ЛПЗ № 1-2

Тема №1 Методы химико-токсикологического анализа (ХТА)

1.План диагностических мероприятий при отравлениях животных.

2.Цели и задачи ХТА.

3.Правила отбора проб корма и патологического материала для ХТА.

Сопроводительная информация для ХТА.

4. Первичная обработка патологического материала в токсикологической лаборатории.

5.Порядок ведения документации ХТА и оформление заключения.

6. Методы извлечения ядовитых веществ из пробы патматериала.

7. Методы обнаружения и количественного определения ядовитых веществ.

8. Порядок ведения документации ХТА и оформление заключения.

Химикотоксикологический анализ (ХТА) – это комплексное исследование патологического материала на присутствие в нем ядовитых веществ. В качестве патологического материала рассматриваются объекты среды обитания животного (корм, вода, воздух, почва и др.), а также ткани животного, пострадавшего от отравления.

Целью ХТА является качественное и количественное обнаружение ядовитого вещества в патологическом материале, выявление причины отравления.

Задачи ХТА

Постановка диагноза при отравлениях.

Рекомендации о пригодности кормов и продуктов питания животного происхождения (мясо, яйца, молоко)

ХТА проводится врачом - токсикологом в условиях токсикологической лаборатории. Иногда первичный ХТА проводится непосредственно в хозяйстве.

Этапы диагностики отравления

Диагноз на отравление ставиться комиссионно с учетом:

анамнеза отравления; анализа симптомов отравления; результатов ХТА, результатов вскрытия.

Правила отбора патологического материала для ХТА.

При отравлениях животных в лабораторию отсылаются пробы корма, воды, растений, собранных на пастбище, содержимое ЖКТ, кусочки тканей животного ( печени, почек, мышц, сердца и др.).

Метод квадратирования – составление среднего образца из исходного материала для анализа.

Материал (зерно, мука, сено, измельченные корнеплоды и др.) рассыпать на ровной поверхности в виде квадрата.

Разделить квадрат диагоналями на 4 треугольника.

С помощью двух дощечек или руками отделить и убрать 2 противоположных треугольника.

Из оставшихся двух треугольников вновь разровнять квадрат и повторить выделение двух треугольников до тех пор, пока не образуется требуемое для анализа количество исследуемого материала ( средний образец) 0,5-1 кг.

Пробы сухих кормов надо отбирать из нескольких точек склада в количестве 3-4 кг. Пробы перемешать в виде квадрата на ровной поверхности. Квадрат разделить двумя диагоналями на четыре треугольника. Из полученных треугольников отобрать среднюю пробу 0,5-1 кг.(метод квадратирования).

Пробы мяса, колбасы и др. пищевых продуктов завернуть каждую отдельно в пергаментную бумагу и в новый полиэтиленовый пакет.

Пробы растений на пастбище срезать серпом или ножом, или выкопать с корнем ( землю с корней отряхнуть). Выбор растений по 3-5 штук в 1 точке проводить по определённой схеме:

По диагонали поля в 10 точках;

По двум смежным сторонам поля в 2-3 точках на каждой стороне поля на расстоянии 5, 10 и 15 метров от края поля.

Средняя проба зеленой массы должна быть приблизительно 3 кг. Среднюю пробу измельчить, перемешать и выбрать средний образец 0,5-1кг методом квадратирования.

Пробы корнеплодов ( картофель, свекла, морковь и др.) выбирают горстью или пробоотборником из верхнего, среднего и нижнего слоев хранилища (бурта) в количестве 5-7 кг. Пробу разделить на четыре части, взять одну часть, перемешать, измельчить и выбрать средний образец 0,5-1 кг. Для некоторых анализов (например для обнаружения дитиокарбаматов) овощи и фруты нельзя разрезать, и потому их посылают целиком.

Пробы соломоподобного материала брать горстью или пробоотборником из трех разных мест стога в количестве приблизительно 2кг. Измельчить, перемешать и выделить средний образец 0,1-0,2кг.

Пробы тканей от вынужденно убитых и павших животных:

1. пораженная часть желудка с содержимым 0,5кг,

2. кишечника 0,5кг,

3. часть печени с желчным пузырем, почку,

4. скелетную мускулатуру 0,5кг,

5. внутренние органы 0,5кг.

От мелких животных и птиц посылают целые органы или трупы.

Пробы патологического материала от заболевших животных:

кровь :20мл

моча :0,5л

кал, рвотные массы :0,3-0,5кг.

молоко: 0,5 л

яйца : 20 штук

Упаковка проб

Подготовленные пробы надо поместить в стеклянную банку с притертой пробкой или новый полиэтиленовый мешочек, плотно закупорить, опечатать сургучной печатью или опломбировать.

На банку (или пакет) наклеить этикетку, содержащую следующую информацию :

наименование материала и его количество,

указание фамилии специалиста, отбиравшего пробу.

