3.4.3 Определение количественного фенолов

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5 мл испытуемого раствора препарата, 10 мл спирта этилового 30%, 1.5 мл 3 % раствора железа окисного хлорида, 10 мл 5 % раствора натрия карбоната, доводят до метки водой очищенной, взбалтывают. Оставляют на 20 мин при комнатной температуре, а затем центрифугируют при скорости 5000 об/мин в течение 10 мин в центрифужной пробирке вместимостью 15 мл. Измеряют поглощение надосадочной жидкости при длине волны 720 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм в сравнении с водой очищенной.

25 мл испытуемого раствора имеют при указанных условиях поглощение 0.276, в пересчете на 0.05 мг стандартного раствора эпикатехина.

Общее содержание фенолов в процентах (X) рассчитывают по формуле:

, (12)

где:

D – оптическая плотность надосадочной жидкости при длине волны 720 нм [10, 21, 48].

3.4.5 Определение количественного содержания аминокислот

Качественное обнаружение аминокислот и определение их количественного содержания проводили методом ГХ: 1 г сухого остатка гидролизовали в 5 мл 6 н соляной кислоты при 105⁰С в ампулах, запаянных под аргоном в течение 24 часов. Полученный гидролизат концентрировали досуха на вакуумном роторном испарителе при 40⁰С и полученный осадок растворяли в 5 мл 5% сульфосалициловой кислоты. Раствор центрифугировали, надосадочную жидкость пропускали через ионообменную колонку с Даукс 50 Н-8, 200-400 м. Элюирование аминокислот вели 6 н раствором NH₄OH, после концентрирования которого к нему добавляли свежеприготовленного SnCl₂, 1 каплю 2,2-диметоксипропана, 1-2 мл пропанола, насыщенного HCl и нагревали до 110 ⁰С. Эту температуру выдерживали в течение 20 мин, а затем реакционную смесь концентрировали на роторном испарителе. К концентрату добавляли 1 мл свежеприготовленного ацильного реактива (1 объем уксусного ангидрида, 2 объема триэтиламина, 5 объемов ацетона), нагревали его при температуре 60 ⁰С в течение 1,5-2 мин и коцентрировали досуха. К остатку добавляли 2 мл этилацетата и 1 мл насыщенного раствора NaCl, содержимое колбы тщательно перемешивали. Из образовавшихся двух слоев жидкостей для газохроматографического анализа использовали верхний этилацетатный слой [10, 21, 48].

Данные анализов приведены в таблице 6.

3.4.6 Количественное определение содержания алколоидов

Около 1 г (точная навеска) порошка препарата помещают в коническую колбу, прибавляют 10 мл 2% раствора кислоты лимонной и 30 мл хлороформа, оставляют при перемешивании в течение 1 часа. Хлороформный слой сливают в делительную воронку, обрабатывают 10 мл 1% раствора натрия гидрокарбоната, фильтруют через слой безводного натрия сульфата в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки хлороформом и перемешивают. 20 мл полученного хлороформного извлечения помещают в колбу, хлороформ отгоняют досуха при температуре около 40⁰С. Сухой остаток переносят 4 мл спирта этилового 95% в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 2 мл раствора 0.25М кислоты серной, 2 мл свежеприготовленного 0.3% раствора натрия нитрита, выдерживают 30 минут при температуре водяной бани 55±5⁰С. Раствор охлаждают, добавляют 1 мл свежеприготовленного 5% раствора кислоты сульфаминовой, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 95% и измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 390 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор из 2 мл 0.25М раствора кислоты серной, 1 мл 5% раствора кислоты сульфаминовой в мерной колбе вместимостью 25 мл с доведенным до метки объемом спиртом этиловым 95%.

Содержание алкалоидов в пересчете на резерпин в процентах (Х) вычисляют по формуле:

D

X =

^. 50 ^. 25 ^. 100%

402 ^. m , (13)

где:

D – оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 390 нм;

m - масса препарата, в граммах;

402 – удельный показатель поглощения резерпина при длине волны 390 нм [10, 21, 48].