3.4.7 Количественное определение сапонинов
Около 1 г препарата (точная навеска) помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл 3 % ацетонового раствора кислоты азотной и настаивают в течение 1 ч при постоянном перемешивании, приливают еще 20 мл ацетона и нагревают на водяной бане (40°С) в течении нескольких минут, затем заливают 10 мл спирта этилового в ту же колбу. Далее по каплям при интенсивном помешивании добавляют концентрированный раствор аммиака до появления обильного светло-желтого творожистого осадка (рН 8.3-8.6 устанавливают по порозовению влажной фенолфталеиновой бумаги). Осадок отделяют на воронке Бюхнера, стакан и фильтр с осадком промывают 30 мл ацетона в 2-3 приема. Осадок с фильтром переносят в стакан и растворяют в 50 мл воды очищенной. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл. Фильтр промывают небольшими порциями воды очищенной, присоединяя их к основному раствору. Доводят объем раствора водой очищенной до метки. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 258 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду очищенную.
Содержание сапонинов в пересчете на кислоту глицирризиновую в процентах (Х) вычисляют по формуле:
D
X =
11000 . m . 10 , (14)
где:
D – оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 258 нм;
11000 – удельный показатель поглощения раствора кислоты глицирризиновой при длине волны 258 нм;
822 – молекулярная масса кислоты глицирризиновой;
m – масса навески препарата, в граммах [10, 21, 48].
3.4.8 Определение количественного содержания каротиноидов
Около 0.5 г препарата (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 25 мл смеси гексан – спирт этиловый 96 % (1:1), растворяют при перемешивании, фильтруют. (Для растворения также можно использовать смесь гексана со спиртом этиловым 96 % (3:1), гексан, хлороформ, спирт этиловый 96 %, петролейный эфир). Содержимое колбы количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора соответствующим растворителем или смесью до метки, перемешивают. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 450 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения смесь гексан – спирт этиловый 96 % (1:1) или другой растворитель.
Содержание каротиноидов в препарате, в пересчете на –каротин в процентах (Х) вычисляют по формуле:
D
X =
Е . m , (15)
где:
D – оптическая плотность исследуемого раствора при длине волны 450 нм;
m – масса навески препарата, в граммах;
Е=2550 – удельный показатель поглощения –каротина в смеси гексан – 96 % спирт (1:1) при длине волны 450 нм [10, 21, 48].
3.4.9 Количественное определение кумаринов
Около 0.2 г препарата (точная навеска) помещают в колбу вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл хлороформа и нагревают при перемешивании на водяной бане (40°С) в течении нескольких минут, фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата. 20 мл фильтрата помещают в делительную воронку, прибавляют 1 г натрия хлорида и экстрагируют в течение 5 мин. После разделения слоев хлороформное извлечение сливают в химический стакан. Процедуру извлечения хлороформом повторяют еще дважды порциями по 20 мл, экстракты объединяют. Водное извлечение оставляют для определения подлинности. Хлороформное извлечение упаривают в вакууме досуха. Сухой остаток растворяют в 10 мл спирта этилового 96 %, количественно переносят при помощи 10 мл спирта этилового 96 % в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % и перемешивают. Измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 272 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения спирт этиловый 96 %.
Содержание производных кумарина в препарате, в пересчете на СО в процентах вычисляют по формуле:
X =
734
.
m ,
(16)
где:
D – оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 272 нм;
734 – удельный показатель поглощения СО кумарина при длине волны 272 нм;
m – масса навески препарата, в граммах [10, 21, 48].