8. Лаб. Диагностика возбудителя турбекулёза.

Имеются виды микобактерий: Mycobacterium tuberculosis, М. bovis и М. avium.

Туберкулез — инфекционное, хронически протекающее заболевание человека, животных, в том числе и птиц. Патологоанатомически он характеризуется образовани­ем в различных тканях и органах специфических очагов-бугорков, по мере развития процесса подвергающихся творожистому перерождению.

Патологический материал для бактериологического исследования направля­ют как при жизни животного (истечения из носа, бронхиальную слизь, молоко, фекалии, реже мочу), так и посмертно (пораженные части органов с туберкулами и лимфоузлы). Труп птицы на­правляют целиком. Материал в лабораторию доставля­ют свежим. Если нет условий соблюдения этого, то лимфоузлы, кусочки тканей ор­ганов консервируют в 30—40 %-ном водном растворе глицерина или посылают в замороженном состоянии. Обсемененность исследуемого материала микобактериями туберкулеза может быть незначительной. Поэтому, чтобы повысить концентра­цию возбудителя в пробах, применяют специальные методы обработки и обогащения.

Микроскопия. Возбудитель туберкулеза относится к группе кислото-спирто-щелочеустойчивых бактерий. Микробная клетка гидрофобна, то есть способна отталкивать воду и водные растворы красителей, кислот, щелочей. В связи с этим бактерии туберкулеза трудно воспринимают краску. Для окрашивания бактерий этой группы применяют специальные методы, среди которых наиболее распространенным является метод Циля — Нильсена. После окраски этим методом микобактерий приобретают розово-красный цвет, по Граму окрашиваются положительно.

Возбудитель туберкулеза — бактерия палочковидной формы. М. tuberculosis — тонкая, слегка изогнутая палочка, М. bovis — короткая и толстая, М. avium — мельче остальных видов, обладает по­лиморфизмом. Микобактерий туберкулеза неподвижные, спору и капсулу не об­разуют. В мазках из исследуемого материала располагаются одиночно и неболь­шими скоплениями. Часто обнаруживаются неравномерность в окрашивании, наличие зернистости (грамположительные некислото­устойчивые «зерна Муха»).

Культивирование и культуральные свойства. Микобактерии туберкулеза способны размножаться в строго аэробных условиях на соответствующих элективных питательных средах. Рост медленный (2— 4 недели и доль­ше). Культивируют при +37 °С. На­личие роста в посевах учитывают каждые 2—3 дня в течение первых 10 дней, за­тем каждые 5 дней. Предварительно обработан­ный исследуемый материал высевают на питательные среды — элективные: яично-крахмальные, картофельные с глицерином и краской для за­держания роста посторонних микроорганизмов.

Рост М. tuberculosis в глицериновом бульоне проявляется на поверхности среды в виде толстой складчатой пленки с широким пристеночным кольцом. На плотных средах рост обильный, колонии сухие бородавчатые или сморщенные, иногда в виде узелков, цвета слоновой кости (кремовый).

На среде Петраньяни колонии серовато-желтые. М. bovis растет в виде зеленоватых колоний на среде Петраньяни, в жидкой среде образует пленку тонкую, нежную, ино­гда сетчатую, не покрывающую всей поверхности среды. На плотных средах рост скудный, колонии сухие, мелкие, зернистые, серовато-белые. М. avium в жидких средах образует сначала сухую, затем слизящую пленку по всей поверхно­сти бульона. На плотных средах — влажный и слизистый налет. Колонии серова­то-белые или желтоватого цвета, по форме могут напоминать пуговицеобразное круглое возвышение, иногда кратеровидное углубление. На среде Петраньяни ко­лонии золотистые. М. avium растет быстрее, чем микобактерий остальных видов.

Для дифференциации отдельных видов микобактерий ставят биопробу на морских свинках, кроликах, а при необходимости — на курах, предварительно проверенных аллергическим методом для исключения спонтанного туберкулеза. Для заражения применяют либо культуру, либо при­сланный в лабораторию материал, который предварительно обрабатывают серной кислотой. Культуру вводят морским свинкам в паховую область, кроликам — внутривенно. У морских свинок в положительных случаях через 2—3 недели на месте введения образуется уп­лотнение, потом язва с одновременным увеличением регионарных лимфоузлов. Этим свинкам через 2—3 недели подкожно инъецируют туберкулин, что приводит к бурной ге­нерализации процесса и гибели животных.

При вскрытии из типичных туберкулов готовят мазки и делают высевы на питательные среды. М. bovis вызывает генерализованный процесс туберкулеза у кроликов и морских свинок. М. tuberculosis патогенен лишь для морских свинок, вызывая заболевание в период от 3 недель до 3 месяцев после заражения. М. avium, как правило, обусловливает у кроликов септический процесс без образо­вания специфических туберкулов и приводит к быстрой гибели животных.