Министерство здравоохранения Республики Беларусь

Учреждение образования «Гомельский государственный медицинский университет»

Кафедра биохимии

А. И. Грицук, в. Т. Свергун, а. Н. Коваль

БИОХИМИЯ

практикум

Биохимия липидов

занятие 14 Липиды-1. Классификация, биологические функции. Переваривание и всасывание. Обмен липопротеидов.

Занятие 15 Липиды-2. Тканевой обмен липидов. Катаболизм триацилглицеролов.

МЕТАБОЛИЗМ КЕТОНОВЫХ ТЕЛ

занятие 16 Липиды-3. Биосинтез липидов. Регуляция и патология липидного обмена.

занятие 16-2 (МДФ) Липиды-4. Патология обмена липопротеидов (Для студентов МДФ).

занятие 17 Контрольное занятие по разделу «биохимия липидов»

ЗАНЯТИЕ 18 Итоговое (зачетное) занятие семестра

Гомель 2013

Занятие 14 Липиды-1. Классификация, биологические функции. Переваривание и всасывание. Обмен липопротеидов

Цель занятия: сформировать представления о строении, классификации основных липидов, их биологической функции, о молекулярных механизмах переваривания и всасывания липидов в желудочно-кишечном тракте. Изучить строение, химический состав, метаболизм и функциональную роль основных классов липопротеидов.

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

1. Строение и свойства основных классов липидов (жирные кислоты, их производные, производные изопрена).

2. Строение мембран, модели мембран.

Студент должен уметь:

1. Проводить качественные реакции на продукты гидролиза липидов.

Структура занятия

1. Теоретическая часть

1. Липиды – их строение, классификации и биологическая роль.

• Жирные кислоты и их производные (PG, LT, TxA), а также:

• простые липиды: воска, диолы, триацилглицеролы (ТАГ);

• сложные липиды: фосфоглицериды – фосфолипиды (ФЛ) (фосфатиды: кефалины, лецитины, серинфосфатиды, инозитолфосфатиды, кардиолипины, плазмалогены); сфинголипиды (сфингомиелины, цереброзиды и ганглиозиды); гликолипиды, сульфолипиды, липопротеиды.

• Производные изопрена;

• стероиды (стерины и стериды);

• каротиноиды (растительные пигменты, витамины);

• терпены.

1. Роль липидов в построении мембран. Современные модели мембран, их биологическая роль.

2. Переваривание и всасывание липидов в желудочно-кишечном тракте. Строение и функции желчных кислот. Механизм эмульгирования жира. Печеночно-кишечный цикл желчных кислот. Значение липаз. Особенности переваривания липидов у грудных детей.

3. Ресинтез ТАГ и ФЛ в энтероцитах.

4. Липопротеиды (ЛП) – строение, классификация, химический состав, функциональная роль хиломикронов (ХМ), ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП), промежуточной плотности (ЛППП), низкой плотности (ЛПНП), высокой плотности (ЛПВП). Метаболизм ЛП в норме. Экзогенный и эндогенный пути транспорта липидов в организме.

5. Роль рецепторов ЛП в метаболизме липидов.

1. Практическая часть

   1. Решение задач.

   2. Лабораторные работы.

Задачи

1. Желчные кислоты у человека представлены главным образом в виде:

а) конъюгатов с глицином; б) конъюгатов с ацетил-КоА; в) конъюгатов с таурином; г) конъюгатов с сульфатом; д) метилированных производных; е) свободных желчных кислот?

2. Роль холестерина в структуре мембраны связана с превращением ее в:

а) более "жидкую" – текучую; б) более "твердую" – инертную; в) более упругую и прочную; г) несущественна; д) менее упругую и прочную; е) более проницаемую?

3. ЛП-липаза обеспечивает гидролиз:

а) пристеночных липидов пищи в кишечнике;

б) липидов пищи в полости кишечника;

в) внутриклеточных ЛП;

г) ТГ, входящих в состав ХМ;

д) ТГ, входящих в состав ЛПНП;

е) ФЛ, входящих в состав ЛПВП?

4. ХМ:

а) синтезируются энтероцитами;

б) являются транспортной формой экзогенных ТГ;

в) являются транспортной формой эндогенных ТГ;

г) транспортируют ХС из периферических тканей в печень;

д) транспортируют ТГ из печени в периферические ткани;

е) являются атерогенными;

ж) не являются атерогенными?

5. Превращение насцентных ХМ в ремнантные связано с действием:

а) фосфолипазы А; б) ЛП-липазы; в) ТГ-липазы; г) лецитин-холестерол ацил трансферазы (ЛХАТ); д) фосфолипазы С; е) аденилатциклазы?

6. ЛПОНП:

а) синтезируются в жировой ткани;

б) синтезируются в печени;

в) являются транспортной формой эндогенных ТГ;

г) являются транспортной формой экзогенных ТГ;

д) являются транспортной формой холестерина;

е) являются атерогенным;

ж) не являются атерогенным?

7. ЛППП:

а) синтезируются в печени;

б) образуются в кровяном русле;

в) синтезируются энтероцитами;

г) имеют несколько фракций;

д) являются транспортной формой эндогенных ТГ;

е) являются атерогенными;

ж) не являются атерогенными?