Пробу патологического материала и корма отослать в лабораторию с сопроводительным документом.

Образец сопроводительного документа.

Сопроводительная информация для ХТА

В областную ветеринарную лабораторию, химико-токсикологический отдел : г. Люберцы, пер. Яндовищенский, 20

Для ХТА направляются пробы патологического материала в 5 (пяти) опечатанных стеклянных банках с притертыми пробками.

В качестве патологического материала представлены ткани трупа свиньи и пробы оставшегося корма.

Свинья №35 принадлежала учхозу №1, г. Люберцы, ул Гагарина 6 .

Заболела 12.02.05г. Клинические признаки отравления: беспокойство, жажда, судороги, шаткая походка, круговые движения, понос, цианоз слизистых и кожи, частое мочеиспускание, атаксия.

Пала 13.02.05г.

Опись содержимого банок :

Банка №1 – части желудка и кишечника с содержимым.

Банка №2 - части печени, желчного пузыря, почек, легких, сердца.

Банка №3 -части головного и спинного мозга.

Банка № 4-части скелетных мышц.

Банка №5 – проба оставшегося корма.

Заключение по ХТА просьба выслать по адресу: г. Люберцы, ул Гагарина 6 ,

гл.ветврачу УЧХОЗА №1, Кортеву Н.Н.

Приложение:

Пять банок с патологическим материалом.

Копия истории болезни животного (свиньи №35).

Копия протокола патолого-анатомического вскрытия.

Описание условий, в которых произошла гибель животного.

Подозреваемое вещество – как причина отравления- поваренная соль?

Всего____________6 листов.

Дата отправки патологи- Подпись ответственно-

ческого материала. го лица:

13.02.2005г. Гл.ветврач Учхоза №1

/Кортев Н.Н./

4. Первичная обработка патологического материала в токсикологической лаборатории

В лаборатории поступивший патологический материал вскрывают, регистрируют в журнале в соответствии с сопроводительным документом .

Отмечают :

Дату поступления;

Кем направлен образец;

Место и дату отбора образца;

Наименование пробы и её характеристику ( вид, масса, возможное загрязнение при транспортировке);

Подпись лица, принявшего образец.

После регистрации образец разделяют на три части.

Первая часть используется для основного анализа;

Вторая часть - для дополнительного исследования;

Третья часть опечатывается и оставляется на хранение. Эта часть служит для контроля.

В лаборатории к исследованию приступают в тот же день. При необходимости пробы сохраняют в холодильнике, но не более 3 суток от даты взятия материала. Пробы патматериала консервируют спиртом.

Навески зерна и крупы измельчают на кофемолке, внутренних органовна мясорубке, или гомогенизаторе, овощей и травножницами.

ХТА начинают с определения того токсического вещества, которое подозревается в качестве причины отравления (что указано в сопроводительной информации)

При отравлении веществами неизвестного происхождения пробы патологического материала исследуют качественными реакциями для определения присутствия отдельных групп ядовитых веществ. Если реакция будет положительной, то проводят количественный анализ.

При острых отравлениях в первую очередь исследуют содержимое желудочно-кишечного тракта, при хронических отравлениях - паренхиматозные органы.

Методы хта.

1.Методы извлечения ядовитых веществ из патологического материала и корма

Существуют три основных метода извлечения ядов:

Отгонка водяным паром

Извлечение легколетучих химических соединений ( цианидов, формальдегида, фенола, ФОС, ХОС и др.)

Навеску измельченного патологического материала поместить в стеклянную колбу, залить водой. Через полученную смесь в перегонном аппарате пропускается водяной пар от парообразователя с последующим его охлаждением. В дистилляте определяют ядовитые вещества.

Экстракция жидкостями (водой, ацетоном, хлороформом и др.). Проба патматериала измельчается, заливается в соотношении 1:2 одним или несколькими растворителями. Экстракция проводится различными вариантами.

А) пассивная экстракция в течение 20-24 часов;

Б) перемешивание в шюттель-аппарате ( регулярное покачивание) в течение 1-2 часов;

В) перемешивание в течение нескольких минут в устройствах с большой скоростью вращения (аппарат Соксклета, ультраторакс, омнимиксар и др.).

При любом способе экстрагирования в экстракт кроме ядов переходят примеси, мешающие обнаружению яда: белки, жиры, пигменты, соли и др. Их удаляют различными способами: осаждение, вымораживание, омылениеи др. После этого экстракт концентрируется путем удаления экстрагента: выпаривание в токе воздуха в вытяжном шкафу при комнатной температуре, выпаривание с использованием вакуумных испарителей. Конечный объем экстракта составляет 0,5-5 мл.

Извлечение соли, пиретроидов, нитратов, алкалоидов.

Минерализация :

а) термическая: сжигание в муфельной печи и исследование зольного остатка;

б) химическая : обработка серной, соляной кислотами , пергидроля и др.

Извлечение металлов и металлоидов.