле:

, (19)

Плотность после усадки или плотность уплотненного (г/мл) продукта рассчитать по формуле:

, (20)