3.4.2 Количественное определение флавоноидов

Количественное определение флавоноидов в сырье

Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл спирта этилового 90%, содержащего 1% кислоты хлороводородной концентрированной, колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через бумажной фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза указанным выше способом, фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу, фильтр промывают спиртом этиловым 90% и доводят объем фильтрата тем же спиртом до метки (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2 мл раствора А, прибавляют 1 мл 1% раствора алюминия хлорида в спирте этиловом 95% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Через 20 минут измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 430 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2 мл раствора А, доведенного спиртом этиловым 95% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин и абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

, (10)

где:

D – оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 430 нм;

764.6 – удельный показатель поглощения комплекса кверцетина с 1% алюминия хлоридом при 430 нм;

W – потеря в массе при высушивании сырья в процентах;

m – масса навески сырья в граммах [10, 21, 48].

Определение содержания флавоноидов в субстанции:

10 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем спиртом этиловым 70% до метки, перемешивают (раствор А).

5 мл полученного раствора помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 5 мл 5% раствора алюминия хлорида, помещают на 3 минуты в кипящую водяную баню, быстро охлаждают, количественно переносят при помощи 10 мл спирта этилового 70% в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл буферного раствора с рН 3.8, доводят объем раствора 70% спиртом до метки и перемешивают.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 409 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения раствор, состоящий из 2 мл раствора А, 2 мл буферного раствора с рН 3.8, помещенный в мерную колбу вместимостью 25 мл и доведенный спиртом этиловым 70% до метки.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора, содержащего 1 мл раствора СО (рутина, или другого) отобранного аналогично испытуемому раствору, используя в качестве раствора сравнения раствор, состоящий из 1 мл раствора СО и 2 мл буферного раствора с рН 3.8, помещенный в мерную колбу вместимостью 25 мл и доведенный спиртом этиловым 70% до метки.

Содержание флавоноидов (Х) в препарате, в пересчете на СО в процентах, вычисляют по формуле:

, (11)

где:

D₁ – оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 409 нм;

D₀ – оптическая плотность раствора СО при l_max = 409 нм;

m₀ – масса навески СО, в граммах [10, 21, 48].

.