8. ЛПНП:

а) синтезируются в печени;

б) образуются в кровяном русле;

в) являются транспортной формой холестерина;

г) являются транспортной формой экзогенных ТГ;

д) являются атерогенными;

е) не являются атерогенными?

9. Превращение насцентных ЛПВП в ремнантные обусловлено действием:

а) фосфолипазы А; б) ЛП-липазы; в) ТГ-липазы; г) ЛХАТ; д) насыщением эфирами холестерина; е) аденилатциклазы?

10. Апо В-100:

а) образуется в печени; б) образуется в энтероцитах; в) является маркером ЛПНП; г) является маркером ЛПВП; д) активирует ЛХАТ; е) активирует ЛП липазу?

11. Апо В-48:

а) образуется в печени; б) образуется в энтероцитах; в) активирует ЛХАТ; г) является маркером ЛПВП; д) является маркером ЛПНП; е) является маркером ХМ?

Лабораторные работы

Лабораторная работа № 1. Влияние желчи на активность липазы

Принцип метода. Липаза ускоряет гидролиз нейтрального жира на глицерин и жирные кислоты (см. уравнение), что приводит к снижению pH и исчезновению розовой окраски индикатора – фенолфталеина. Активность панкреатических липаз, определяемых титрометрически, резко возрастает при действии желчных кислот.

Ход работы. Готовят три колбы – две опытные и одну контрольную. В них смешивают препарат липазы и субстрат (молоко или подсолнечное масло), как указано в таблице 1.

Таблица 1

Состав инкубационной смеси, мл	Опытные пробы		Контроль
	без желчи	с желчью
Молоко разведенное (1:10)	10	10	10
Глицериновый экстракт поджелудочной железы	1	1	1*
Раствор желчи	-	1	1
Вода	1	-	1
* Экстракт предварительно кипятят 10 мин для инактивации липаз.

Приготовленные инкубационные смеси тщательно перемешивают. Затем из каждой колбы отбирают по 1 мл смеси в заранее приготовленные стаканчики для титрования. Добавляют в каждый стаканчик по 1-2 капли раствора фенолфталеина и титруют 0,01М раствором NaOH до слабо-розового окрашивания. При первом титровании нейтрализуются органические кислоты – молочная и другие, которые присутствовали в молоке до начала действия липазы.

Оставшуюся в колбах смесь помещают в термостат (при t = 40C) и через определенные интервалы времени (15, 30, 90 мин) отбирают из каждой колбы (не извлекая их из термостата) по 2 мл смеси и титруют 0,01М раствором NaOH. Время титрования и объем израсходованного NaOH фиксируют в таблице 2.

Таблица 2

Время инкубации, мин	Объем (мл) 0,01М NaOH, пошедшего на титрование
	Опытные пробы		Контроль
	без желчи	с желчью
0
15
30
90

Результаты первого титрования, полученные до начала действия липаз, вычитают из результата последующих титрований.

На основании полученных данных строят график, где по оси абсцисс откладывают время (в минутах), а по оси ординат – активность липазы, выраженную объемом (мл) 0,01 М раствора NaOH, пошедшего на нейтрализацию жирных кислот, образовавшихся за данный отрезок времени. Сравнивают активность липазы в присутствии желчи и без нее.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

Лабораторная работа № 2. Эмульгирование жира

Принцип метода. Эмульгирование жира различными амфифильными веществами происходит благодаря их адсорбции на границе раздела двух фаз – гидрофобной и гидрофильной.

Ход работы. В пять пробирок вносят по 1 капле растительного масла. Затем в каждую пробирку соответственно приливают по 1-2 капли растворов NaOH, NaHCO₃, яичного белка, моющего средства и желчи. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и наблюдают образование эмульсии жира. Объясните механизм образования эмульсии жира в этих растворах и значение процесса эмульгирования.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.

Рекомендуемая литература

1. Кухта, В.К и др. Биологическая химия: учебник / В.К. Кухта, Т.С. Морозкина, Э.И. Олецкий, А.Д. Таганович; под ред. А.Д. Тагановича. – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – С. 193-213.

2. Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. Е.С. Северина. – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 370-391.

3. Филиппович, Ю. Б. Основы биохимии. – 4-е изд. – М.: Агар, 1999. – С. 370-390.

4. Николаев, А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 287-289, 297-307.

5. Марри Р. и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. –Т.1: С. 151–164, 256–262.

Дополнительная

6. Березов, Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. – М.: Медицина; 1998. – С. 363–372, 574–577.

Занятие 15

Липиды-2. Тканевой обмен липидов. Катаболизм триацилглицеролов. Метаболизм кетоновых тел

Цель занятия: изучить главные метаболические пути основных классов липидов (триацилглицеролов, фосфолипидов, жирных кислот, кетоновых тел, холестерола). Научиться определять содержание общих липидов крови.

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

1. Характеристику основных классов ЛП.

2. Метаболизм ЛП в норме.

3. Пути передачи гормонального сигнала на клетку (аденилатциклазный, инозитолтрифосфатный).

4. ЦТК, его энергетический баланс.

5. Структуру и функцию полиферментных комплексов (на примере пируват-ДГ).

Студент должен уметь:

1. Проводить исследование на колориметре.

Структура занятия